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https://drive.google.com/file/d/1iKN2D0bpovJfKbZ-ReeH8G0XpBmsnra1/view?usp=sharing
Fe de erratas:

-          En siembra y cultivo: aerobiosis y jarra de anaerobiosis.

-          En prueba de catalasa, descarto B. anthracis y sospecho del género Clostridium. Aun no corroboro C. septicum en ese momento.

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https://youtu.be/mrWZHKi_j0A

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Marcha bacteriologica

clostridium septicum

MUESTRANBS

OBSERVACIÓN DIRECTA

OBTENCIÓN DE CULTIVO

IDENTIFICACION DEGENERO Y ESPECIE

CARACTERISTICAS

OTRO DIAGNOSTICO

CONCLUCIÓN

MuestraEl informe del veterinario indicó que observó en un bovino una lesión del subcutáneo con edema sanguinolento, también aclaró que este cuadro se presenta en varios de los animales del mismo rodeo, y cabe destacar que no se a registrado otro caso similar en la zona geográfica donde se encuentra el establecimiento. Al laboratorio sería ideal que la muestra sea proveniente de un bovino afectado y muerto, y poder tomar una muestra del tejido afectado, al no ser esto posible el veterinario procedió a realizar una punción en la zona afectada, enviando una muestra líquida al laboratorio. Esta muestra no solo nos va a servir para verificar la sospecha del veterinario, que se trata de clostridium septicum, sino también para descartar a bacillus anthracis,causante también de patologías similares.Nivel de bioseguridadSegún las dos posibilidades que tenemos, de haber diferencias en los NBS, vamos a establecer el mayor, ya que este va a abarcar al los requerimientos del de menor nivel de seguridad. En el caso de clostridium septicum, este va a requerir un nivel de bioseguridad 2, ya que se trata de un agente que puede producir enfermedad en el ser humano y en los animales, tiene un riesgo individual alto, un riesgo comunitario moderado y se va a trabajar con grandes cantidades de bacterias. Y por el otro lado tenemos a bacillus anthracis, que es zoonótica, causa una enfermedad endémica en nuestro país, transmitiendo se por vía aerógena, heridas o cutánea. Esta bacteria va a requerir un nivel de bioseguridad 3, por ende vamos a trabajar en bajo los parámetros estipulados de un laboratorio con ese nivel de bioseguridad. Se va a trabajar dentro del laboratorio con delantal, botas, mameluco, guantes, protección facial y una cabina de eflujo laminar

Observación directaVamos a realizar la técnica de tinción de Gram, con su correspondientes pasos, la tinción de gram consta de un colorante primario (cristal violeta), luego una decoloración con alcohol (paso más importante en la coloración) y por último un color de contraste como la safranina, esta coloración nos aporta información de la pared celular además de su morfología. vamos a tomar una porción de la muestra y vamos a proceder a realizar todo lo mencionado anteriormente.Luego de estos pasos, lo que observamos fueron bacilos gram positivos, pleomórfico, que presenta esporas ovales, terminales y subterminales.A esta altura todavía no estamos con posibilidades de descartar la otra posibilidad (bacillus anthracis).

AislamientoClostridium septicum es un microorganismo exigente, por lo que en este punto, vamos a seguir las exigencias del mismo.El medio de cultivo que vamos a elegir es un medio enriquecido, como lo es el agar sangre, este va a estar suplementado con vitamina K y cistina o heminaIncubaciónVamos a incubar en una atmósfera anaerobia, ya queclostridium septicum es anaerobio, se va a incubar durante 24 horas, gracias a su rápido desarrollo, en una jarra de anaerobiosis con una mezcla de gases, esta consiste en un 85% de nitrógeno, 10% de hidrógeno y un 5% de dióxido de carbonoObtencióndel cultivoPasadas las 24 horas al observar el cultivo vamos a ver, fuera del microscopio, la formación de colonias pequeñas y planas, de color grisáceo o más bien blanco, rugosas y con un halo como consecuencia de la hemólisis. luego tomamos una muestra de nuestro cultivo y procedemos a hacer la tecnica de tincion de gram, y luego al mirar por el microscopio confirmamos, al ver bacilos gram + que fueron incubados en una atmósfera anaerobia. la formación de este halo hemolítico es característica de los clostridium, no así de bacillus anthracis, igualmente no vamos a descartar aún la posibilidad de que pueda ser.

Identificación degéneroPara la identificación de género, vamos a realizar primero la prueba de catalasa, dando esta como resultado negativo, a esta altura podemos descartar la posibilidad de que sea bacillus anthracis, ya que este en la prueba de catalasa da positivo. en segundo lugar vamos a realizar la prueba de oxidasa, esta también va a dar negativo. podemos confirmar entonces que estamos en presencia del género clostridium.Identificación de especiePara la identificación de especie vamos a realizar una batería de pruebas, esta consiste en la fermentación de hidratos de carbono +, lactosa +, gelatinasa +, H2S +, movilidad en medio sólido ++, indol -, ureasa -, lecitinasa -, lipasa - y sacarosa -.

Clostridium SepticumEste microorganismo está dentro de los clostridium histotoxicos, presenta esporulaciones ovales subterminales y terminales, tiene la característica de ser muy móvil y de un rápido desarrollo. Va a ser el culpable de la gangrena gaseosa y si vía de ingreso al ser individuo es mediante heridas en la piel.El factor de virulencia en este género es mediante la suba de proteínas con actividad biológica, estas se denominan toxinas, en el caso de C. septicum, va a producir toxinas llamadas mayores, estas son, las alfa (letal, necrotizante y hemolítica), las beta (ADNasa y leucocidasa), gamma (hialuronidasa) y por último las delta (hemolisis lábil al O2)

Se podria haber realizado otro tipo de diagnostico, esta tecnica se llama ELISA, se realiza in vitro y se utiliza para detectar la reaccion antigeno-anticuerpo

Si el ganado continúa con vida se procede a un antibiograma por difusión en medio agar Muller Hilton y al realizar los halos de inhibición se obtuvo sensibilidad a los betalactámicos, se aconseja que utilice la penicilina siendo el tratamiento habitual para edemas y es eficaz en más del 80% de los casos. También se le aconseja separar las vacas que aún no han sido infectadas para impedir el contagio mientras se realiza la vacuna, una vacuna polivalente que además sirve para otras especies de Clostridium,estas son creadas con bacterias inactivadas, toxoides inactivados, o ambas.

