# data[].attributes.body
Conosciamo i geni associati all’MHC I e II: A,B e C per il tipo I e DP, DQ e DR.
E’ fondamentale conoscere il sistema HLA del paziente che deve subire un trapianto d’organo per studiare la compatibilità con il donatore. In caso di mancanza di compatibilità, gli anticorpi del ricevente attaccano le cellule dell’organo dell’ospite. La compatibilità tra fratelli è 1:4, nella popolazione il rapporto è circa 1:100.000. Oggi grazie all’utilizzo di banche dati è relativamente facile trovare un donatore anche non all’interno della propria famiglia.
Utile anche per capire la predisposizione alla celiachia.

Per studiare HLA ci sono 2 approci:
1)Sierologia: si studia l'espressione degli antigeni HLA sulla superficie delle cellule --> tipologie d'esame:
-Molecole HLA sulla superficie cellulare --> linfocitotossicità complemento-dipendente e citofluorimetria
-Molecole HLA su supporti: ELISA, citofluorimetria su microsfere e citofluorimetria su microsfere fluorescenti.
Esempio di test --> test di microlinfocitotossicità: si ottengono cellule mononucleate da un campione di sangue --> messo a reagire con anticoagulante --> formazione del buffy coat --> si mettono dei pozzetti --> poi si aggiungono ai pozzetti dei sieri con anticorpi specifici per antigeni HLA (es HLA B27) --> se è presente si verifica la reazione --> attivazione del complemento --> è presente un colorante che cambia colore se entra nel citoplasma delle cellule --> pozzetto si colora --> tipizzazione HLA del paziente.

2)Biologia molecolare: si analizzano i geni codificanti per HLA.
-PCR
-NGS: Per sequenziamento genetico di nuova generazione (Next generation sequencing, NGS) si intende l'insieme delle tecnologie di sequenziamento degli acidi nucleici che hanno in comune la capacità di sequenziare, in parallelo, milioni di frammenti di DNA

# data[].attributes.headline
Reazione trasfusionale acuta--> 3 eventi:

# data[].attributes.subject
Reazione trasfusionale acuta--> 3 eventi:

# data[].attributes.body
1) Si attiva il fattore XII --> attivazione cascata coagulativa --> CID coagulazione intravasale disseminata acuta.
2)Attivazione del SN simpatico con produzione di catecolamine e conseguente tachicardia, nausea e vomito
3)Gli immunocomplessi (formati prevalentemente da frazioni C3a e C5a del complemento) attivano la cascata del complemento --> vasodilatazione e rilascio di istamina --> ipotensione --> shock.

# data[].attributes.body
1. sistema AB0: di natura GLICOLIPIDICA, nel plasma è presente costantemente l’anticorpo per l’antigene mancante (gruppo B -> anticorpo anti-A). Sono espressi nella maggior parte dei tessuti.
Per scoprire il gruppo AB0 di appartenenza --> test di emoagglutinazione --> si mette un campione di sangue a reagire con un siero in cui sono presenti anticorpi specifici (es anti-A) --> se è presente l'antigene A si ha emoagglutinazione --> si effettua in provetta, micropiastra o microcolonna.
il gruppo A si suddivide in sottogruppo A1 e A2 in base alla quantità di antigene H presente sui globuli rossi. Il soggetto di gruppo A2 ne ha di più di uno di gruppo A1.

2. sistema Rh: di natura PROTEICA non glicosilata, è uno dei sistemi più immunogeni. Sono espressi solo sui globuli rossi.
In base alla presenza dell'antigene D --> Rh+ o -.
Il gene che codifica per l’antigene D (gene RHD) si associa ad altri antigeni (ce, Ce, cE, CE). Se il gene RHD non è presente, ci sono gli anticorpi anti-D (come per il sistema AB0).
Con dei kit semplici con sistema a microcolonne si può valutare la positività al gruppo Rh. L’agglutinazione si verifica in caso di presenza di antigene D, antigene C e antigene e (dunque si è rispettivamente Rh1, Rh2 e Rh5). Esistono dei kit specifici per individuare due varianti possibili del sistema Rh:
- variante D weak: i globuli rossi hanno una ridotta quantità di antigene D sulla superficie
- variante D partial: sulla superficie dei globuli rossi è presente l’antigene D incompleto.