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clostridium septicum by Tomas Reynal on Genially

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Marcha bacteriologica clostridium septicum MUESTRANBS OBSERVACIÓN DIRECTA OBTENCIÓN DE CULTIVO IDENTIFICACION DEGENERO Y ESPECIE CARACTERISTICAS OTRO DIAGNOSTICO CONCLUCIÓN MuestraEl informe del veterinario indicó que observó en un bovino una lesión del subcutáneo con edema sanguinolento, también aclaró que este cuadro se presenta en varios de los animales del mismo rodeo, y cabe destacar que no se a registrado otro caso similar en la zona geográfica donde se encuentra el establecimiento.

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Marcha Bacteriológica

Muestra

Staphylococcus pseudintermedius

El veterinario envía allaboratorio un hisopadode una muestra de lesión dérmica superficial infectada de un canino. Por las características de la lesión el veterinario sospecha de S. pseudintermedius como causante, pero quiere descartar que se trate de Streptococcus spp.

Bioseguridad

Se trabajarácon un nivel de bioseguridadde tipo 2,sin necesidad decabina de seguridad.

1. Observación directa

Previo a la OD se procede a la suspensión de la muestra en solución fisiológica.Luego se lleva a cabo una tinción de Gram.Se logran observar cocos Gram positivos y otras células.

2. Cultivo

Se da esta elección de cultivo porque aunque nuestra principal sospecha es S. pseudintermedius, microorganismo no exigente,queremos descartar Streptococcus spp,que si es un m.o exigente.Por lo tanto se trabaja con las condiciones que requiere el género más exigente.

Medio de cultivo: Agar Sangre.Atmósfera: con reducción parcial del oxígeno.Tiempo: 48-72hs.Temperatura: 37°C.

Observación macroscópica

Al cabo de 24hs se lograver el desarrollo decolonias.Las coloniasobservadasson de 2-3mm,blanco-grisáceas y conunpequeño halo dehemólisis.

Observación microscópica

En la observación con tinción de Gram se observan cocos GRAM +.Estos cocos GRAM + se encuentran en predominio pero no en pureza.Debidoa esto se procedea realizar un reaislamiento (REA).Se puede llevar a caboenunmedio simple comoagartripteína soya, quenospermite distinguir sies una bacteria exigente o no exigente, en paralelo en un Agar Sagre, por si la bacteria es exigente.

Problema 2

Siembra por método agotamiento en superficie en medio de cultivo Agar Sangre.

3. Pruebas Bioquímicas

La primer prueba que se realiza es la CATALASA. En nuestrocaso dio positiva, porlo tanto sedescartaStreptococcus spp.

Para que quede determinado el género se realiza la prueba OF de la glucosa.

Identificación de género:

Coa

Catalasa (+).OF: oxida y fermenta.

Para la determinación de la especie, se debe realizar la prueba de COAGULASA. En nuestro caso dio positiva, por lo tanto se descartan todas las especies coagulasas negativas.Luego realizamos las pruebas bioquímicas para diferenciar a las especies coagulasa + y variable.

Identificación de especie:

D-manitol anaerobiosis (+)Voges Proskauer (-)Utilización de azúcares: sacarosa (+), trethalosa (+) y xilosa(-).

Podemos comprobar que se trata de Staphylococcus pseudintermedius.

Factores de virulenciade

Staphylococcus pseudintermedius

Componentes de superficie:

Ácidos teicoicos.Factor de agregación: cumpling factor.Biofilm.

Enzimas:

Coagulasa.Catalasa.Hialuronidasa.Lipasa.Fibrolisinas.B-lactamasas

Exotoxinas:

Actividad sobre membrana: HEMOLISINAS

toxina alfatoxina betatoxina gammaleucocidina de Panton Valentine.

Actividad de superantígenos:

enterotoxinas.toxinas exfoliativas.toxinas del sindrome de choque térmico.

4. Antibiograma

Para esta especie esimportante evaluarlameticilino-resistencia.Resistente a lapenicilina, a laoxacilina(metilo-resistente) y a las fluoroquinolonas.Sensible a las sulfamidas.

5. Profilaxis

Los Staphylococcus se encuentran ubicados en la piel y muscosas, es frecuente su introducción a traves de las soluciones de continuidad de la piel. Una limpieza prolija de la herida con jabón germicida y la aplicación de un antiséptico previene la infección.Es difcil la erradicación de los Staphylococcus patógenos deanimales infectados, debido a que presentan la capacidad de desarrollar resistencia a la mayoría de los antimicrobianos.Debido a la sensibilidadpor las sulfamidas, es el antibiotico útil para tratamiento.

Staphylococcus pseudintermedius

Click aquí

Staphylococcus pseudintermedius:Característicascelulares:Cocos esféricosGram +Agrupación en racimosInmóvilesSin cápsulaNo esporuladoCaracterísticas fisiológicas:No exigenteAnaerobio facultativoT° optima: 37°CTiempo de desarrollo: 24hsHalotoleranteCatalasa +OF: oxidan y fermentan la glucosaOxidasa -Coagulasa +HábitatEn piel y mucosas. Resistencia:son las bacterias no esporuladas más resistentes.DesecaciónConcentración NaCl 7,5%T°: 60°C-30minpH: 4-9Sensibles a:Sales biliaresCristal violetaDesinfectantes

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Marcha Bacteriológica II by ANONIMO on Genially

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Marcha Bacteriológica Muestra Staphylococcus pseudintermedius El veterinario envía allaboratorio un hisopadode una muestra de lesión dérmica superficial infectada de un canino. Por las características de la lesión el veterinario sospecha de S. pseudintermedius como causante, pero quiere descartar que se trate de Streptococcus spp.

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Marcha bacteriológica,iDENTIFICACIÓN,Prueba catalasa: resultado positivo. Se descarta que se trate de Streptococcusspp. ya que este es un MO catalasa negativo.Prueba de óxido-fermentación: ambos tubos viran al color amarillo, indicando un metabolismo fermentativo de la glucosa. Con este resultado se confirma que se trata del género Staphylococcusspp.Prueba coagulasa: resultado positivoPrueba de Voges Proeskauer (VP), proteína A y fermentación de azúcares: VP negativo, Prot. A negativo y formación de ácido de manita, de maltosa y de trehalosa.Con estos resultados se confirma que se trata de S. pseudintermedius.,Al tratarse de una infección en una lesión dérmica superficial la mejor muestra que podrá ser remitida al laboratorio bacteriológico para estalecer la presencia o no de ambos microorganismos es la de un hisopado de la zona dañada, transportado en un medio Stuart.,Ambos microrganismos en cuestión se pueden transmitir por contacto directo y por vía aerógena, son zoonóticos y se comportan como patógenos oportunistas. Por estas razones, el nivel de bioseguridad con el que debe contar el laboratorio es el 2.,Observación directa,Primero se coloca el hisopo en un tubo con solución fisiológica estéril y se homogeiniza. Luego se toma una alicuota de la suspensión con un ansa, se la extiende sobre un portaobjetos y se realiza la tinción de Gram.Se observan cocos Gram positivos en una densidad moderada.,Siembra,Al ser Staphylococcus pseudintermediusun microorganismo no exigente y Streptococcus spp. un microorganismo exigente se decide sembrar, por agotamiento en superficie, en un medio simple y en otro medio enriquecido, agar cerebro corazón y agar sangre respectivamente. Como ambos patógenos son anaerobios facultativos y mesófilos, se decide realizar los cultivos en atmósferas aerobias a 37°C. Dentro de las primeras 18-24 hs ya se empieza a observar desarrollo de colonias, por lo tanto se podría comenzar a descartar la idea de que se trate de Streptococcus spp. ya que este microorganismo tiene un tiempo de desarrollo de 24-72hs.,Se observa el desarrollo de un mismo tipo de colonias en ambos medios de cultivo. Nuevamente, se podría descartar la idea de que se trate de Streptococcus spp. ya que este microorganismo es exigente y no se desarrolla en medios simples.Al observar las colonias estas tienen un tamaño de 1-2 mm, una superficie lisa, bordes netos y no pigmentadas. Estas características culturales coinciden con las de Staphylococcus pseudintermedius y no con Streptococcus spp. ya que este último difiere al desarrollar colonias generalmente más pequeñas y translúcidas.,Observación macroscópica,REA,Se trata de un cultivo en pureza y no se realiza REA.,Observación microscópica,Se toma una alicuota representativa de las colonias y serealiza la tinción de Gram. Se observan cocos Gram positivos agrupados en forma de "racimos de uva", agrupación característica de Staphylococcus pseudintermedius.Por su parteStreptococcusspp. se agrupa de a pares o en cadenas de variable longitud.,Serealiza un antibiograma cualitativo por difusión: se toma un alicuota representativa de una de las colonias y se siembra mediante diseminación en un medio Muller-Hilton con distintos discos de antibióticos, se cultiva y se observa que solo presenta resistencia a la penicilina debido a laproducción de beta lactamasas o alteraciones en proteína ligandos a la penicilina.Entonces, se puede llevar a cabo un tratmiento con un antimicrobiano que no se penicilina.,Otros tipos de diagnósticos...,Antibiograma

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Marcha bacteriológica by Pipita on Genially

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Marcha bacteriológica,iDENTIFICACIÓN,Prueba catalasa: resultado positivo. Se descarta que se trate de Streptococcusspp. ya que este es un MO catalasa negativo.Prueba de óxido-fermentación: ambos tubos viran al color amarillo, indicando un metabolismo fermentativo de la glucosa. Con este resultado se confirma que se trata del género Staphylococcusspp.Prueba coagulasa: resultado positivoPrueba de Voges Proeskauer (VP), proteína A y fermentación de azúcares: VP negativo, Prot.

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El veterinario indica que observó una lesión dérmica superficial infectada en un canino. En el hogar es el único animal pero convive con una persona inmunosuprimida. Se sospecha de S. pseudointermedius y se quiere descartarStreptococcus spp. Se utiliza una muestra dérmica por la zona de la lesión y porque se pueden encontrar ambos microorganismos sospechosos en este tipo de muestra. Se obtiene por hisopado.

FACTORES DE VIRULENCIA

Marchabacteriologica

S. pseudointermedius: Pared celular: Estimula la producción de interleuquinas, de anticuerpos opsónicos en monocitos y agregación de leucocitos produciendo abscesos. Los Acidos teicoicos median en la colonización a las superficies mucosas del hospedador.Proteína A: produce la agregación de cocos.Adhesinas: Proteínas de union con la fibrina, colágeno, fibronectina y proteínas de resistencia a la oxidación.Enzimas extracelulares: Coagulasa,altera la capacidad fagocítica de macrófagos. Catalasa, convierte el peróxido de hidrógeno en agua y oxígeno, Hialurodinasa, facilita la diseminación de la infección, Lipasa, contribuye a la invasión en zonas lipídicas. Termonucleasa, contribuye a la capacidad invasiva. Fibrinolisina, disuelve la fibrina aumentando la invasión del mo. Beta-lactamasas, le dan resisitencia a los beta-lactámicos.Toxinas: Lashemolisinas poducen actividad sobre las membranas celulares produciendo lisis celular, se denominan toxinas alfa, beta, delta, gamma y leucocidina. Además de las hemolisinas, están presentes las toxinas con actividad de superantígenos que pueden inducir la activación inespecífica de macrófagos y de las células T aumentando la susceptibilidad a los lipopolisacáridos bacterianos, dentro de estas toxinas se encuentran las enterotoxinas, las toxinas exfoliativas y las toxinas de choque tóxico I.Biofilm: Impide la acción de los anticuerposStreptococcus spp.:Cápsula: Algunas especies la poseen. Brinda propiedades fagocíticas.Ac. lipoteicoico: Actúan mediando la adhesión en células epiteliales.Proteína M: Posee propiedades antifagocíticas.Hemolisinas: actúan las estrepolisinas O y S produciendo hemólisis.Fibrinolisina y Hialuronidasa.Estreptodornasa: despolimeriza el ADN, origina la viscosidad del pus.Toxina eritrogénica: Incluye a las exotoxinas pirógenas A,B y C.