3. sistema Kell: di natura GLICOPROTEICA, può causare reazioni trasfusionali. Sono espressi sui globuli rossi e sui progenitori mieloidi.
E' caratterizzata dalla presenza di una proteina che attraversa più volte la membrana, XK, legata a un’altra proteina transmembrana, proteina Kell, tramite un ponte disolfuro --> il complesso --> antigene Kell o antigene Cellano.
La stragrande maggioranza della popolazione è Kell-, circa l’8% della popolazione è Kell+ eterozigote e solo lo 0,2% della popolazione è Kell+ omozigote.
Come visto per i sistemi AB0 e Rh, essere Kell- significa avere anticorpi anti-Kell.
L’analisi viene fatta anche in questo caso con un sistema a microcolonne.

Funzioni (conosciute) dei sistemi:
- trasporto di molecole idrosolubili attraverso il layer idrolipidico
- attività enzimatica
- recettori per microorganismi
- adesioni degli eritrociti ad altre cellule

# data[].attributes.headline
Test di integrità della barriera ematoencefalica

# data[].attributes.subject
Test di integrità della barriera ematoencefalica

# data[].attributes.body
Si calcola il rapporto tra albumina plasmatica/ Albumina del liquor --> più la barriera funziona e meno ritroviamo l'albumina nel liquor --> fisiologicamente è minore di 9, aumenta nel caso di casi infiammatori e tumore.

Oppure si può calcolare il rapporto tra le IgG plasmatiche/liquorali --> IgG index --> fisiologicamente <0,6 (quindi in caso di infezioni le IgG si produrrebbero direttamente nel liquor).
Questo risulta aumentato nel caso di sclerosi multipla, neurosifilide, encefalite da HIV o Meningite da meningococco.
Per questo tipo di considerazioni è necessario fare una coltura del campione preso in esame. L’esame del glucosio in questo può aiutare ad un avvicinamento all’agente patologico. D’altra parte invece questo tipo di test immunochimici sono utili nell’identificazione di particolari forme tumorali, non in grado di essere diagnosticate tramite i sistemi ad immagine, soprattutto le forme più primitive.

# data[].attributes.body
Viene prodotto attraverso filtrazione a livello dei plessi corioidei --> raggiunge poi i ventricoli e villi aracnoidei --> qui viene riassorbito nel circolo ematico.
Vi è una diversa modalità di passaggio delle componenti del sangue nel liquido cefalorachidiano.
In particolare abbiamo
- Barriera ematoencefalica, interposta fra sangue e parenchima nervoso. Costituita dall’endotelio dei capillari, dalla tunica elastica e avventiziale e dalla guaina gliale del Cerletti. Ha un ruolo fondamentale nei plessi coroidei;
- Barriera ematoliquorale, tra sangue e liquido cefalo rachidiano. Struttura formata dagli endoteli dei capillari, dagli istiociti del connettivo e dall’epitelio dei plessi corioidei, che determina l’impermeabilità fisiologica fra sangue e liquor cefalorachidiano.
Componenti che possono passare in base alla loro natura:
-Diffusione passiva: le proteine passano tramite gradiente di concentrazione e dal peso molecolare. (quelle con peso molecolare maggiore faranno più fatica a passare --> mentre quelle con peso minore saranno più facilitate)
-Diffusione libera: indipendente dal gradiente --> glucosio e urea
-Tramite trasportatori specifici: gli elettroliti avendo carica, richiedono la presenza di specifiche molecole carrier per oltrepassare la barriera ematoencefalica.
-Diapedesi: propria dei leucociti.

Compontenti del liquor:

# data[].attributes.body
Curva che riporta come gli anticorpi anti-CCP riescono a raggiungere un'accuratezza diagnostica maggiore rispetto a quella del fattore reumatoide (accuratezza=area sotto la curva).

NB: Mettendo insieme il fattore reumatoide con gli anticorpi anti-CCP sono qui riportati i criteri diagnostici in uso per l’artrite reumatoide definite dalle società Europea e Americana di reumatologia. Il punteggio nei criteri laboratoristici vengono assegnati sia in relazione alla presenza degli anticorpi ma anche in base al titolo anticorpale, prendendo poi anche in considerazione la Proteina C Reattiva e la VES (ESR)

# data[].attributes.body
Test per individuare gli anticorpi contro i peptidi citrullinati.
Nei siti di infiammazione (articolazione) --> si trovano dei macrofagi che esprimono l'enzima PAD --> conversione dell'arginina in citrullina --> liberazione di un gruppo amminico con sostituzione di un gruppo carbonilico.
Esempi di antigeni che vengono citrullinati, che vengono riconosciuti da specifici anticorpi, sono indicati nella slide (filaggrina, fibrinogeno, …).