ANTES DE COMENSAR A TRABAJAR! Se debe desinfectar la mesada, preparar los materiales ordenados en la mesada y encender mechero. Los materiales deben estar previemente limpios y esterilizados en autoclave.

Se trabaja con un NBS2 ya que es una muestra de diagnóstico. Puede enfermar tanto al hombre como a animales. El riesgo individual es moderado y el riesgo comunitario es bajo.

Se realiza Gram. Se observan cocos Gram positivos. La agrupación es en racimo de uvas. Puedo descartar que se trata de Streptococcus spp. porque en el REA hubo desarrollo en el medio no exigente y por la agrupación observada con Gram.

05

OBSERVACION MICROSCOPICA

Se realiza antibiograma cualitativo. Se observa resistente a la penicilina y oxacilina. Es sensible a vancomicina

07

antibiograma

La limpieza de la herida con jabón germicida y aplicación de antiséptico previene la infección En caso de abscesos y lesiones supuradas se tratan con drenaje y terapia antiséptica y antimicrobiana. La vancomicina es el antibiótico para el tratamiento.

medidas profilacticas

Se realizan las pruebas bioquímicas para conocer la actividad metabólica. Catalasa: positiva. OF: Se observa viraje en ambos tubos. Coagulasa: positiva. VP: negativo. Manitol: negativo. D-trehalosa: positivo. Prot A: negativo. Se trata S. pseudointermedius.

06

IDENTIFICACION

Todo los materiales descartables son descartados en bolsa de residuos patológicos. Los materiales reutilizables se esterilizan, se lavan, acondicionan y se esterilizan nuevamente en autoclave

04

rea

Se realiza el REA en Agar Sangre y Agar Tripteína de Soya. Se incuba a 37°C por 72 hs. Se observa desarrollo en los dos medios.

Se observan colonias de color blanco opaco, redondeadas, pequeñas y con una superficie lisa. Se observa hemolisis alrededor de las colonias. La cantidad de UFC/ml indican que la infección es significativa.

observacion de colonias

03

Se coloca la muestra en solución fisiológica para luego realizar. Se realiza la tinción de Gram para poder observar la composición de la pared celular, morfología y densidad. Se observan cocos Gram positivos.

OBSERVACION DIRECTA

01

Se realiza la siembra para obtener la propagación de los microorganismos en el medio adecuado. El S. pseudointermedius es no exigente peroStreptococcus spp.requiere de un medio exigente por lo tanto realizo la siembra en Agar Sangre. Se toma con ansa la muestra en solución fisiologica y se siembra por agotamiento en superficie. Se incuba a 37°C por 72 hs.

02

SIEMBRA

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Cocos gram pos, segundo parcial by Sabrina Mesuraco on Genially

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El veterinario indica que observó una lesión dérmica superficial infectada en un canino. En el hogar es el único animal pero convive con una persona inmunosuprimida. Se sospecha de S. pseudointermedius y se quiere descartarStreptococcus spp. Se utiliza una muestra dérmica por la zona de la lesión y porque se pueden encontrar ambos microorganismos sospechosos en este tipo de muestra.

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Marcha Bacteriologica

LOREM IPSUM DOLOR

muestra

2 observacion directa

4 observacion microscopica

6 antibiograma

1 nivel de bioseguridad

3 siembra/cultivo

5 pruebas bioquimicas

7 profilaxis y tratamiento

Protocolo:Indica que el veterinario observó una lesión dérmica superficial de un canino. Refiere que en el hogar es el unico animal y que convive con una persona inmunosuprimida.Sospecha: de Staphilococcus pseudointermedius.

muestras posibles deelecciónpara remitir al laboratorio:Hisopado superficial de lalesióncutáneay/oaspiraciónde la herida.medio de transporte:TRANSPORTE STUAR: El cual presenta sales y glicerofosfato de sodioque permite mantener la viabilidad de los microorganismos presentes en la muestra sin alterar la cantidad ni calidad.

Grupo de riesgo:2Nivel de bioseguridad:2En este tipo de laboratorio se va a trabajar con agentes que pueden producir enfermedad en el hombre como en los animales de manera accidental, pero que pueden ser contenidos por las normas de laboratorio y existiendo generalmente profilaxis o tratamiento eficaz. ya que según el protocolo que acompaña la muestra no hay casos de contagio hacia otro animal o humano, solo que hay una persona inmunosuprimida.Se trabajara al abrigo de la llama del mechero de Bunsen.Protección:

Paralaobservacióndirecta se empleara latinciónde GRAM.Observo cocos gram positivos , en baja carga, que pueden esta agrupados o aislados.Con la información obtenida, puedo decir que el agente patógenoen cuestión podría ser Staphilococcus spp, pero sin descartar a otros microorganismos Gram + como Streptococcus spp, Enterococcus spp, ni Corynebacterium spp( que si bien sonbacilos gram + pueden tomar forma de coco).TECNICA DE TINCION DE GRAM:1. extender2. secar3. fijar4.cristal violeta(1mnt)5.lavar6. lugol (1mnt)7. lavar8 alcohol ( 3o seg)9. lavar10.Safranina 1(mnt)11. lavar,secar y observar en el microscopio óptico con objetivo de inversión de 100x.Nota: la mesada fue desinfectada antes de realizar el procedimiento y el ansa fue esterilizada antes ydespuésde su uso, al igual que la boca de tubos de ensayo empleados.

Siembra:Se emplea latécnica por agotamiento en superficie con ansa calibrada.Cultivo:Medio solido enriquecido diferencial:Agar sangre,permite aislara MOs exigentes y detectar actividad hemolítica.si bien el MO que se sospecha es no exigente, hay otros que si lo son como por ejemplo : Streptococcus spp. por lo que alutilizareste medio nos aseguramos quetodos tengan la posibilidad de desarrollarse.EL MICROORGANISMOSOSPECHOSO ES MESÓFILO, NO EXIGENTE, AEROBIO O ANAEROBIO FACULTATIVO.INCUBACIÓN:estufa a una temperatura de 37°c,atmósferaaerobia,tiempo entre 24/72HSSeobservócolonias de 2-3mm, blanco-grisáceas y con un pequeño halo dehemólisis.

OBSERVACIÓNMICROSCÓPICA:Para la observación microscópica haremos una suspensión y luego se volverá a realizar la tinción de Gram con el fin de reforzar los resultados obtenidos en la observación directa.obtenciónde lasuspensión: Se pica UFC seleccionada del medio de cultivo con el ansa estéril y se lo suspende en cada tubo de ensayo con sc fisiológica, luego se homogeniza. El procedimiento se continua utilizando un ansa calibrada(esterilizada) para obtener del tubo una gota que se va a colocar en un portaobjeto, el cual va ser sometido al secado al abrigo de la llama quedando listo para realizarle una tinción de Gram. se observa cocos gram + agrupados en racimo.Este resultado sumado a su desarrollo en 24hs en AS, nos hace sospechar que se trata del genero Staphylococcus spp. pero debemos confirmarlo con el siguiente paso de la marcha.

IDENTIFICACIÓNDEGÉNERO:CATALASA:+. Permite descartar a cocos gram + Streptococcus spp. y Enterococcus. OF: +/+ ( fermentador).Permite descartar a los Micrococcus spp.COAGULASA: +. Permite dividir a los a los Staphylococcus en dos grupos: coagulasa +( ECP) y coagulasa - (ECN).IDENTIFICACION DE ESPECIE:VP: +PYR: +SACAROSA :+D-TREHALOSA :+D-XILOSA : -ONPG: +D-MANITOL ANAEROBIOSIS: -D-MANITOL AEROBIOSIS:DEBIL /GENERALMENTE - Con esta informaciónse llega a la conclusiónque se trata del Staphylococcus pseudointermedius!!!!!!

Antibiograma pordifusión:Con monodiscos de ATB en Agar Muller-Hinton.Losantibióticos(5)utilizados fueron:antibióticosresultadooxacilinaRtetraciclinaRpenicilinaRfluoroquinolonasSmupirocinaSNOTA:Para este paso se tuvo que llevar a cabo lapreparacióndelinóculo, siembra,colocaciónde los discos de ATB en placa,incubaciónyposteriorlectura de los resultados. Y todos estos pasos se realizan siguiendo las normas de bioseguridad al abrigo de la llama.

PROFILAXIS:Medidas que ayudan a evitar unainfecciónpor parte del agente e impedir supropagación:mantener manos limpias del dueño con agua yjabóno usar undesinfectantepara manos a base de alcohol.mantener las cortaduras y raspaduras de mascotas y humanos limpias y cubiertas con vendas hasta que sanen.evitar el contacto de las heridas por parte de humanos y animales.no compartirartículospersonales.mantener la higiene del lugar donde vive el animal.TRATAMIENTO:Usarlosantibióticossensible al microorganismos , vacunas( que puedensintetizarseconantígenosde la pared y capsula, obtenidos por medio de lisis bacteriana

TRANSPORTE STUART

Preparacióndel material de uso en el laboratorio:

cocos gram +

cocos gram +

TRATAMIENTO:Se recomienda el uso de MUPIROCINA PARA USO TOPICO Y LAS FLUOROQUINOLONAS PARA ADMINISTRACION ORAL Y USO SISTEMICO.FACTORES DE VIRULENCIA:COMPONENTES SUPERFICIALES:Estructurasde la pared celular,proteínasde superficie, adhesinas,formaciónde biofilm(algunas cepas) ymicrocápsula.ENZIMAS EXTRACELULARES:Coagulasa, catalasa, lipasa, hialuronidasa,termonucleasa,estafiloquinasa, b-lactamasa.EXOTOXINAS:hemolisinas(alfa,beta,delta,gamma) y leucocidina.Toxinas con actividad de suprantigeno: entorotoxina,toxina exfoliativa, TSST-1.

Otros tipos Diagnostico:Serologico:Para tipificar cepas a partir de susantígenosde pared y capsula.fagotipificacion:de cepas de Staphilococcus pseudointermedius con bacteriofagos especificos.pruebas moleculares: (PCR-RFLP):amplifica un fragmento de ADN de modo que resulte más fácil identificar al microorganismo causante de una enfermedad, en este caso porpor amplificación del genmecA .

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tp 2 marcha bacteriologica by rocio morales on Genially

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Marcha Bacteriologica LOREM IPSUM DOLOR muestra 2 observacion directa 4 observacion microscopica 6 antibiograma 1 nivel de bioseguridad 3 siembra/cultivo 5 pruebas bioquimicas 7 profilaxis y tratamiento Protocolo:Indica que el veterinario observó una lesión dérmica superficial de un canino. Refiere que en el hogar es el unico animal y que convive con una persona inmunosuprimida.Sospecha: de Staphilococcus pseudointermedius.

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MARCHA BACTERIOLOGICA

Se recibe una muestra de materia fecal en medio Cary Blair, el protocolo que acompaña la muestra indica que el veterinario observo diarrea acuosa profusa en aves ponedoras simultaneamente en todos los galpones de la granja y varios empleados de la misma presentaron sintomatologia similar. Sospecha de Campylobacter coli y pide que se descarte Salmonella Typhimurium

La muestra recibida es la adecuada para poder aislar tanto a Campylobacter coli como a Salmonella Typhimurium. Fue remitida en un medio de transporte adecuado.

Tecnica de GRAM

Tomamos el hisopo del medio Cary Blair y lo sumergimos en solución fisiológica para formar una suspensión, luego se toma una gota de dicha suspensión y se coloca en un porta objetos, realizamos el EXTENDIDO, SECADO y FIJADO para luego poder realizar la coloración de GRAM siguiendo cada paso conla técnica correspondiente, prestando especial atención al TIEMPO DE DECOLORACION, este es el paso clave, ya que define si se arrastra o no el colorante primario.Se observan abundantes bacilos de color rosa, es decir las bacterias arrastraron el colorante primario (cristal violeta) y tomaron el colorante de contraste (safranina) sabemos entonces que son bacterias GRAM -

OBSERVACIÓN DIRECTA

01

Es importante que las muestras se procesen lo antes posible (no mas de 48/72 hs) ya que sospechamos que estamos trabajando con bacterias microaerófilas estrictas y el oxígeno atmosférico las perjudica, por lo tanto también se puede ver perjudicado nuestro diagnostico!