# data[].attributes.body
2) Test di agglutinazione al lattice:
Con questo test si possono studiare entrambe le forme di IgM e IgG --> si prendono delle particelle di poliestere rivestite da IgG --> si mette a contatto col siero del paziente (che dovrebbe contenere il fattore reumatoide) --> agglutinazione delle particelle--> test positiv, è negativo se le particelle rimangono disposte in maniera omogenea

# data[].attributes.body
1) Test di Waaler Rose
Si prendono dei globuli rossi sensibilizzati (quindi a cui leghiamo degli anticorpi) si aggiunge il fattore reumatoide --> emoagglutinazione --> in alcuni pozzetti abbiamo emoagglutinazione mentre in altri questa non avverrà--> ogni pozzetto avrà una diversa diluizione del siero del paziente --> si stabilisce il titolo anticorpale.
Il limite è che ci consente solo di studiare la frazione IgM (e non la IgG) del fattore reumatoide

# data[].attributes.headline
Marker per diagnosticare l'artrite reumatoide

# data[].attributes.subject
Marker per diagnosticare l'artrite reumatoide

# data[].attributes.body
Fattore reumatoide: IgM e IgG che può legare autoantigeni
Anti-CCP: IgG ACPA sono anticorpi contro proteine citrullinate) --> questi poi legano il FcgammaR dei macrofagi --> attivazione del processo infiammatorio --> rilascio di citochine proinfiammatorie --> avviene sia a livello delle membrane sinoviali che a livello osseo --> erosione ossea da attivazione degli osteoclasti (che hanno una derivazione analoga a quella dei macrofagi).
Si studiano 2 test:

# data[].attributes.body
Può coinvolgere diversi organi ma colpisce prevalentemente le articolazioni --> si verifica la perdita della tolleranza immunologica --> processo infiammatorio sinoviale --> processo di artrite.
Le manifestazioni iniziali sono simili a quelle delle artrosi e poi evolvono in sintomi specifici come le mani a colpo di vento, deformazioni articolari accompagnati da erosioni essee e manifestazioni extraarticolari (alterazione sclera e coinvolgimento del polmone)

# data[].attributes.body
-Immunoblot:
E' simile ad una sorta di elettroforesi che permette di riconoscere i singoli antigeni --> bande.
-Test Elisa --> con sul fondo antigeni nucleari --> se avviene la colorazione l'esito è positivo.

# data[].attributes.body
-Identificazione degli anticorpu anti-nucleari (ANA):
Sono specifici del lupus --> è il più specifiico.
Si usa l'immunofluorescenza per studiare gli anticorpi diretti contro autoantigeni nucleari e in base al pattern di immunofluorescenza ci possiamo orientare per una diagnosi piuttosto che un'altra.
Se il test da esito tra 1 e 160 --> si considera positivo --> approfondimento in dettaglio dei vari tipi di anticorpi.
Procedura:
Sangue--> centrifugazione --> siero --> viene messo in contatto con delle linee cellulari --> se ci sono gli anticorpi del lupus, questi legheranno antigeni nucleari --> si inseriscono anticorpi marcati fluorescenti --> valutazione della fluorescenza.

# data[].attributes.body
Test di laboratorio che ci fanno diagnosticare il lupus:
-Aumento della VEs
-Alterati i tempi di tromboplastina parziale attivato.
-Test di Russel (veleno di vipera) --> porta ad una maggiore suscettibilità ad aborti spontanei e patologie di tipo trombotico.

# data[].attributes.body
La manifestazione più comune è l'eritema a farfalla ma ci sono altre manifestazioni.

# data[].attributes.body
Il mancato funzionamento del fattore AIRE --> autoimmune perchè --> è il fattore che permette di allenare nel timo, i linfociti T a riconoscere gli antigeni self che incontrerà nel nostro organismo e che invece i linfociti T specifici che riconoscono un autoantigene vengono eliminati per apoptosi o trasformati in T regolatori.
Se AIRE non funziona questi vanno a coinvogere la risposta immunitaria contro gli autontigeni.

# data[].attributes.body
Per le ipogammaglobulinemie abbiamo:
-Test di primo livello --> emocromo e elettroforesi --> studiano la risposta umorale.
-Si procede con il dosaggio delle varie Ig --> Clonalità: riduzione relativa di una certa classe di Ig dovuta ad un aumento clonale di un’altra classe.

# data[].attributes.body
8) Test di valutazione dell'immunità cellulo-mediata
Si distingue la risposta dei linfociti B e T dipendente dalla T indipendente.
E' uno studio in vitro per cui si aggiungono sostanze per stimolare la risposta.