MEDIO SAlMONELLA SHIGELLA

Como la muestra que recibimos es materia fecal, previamente debemos realizar un enriquecimiento selectivo en caldo selenito a 42,5°C por 24 hs, luego tomamos un inóculo y lo vamos a sembrar por agotamiento en superficie en un medio selectivo diferencial, en este caso AGAR SALMONELLA SHIGELLA,a 37°C durante 24 hs.NO SE OBSERVA DESARROLLO,por lo tanto, podemos descartar Salmonella Typhimurium.

DOS SIEMBRAS SIMULTANEAS

Al tratarse de dos microorganismos con características culturales diferentes, debemos realizar dos siembras en distintos medios de cultivo, luego de incubarlas observaremos en cual hubo desarrollo y podremos confirmar o no la sospecha del veterinario.

SIEMBRA Y AISLAMIENTO

02

Para identificar el género

- Oxido/Fermentación: (-) son ASACAROLITICAS, no fermentan ni oxidan hidratos de carbono.- Catalasa: (+)- Oxidasa: (+)- Reducen nitratos a nitritos- Crecimiento en NaCl 3,5%

Pruebas bioquimicas

03

MEDIO PRESTON

Vamos a sembrar por agotamiento en superficie en una placa de Petri con medio Preston, es un medio selectivo que contiene rifampicina y nistatina para evitar el crecimiento de otros microorganismos que pueden estar presentes en materia fecal, agregamos cefalosporina, que permite solo el aislamiento de especies termófilas (como es el caso de Campylobacter coli).Cultivamos en atmósfera microaerófila (6% de Oxígeno, 10% Dióxido de Carbono y el resto de Nitrógeno) a 42°C, dadas estas condiciones, Campylobacter coli desarrolla en 18 hs.Observación macroscópica:Se observan colonias pequeñas de 1mm aprox., con forma de gotas de rocío, redondeadas, elevadas, lisas, translucidas y de pigmento color rosado, esta ultima característica es típica de las colonias de Campylobacter coli.Observación microscópica: Realizamos una tinción de GRAM, y observamos nuevamente bacilos GRAM - pero los microorganismos se tiñen de un rosa muy claro, para poder observar mejor a los microorganismos realizamos una TINCIÓN VAGO, la misma es una tinción simple que utiliza un solo colorante, el cristal violeta.Observamos entonces bacilos curvos en forma de "S" de entre 0,2 y 0,8 micras de ancho x 0,5 y 5 micras de largo de color violeta.

Para identificar la especie

Campylobacter spp. se divide en especies mesófilas y especies termófilas, con los datos obtenidos hasta el momento sabemos que estamos trabajando con un microorganismo perteneciente al grupotermófilo, ya que desarrollo a 42°C. Entonces, podríamos estar en presencia de Campylobacter coli,tal como sospecha el veterinario o Campylobacter jejuni.Ambos responsables de cuadros entéricos.Para saber con que microorganismo estamos trabajando, realizaremos las siguientes pruebas bioquímicas:- Hidrólisis del Indoxil acetato (+)- Ácido Nalidíxico: Sensible- Cefalotina: Resistente- Produccion de SH2: (+)- Hidrólisis del hipurato: (-).La hidrólisis del hipurato (-) y la produccion de SH2 (+) diferencia Campylobacter colide Campylobacter jejuni ya que esta ultima es (+) a la hidrólisis del hipurato.BIOTIPIFICACION:Para diferenciar a Campylobacter coli en biotipo I y biotipo II se utiliza la prueba de DNAsa, la cual da (-) para el Biotipo I y (+) para el Biotipo II

Factores de patogenicidad

- Gracias a que posee un flagelo polar y a su movimiento a manera de "sacacorchos", Campylobacter colipuede colonizar el intestino, moviéndose dentro del moco que recubre el epitelio intestinal.- El flagelo y el lipopolisacárido actúan como adhesinas, permitiendo que el microorganismo seadhiera y penetre el enterocito.-Toxinas: endotoxinas, citotoxinas y enterotoxina lábil al calor.- Resistencia a la tetraciclina mediada por plásmidos.- Microcápsula o cápsula S, que evita la fagocitosis.- Sideróforos que obtienen hierro de la hemoglobina

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No esta indicado tratar con antibiótico, ya que el cuadro diarreico se autolimita, pero en caso de ser necesario, responde bien a la eritromicina, se debe tener en cuenta que la administración innecesaria de antibióticos puede ser contraproducente ya que se incrementa la resistencia a los mismos. Otro factor a tener en cuenta es que especies como c. jejuniy c. coliproducen beta-lactamasas por lo que suelen presentar resistencia a los antibióticos beta-lactamicos.Se recomienda entonces, para reducir el grado de contaminación de campilobacterias en las aves de corral, la administración de flora normal a pollitos recién eclosionados en la planta de incubación. Como la transmisión es fecal-oral, se recomienda que los trabajadores de la granja adopten medidas de higiene como lavarse correctamente las manos luego de estar en contacto con las aves.Esta bacteria es susceptible a hipoclorito de sodio al 1%, yodo, fenol, formaldehido y glutaraldehido al 2%. Tambien se inactiva por calor humedo a 121°C por 15 minutos y al calor seco a 160°C por una hora.

Al tratarse de microorganismos que pueden producir enfermedad tanto en animales como en humanos trabajaremoscon unnivel de Bioseguridad 2, ya que el riesgo individual es moderado y el riesgo comunitario bajo, cumpliendo con todos los requerimientos para garantizar la bioseguridad, incluyendo cada uno de los pasos del ciclo del material. Se debe evitar la producción de aerosoles infecciosos mediante prácticas cuidadosas, el acceso al laboratorio debe estar reglamentado y con las puertas cerradas que indiquen "RIESGO BIOLOGICO", se debe notificar cualquier accidente que suceda.

Otros tipos de diagnóstico para Campylobacter coli:-Aglutinación mediada por anticuerpos:Consiste en la aplicación de partículas de látex pegadas a inmunoglobulinas contra diferentes especies de Campylobacter,con el objetivo de obtener un diagnóstico preliminar y presuntivo.- Técnicas de biología molecular:PCR: determina la presencia del patógeno al detectar un fragmento de su ADNSONDAS DE ACIDOS NUCLEICOS: detecta fragmentos de material genético del patógeno por complementariedad de pequeños fragmentos de ADN sintetizados en el laboratorio.RFLP: digestión con enzimas de de restricciónPFGE: electroforesis con campo pulsado.Estas técnicas se caracterizan por ser muy precisas pero también mucho más costosas y requieren de un equipamiento especial en el laboratorio.