# data[].attributes.body
7) Test di valutazione dell'immunità cellulo-mediata
Si sfruttano antigeni di superficie specifici per ogni sottopopolazione linfocitaria:
-Linfociti B --> CD19 e CD20
-NK --> CD16 e CD56
-Linfociti T --> CD3, CD4 e CD8 per le varie popolazioni.
Queste analisi vengono fatte mediante citofluorimetria --> nei soggetti immunocompromessi si inverte il rapporto tra CD4 e CD8.

# data[].attributes.body
6) Intradermoreazione:
Qui la risposta è ritardata di 48-72h --> reazione di ipersensibilità di tipo ritardato.
Negli immunodepressi la reazione sarà più contenuta

# data[].attributes.body
5) Emocromo--> valutazione dell'immunità cellulo mediata.

# data[].attributes.body
4) Test di Shick
In un soggetto vaccinato per la difterite si dovrebbero produrre IgG oer neutralizzare la tossina--> se non c'è reazione il soggetto è immune (cooperazione tra linfociti B e T) --> se si forma una papula vuol dire che le IgG del soggetto non sono sufficienti a contrastare la tossina in cui devono essere misurate le misure.

# data[].attributes.body
3) Dosaggio delle isoemoagglutinine.
Gli anticorpi vanno a legare antigeni di superficie degli eritrociti utilizzati per l'individuazione del gruppo sanguigno.
Il test alla base è quello di agglutinazione --> indicano appunto il legame.
Il titolo lo stabiliamo in relazione alla quota di siero che abbiamo messo nei pozzetti.

# data[].attributes.body
Il deficit più comune è quello delle IgA --> determina maggiore suscettibilità alle infezioni respiratorie.

# data[].attributes.body
1) Elettroforesi: in base al tipo di deficit di immunoglobuline che si viene a creare può variare l'entità dell'ipogammaglobulinemia.
Le IgG sono di solito le più rappresentate quindi un loro deficit diventa evidente.
Le IgA --> si valuta la banda gamma e la banda beta2.

# data[].attributes.body
Immunodeficienze relative a deficit di linfociti B:
Le varie forme possono riguardare le varie fasi che dalla linea linfoide iniziale possono insorgere potendo compromettere la produzione delle immunoglobuline fino alla formazione delle plasmacellule.
Nelle agammaglobulinemie si possono osservare alterazioni delle immunoglobuline e si può osservare nelle fasi più precoci della produzione degli anticorpi.

# data[].attributes.body
Immunodeficienze relative a deficit di linfociti T --> a seconda della fase di maturazione degli stessi si può verificare una forma diversa:
-Immunodeficienze combinate gravi --> riguardano le varie fasi di maturazione della linea linfoide fino alla maturazione dei linfociti CD4+ o CD8+ o altre forme come quelle relative alle varie funzioni dei linfociti T (es l'apoptosi).

# data[].attributes.body
Le congenite sono le più frequenti e coinvolgono la produzione degli anticorpi (plasmacellule --> linfociti B)

# data[].attributes.headline
Identificazioni degli allergeni delle allergie alimentari

# data[].attributes.subject
Identificazioni degli allergeni delle allergie alimentari

# data[].attributes.body
CDR (non è un test ma un approcio) --> vengono estratti degli allergeni dagli alimenti --> si identificano le singole componenti specifiche (quindi quella parte della proteina che potrebbe indurre la reazione allergica permettendo di identificare le cross reattività di altri allergeni --> identifica quei soggetti con una co-sensibilizzazione (che si sono sensibilizzati a più allergeni contemporaneamente, o quelli che si sono sensibilizzata ad una proteina ma lo saranno anche nei confronti di un'altra proteina con cui magari non si è mai entrati in contatto cross reazione), con questo approcio si cerca di prevenire possibili reazioni anafilattiche in caso di contatto soggetto-antigene alimentare o con la seconda proteina per cui ha sviluppato crossreazione.

# data[].attributes.body
Hanno ruolo di monitoraggio delle allergie (specialmente in terapie con corticosteroidi).
Si mettono dei basofili derivati dal paziente con le IgE di un donatore --> il legame dei due determina il rilascio di istamina--> noi dosiamo l'istamina.

# data[].attributes.body
Usato per lo studio dell’asma allergico con uso di istamina o metacolina (sostanza che induce la reattività a livello bronchiale).
Il grafico mostra come in relazione alle diverse concentrazioni di metacolina cambi la VEF1 (volume di aria espirato nel primo secondo durante una spirometria).
Per soggetti che hanno già avuto uno shock anafilattico questo test è sconsigliato.
Se la comparsa dei sintomi è ritardata si può essere nella situazione di ipersensibilità di IV tipo (cellulo mediata) --> in questo caso sono più utili i patch test (test effettuati a livello cutaneo, ma con adesivi che contengono diverse sostanze tra cui il lattice).
NB:non è sufficiente che ci sia una reazione cutanea ma è necessaria che ci sia un’informazione clinica-anamnestica, l’insorgenza quindi di sintomi in seguito ad esposizione ad un allergene.