Características celulares deCampylobacter spp.- Bacilos curvos Gram - en forma de "S"- Tamaño: 0,2-0,8 micras x 0,5-5 micras- Afinidad tintorial: Gram y Vago- Móviles: flagelos únicos mas largos que el soma bacteriano, que nacen de una concavidad crateriforme en disposición monótrica (de un solo polo) o anfítrica (de ambos polos).- Microcápsula- Sin fimbrias- No esporulado

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Agustina Lago by aguslago.96 on Genially

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MARCHA BACTERIOLOGICA Se recibe una muestra de materia fecal en medio Cary Blair, el protocolo que acompaña la muestra indica que el veterinario observo diarrea acuosa profusa en aves ponedoras simultaneamente en todos los galpones de la granja y varios empleados de la misma presentaron sintomatologia similar.

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Problema 3

Se recibió una muestra de heces de aveen frasco estéril con tapa a rosca dejando una pequeña cámara de aire, en triple envase con material absorbente, para evitar posibles pérdidas, siguiendo protocolos de transporte y tomando las medidas correspondientes.El protocolo que acompaña la muestra, indica que el veterinario observó diarrea acuosa en aves ponedoras. Refiere que este problema se presentó simultáneamente en todos los galpones de la granja y lo mismo ocurrió en otros establecimientos aledaños. Además, varios empleados de la granja han manifestado una sintomatología similar.El veterinario solicita se le informe si se trata deCampylobacter colique es su sospecha, descartandoSalmonella thyphimurium.

Observación Directa

Siembra y Aislamiento

Observación de colonias

Observación microscópica

Pruebas bioquímicas

Profilaxis

Tratamiento

Se trabaja con un nivel de bioseguridad 2, ya que el riesgo individual es moderado, no existe riesgo de producción de aerosoles ni se trabajará con grandes cantidades de bacterias, y el riesgo comunitario bajo.

¿Son gram negativos o gram positivos? ¿Qué forma tienen los microorganismos?Los microorganismos se observan en color rosado, es decir que se tiñeron con el colorante de contraste, la safranina, por lo que podemos afirmar que son gram negativos.

OBSERVACIÓN DIRECTASe realiza coloración de Gram para diferenciar los microorganismos presentes en la muestra.Se toma una alícuota de la muestra con un ansa previamente esterilizada con llama de mechero y se realiza una suspensión en solución fisiológica.Se coloca una gota de la suspensión en un porta objetos y realizo el extendido, secado y fijado de la muestra para luego realizar la tinción aplicando la técnica correspondiente.Se observa una gran cantidad de microoganismos encolor rosado, es decir, gram negativos como es de esperarse.

Se procede a realizar dos siembras para confirmar la sospecha de Campylobacteriosis, y descartar Salmonelosis.Siembra 1:C. coliDebido a la consistencia de la muestra, el aislamiento se realiza de medio líquido a medio sólido.Se siembra mediante el método de agotamiento en superficie sobre una placa con medio Preston con el agregado de nistatina y cefalosporinas.Se elige este medio ya que es un medio inhibidor que posee antibióticos como rifampicina.El agregado de nistatina y cefalosporinas es para volverlo aún más selectivo, buscando aislar sólo las especies termófilas del género Campylobacter.La incubación se realiza a 42°C en una atmosfera microaerófila con un 6% de oxígeno, 10% de dióxido de carbono y el resto de nitrógeno e hidrógeno, por al menos 18 horas.Siembra2:S. typhimuriumDebido a que partimos de materia fecal, para aislar este microorganismo se realiza primero un enriquecimiento selectivo y luego se toma un inoculo de esta siembra y se lo aisla en un medio selectivo diferencial.El enriquecimiento selectivo se realiza mediante la toma de una alícuota de la muestra con un ansa previamente esterilizada que se siembra en caldo selenito. Se incuba por 24 horas a 42,5°C en aerobiosis y se prosigue realizando el aislamiento en agar Salmonella-Shigella.La siembra se realiza por agotamiento en superficie y se incuba por 24hs a 37°C en aerobiosis.

OBSERVACIÓN DE COLONIAS EN LA PLACA 1:C. coliSe observan colonias pequeñas (1mm aprox.), con aspecto de gotas de rocio, redondeadas, elevadas lisas, translucidas y de pigmento color rosado.El hecho de que se observen en color rosa nos hace sospechar de que el microorganismo aislado es Campylobacter coliOBSERVACIÓN DE COLONIAS EN LA PLACA 2:S. typhimuriumSe esperaría que se generen colonias incoloras con un centro negro por la producción de SH2, pero no se observa desarrollo alguno.Debido a esto se sospecha que la bacteria que esta causando la patología en cuestión no esSalmonella typhimurium

OBSERVACIÓN MICROSCÓPICAComo el microorganismo fue aislado en un medio selectivo-diferencial específico para bacterias del género Campylobactercon características termófilas, se procede a realizar la tinción de Vago, ya que por más que estas bacterias se caractericen por ser Gram negativas, su tinción con el colorante de contraste es muy pobre.La tinción de Vago es una tinción simple para la que solo se utiliza cristal violeta.Se observan bacilos curvos, de aproximadamente 0,2-0,5micras de ancho y 0,5-5micras de largo.Mediante una observación con microscopio de contraste de fase de la preparación en fresco se confirma la movilidad distintiva del género en forma de tirabuzón o sacacorchos.

PRUEBAS BIOQUÍMICASOXIDASA+CATALASA+OXIDO - FERMENTACIÓNNo concluyente = AsacarolíticoINDOL-REDUCCIÓN DE NITRATOS A NITRITOS+CRECIMIENTO EN PRESENCIA DE NaCl 3,5%+BIOTIPIFICACIÓNCATALASA+HIDRÓLISIS DE INDOXIL ACETATO+ÁCIDO NALIDÍXICO (NAL)SCEFALOTONINA (CEF) de 30microgramosRLo que nos da un indicio de estar en presencia de C. coli o C. jejuniPRODUCCIÓN DE ÁCIDO SULFHÍDRICO-PRODUCCIÓN DE DNasa-PRODUCCIÓN DE HIPURATO DE SODIO-Luego de estas tres pruebas queda descartada C. jejuni, y se confirma C. coli biotipo IAl identificar a la bacteria como Campylobacter coli, queda descartada Salmonella typhimurium como causante de la enfermedad.

ProfilaxisPara reducir el grado de contaminación de las campilobacterias termófilicas en las aves de corral es recomendable la administración oral de flora normal a pollitos recién eclosionados en la planta de incubación.Se conoce que puede sobrevivir en heces por lo que se recomienda la desinfección del lugar donde se alojan los pollos.Este patógeno e sensible a varios agentes físicos y químicos como calor, pH bajo, radiación gamma, desinfectantes o ambientes secos. Se inactiva por su sensibilidad al calor húmedo a 121ºC por al menos 15 minutos, y al calor seco a 160-170ºC por lo menos una hora.Permanecen viables durante meses a temperaturas menores o iguales a -20°C.

TratamientoNo existe en la actualidad una vacuna que prevenga la enfermedad, y en la mayoría de los casos se considera innecesaria la aplicación de antimicrobianos ya que es de corta duración y se autolimita.Pero en caso de ser necesario se emplean macrólidos (eritromicina) y fluoroquilonas, tener en cuenta que el uso de antimicrobianos genera controversia debido al incremento en la resistencia a estos fármacos, utilizados en animales para producción de alimentos, que surgió en la última década.También son sensibles a tetraciclinas y aminoglucosidos.Tener en cuenta que esta especie al igual que C. jejuniproduce beta-lactamasas, por lo que suele presentar resistencia a beta-lactámicos, incluidas las cefalosporinas.

La muestra ideal en este caso es materia fecal pero también podría remitirse un hisopo en medio Cary - Blair.

Factores de agresión que se han considerado Para Salmonella typhimurium:Es unparásito intracelular y patógeno primario, que por medio de los macrófagos donde se encuentra se disemina a todo el organismo afectado vía linfa y sangrePara Campylobacter coli:Endotoxinas, que le aporta actividad endotóxica típica de enterobacteriasPilis perítricos, facilitan la colonización ya que promueven la adherenciaEnterotoxina lábil al calor, que produce redondeamiento de las células humorales de la glándula adrenal.Resistencia a antibióticos mediada por plásmidos, como tetraciclina.Microcápsula o capa S, que evita la fagocitosis.Motilidad por la presencia de flagelos, que le permite invadir, adherirse y penetrar.Estructura de antígeno O del LPS contiene ácido siálico similar al observado en gangliósidos, le permite invadir, adherirse y penetrar.Producen proteínas citotóxicas que intervienen con el desarrollo de enfermedades

Para poder aislar Salmonella spp. las muestras de elección son:Muestra de sangre tomada durante el pico febril, inoculada en un frasco con medio especial para hemocultivo en proporción 1:10Muestra de orina o material de abscesosMuestra fresca de heces de humanos o de animales (muestra elegida)Hisopado rectal, a fin de lograr muestras mucoides y/o sanguinolentasAlimentos tanto de humano como de animales colocando 25gr del alimento problema en caldo de preenriquecimiento (225ml caldo lactosado, agua peptonada buferada).Agua

Para aislarCampylobacter spp. las muestras de elección son:Heces en frascos con tapa a rosca dejando una pequeña cámara de aire de modo que se genere una atmosfera microaerofilica por acción de los microorganismos fecales que permite la conservación de estas bacterias hasta 6 días (muestra elegida)Hisopado de materia fecal en medio semisólido de Cary y Blair modificado por Blaser, con reducida cantidad de agar (1,6g/l)Esmegma prepucial de los machos afectados transportado en solución fisiológica formolada o fenolada para realizar inmunofluorescencia directa.Esmegma prepucial de toros afectados transportado en TEM.Mucus cervicovaginal de las hembras que presenten mortalidad embrionaria, recomendándose realizar un preenriquecimiento a la hora de la siembra.Contenido del abomaso y/o órganos parenquimatosos, en especial el pulmón, de los fetos abortados que de ser extraidos asépticamente pueden cultivarse directamente en agar sangre.Placenta

OTROS TIPOS DE DIÁGNOSTICO PARA C. coli:Aglutinación mediada por anticuerposConsiste en la utilización de partículas de látex pegadas a inmunoglobulinas contra diferentes especies de Campylobactercon el objetivo de obtener un diagnóstico preliminar y presuntivo.TÉCNICAS DE BIOLOGÍA MOLECULAR Se caracterizan por ser de gran precisión, ser caras y requerir de un equipamiento especial en el laboratorio.PCR determina la presencia del patógeno al detectar un fragmento de su material genético.SONDAS DE ÁCIDOS NUCLEICOS detecta fragmentos del material genético del patógeno por complementariedad de los pequeños fragmentos de ADN sintetizados en el laboratorio.Otras técnicas como la digestión con diferentes enzimas de restricción (RFLP) y la electroforesis con campo pulsado (PFGE).

CARACTERÍSTICAS DECampylobacter coliForma: Bacilos curvos (S, gaviota o espirales)Tamaño: 0,2-0,5micras x 0,5-5micrasAfinidad tintorial: Gram - / VagoCápsula: Si (microcápsula)Movilidad: SiFimbrias: SiEsporulados: NoMetabolismo: Ciclo de acido tricarboxilicos, aminoácidos, asacarolíticosRelación con el O2: MicroaerofilosExigentes: SiTiempo de desarrollo: 18hs a 42°C, 3 a 5 días a 37°CTemperatura óptima: 42°C, especie termófila

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Problema 3 parcial 2 by sofiponsi on Genially

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Problema 3 Se recibió una muestra de heces de aveen frasco estéril con tapa a rosca dejando una pequeña cámara de aire, en triple envase con material absorbente, para evitar posibles pérdidas, siguiendo protocolos de transporte y tomando las medidas correspondientes.El protocolo que acompaña la muestra, indica que el veterinario observó diarrea acuosa en aves ponedoras.