# data[].attributes.headline
RAST Test --> ricerca invece le IgE specifiche.

# data[].attributes.subject
RAST Test --> ricerca invece le IgE specifiche.

# data[].attributes.body
Sul fondo questa volta si mette direttamente l'allergene, per cui solo le IgE specifiche per quell'antigene si legheranno e poi tramite i radiomarcati stimano il numero delle IgE.

# data[].attributes.body
Serve a quantificare le IgE totali.
Svolgimento:
Sul fondo di una piastra vengono messe delle immunoglobuline anti-IgE --> viene messa in contatto con il siero del paziente --> si fa un lavaggio --> si legano gli anticorpi-IgE --> si mettono anticorpi anti-IgE radiomarcati che reagiscono con le IgE rimaste precedentemente adese agli anticorpi anti-IgE presenti sul fondo della piastra.
In base alla radioattività che è stata emessa.
Il limite di questo test è che ci dice che le IgE sono presenti ma non il tipo.

# data[].attributes.body
La ranitidina interferisce perchè agisce contro i recettori H2 dell'istamina, i beta bloccanti agiscono sui recettori beta adrenergici.
Se un paziente ha avuto delle reazioni nei test precedenti, nel momento in cui si vuole ripetere il test deve essere in presenza di un anestetista.

# data[].attributes.body
Test:
Si è allergici se oltre la comparsa del pomfo si ha la comparsa dei sintomi specifici durante l'esposizione.
Se gli antigeni sono superiori a 40 si può eseguire sul dorso altrimenti si fa sull'avambraccio.

# data[].attributes.body
Per identificare le allergie sono state messe a punto delle preparazioni allergeniche fatte da peptidi che di solito danno reazioni allergiche nella magior parte dei soggetti.

Cross-reazione: avviene con peptidi che hanno una certa omologia strutturale, Nel momento in cui si ha la sensibilizzazione ad un allergene, la si può avere anche ad una seconda proteina che presenta omologia strutturale rispetto alla prima.

Preparazione: si isola l'allergene da una sostanza tramite western blot --> viene poi clonato e si fa produrre una proteina ricombinante che viene prodotta in E.coli.

# data[].attributes.body
Un basofilo o una cellula epiteliale può produrre una linfopoietina (TSLP) quando entrano in contatto con un LPS.

# data[].attributes.body
Per studiare le immunopatologie --> ci sono 2 tipologie di strumenti:
-Immunità cellulare
-Immunità umorale

# data[].attributes.body
E' una famiglia di marcatori tumorali usati per esempio nei melanomi --> rientra nel contesto della fase acuta la Calprotecina.
La Calprotecina ci aiuta a capire l'andamento di una malattia infiammatoria cronica intestinale --> comprendere l'andamento della terapia.
Si può associare alla colonscopia per effettivamente avedere la dimostrazione che i valori indicano una riattiazione dell'infiammazione cronica o meno.

# data[].attributes.body
E' un marcatore molto specifico per infezioni batteriche --> diagnosi di sepsi.

# data[].attributes.body
Prodotto di degradazione proteolitica del CD14 solubile (il CD14 è associata al TLR4 e favorisce il legame al LPS).
Può essere utile, invece, come marcatore prognostico perché può aiutarci a predire la mortalità di alcune condizioni (HIV, sepsi)

# data[].attributes.body
Lo si ritrova nel picco alpha1, si riduce in caso di insufficienza epatica e malnutrizione perchè si riducono gli epatociti che la producono.

# data[].attributes.body
La reazione di fase acuta è quel processo che parte dall’attivazione dei fagociti quali neutrofili, macrofagi e cellule di Kupffer--> producono delle citochine (IL-1/6) che influiscono sugli epatociti --> attivano jak, stat, NF-KB --> produzione di proteine della fase acuta e secrezione nel plasma.
In questa reazione di fase acuta ci sono delle modificazioni elencate nella slide.

Proteine di fase acuta maggiori:
-Proteina C reattiva (CRP): ha una struttura pentamerica ciclica, costituita da 21 subunità appartenenti al gruppo delle pentrassine corte (PRR solubili)--> durante l'infiammazione passa da <1mcg/ml a 100-1000mcg/ml.
Funzioni presenti nell'immagine.
Non può essere presente come marker specifico per via del fatto che aumenta in tante occasioni.
Nelle malattie su base aterosclerotica si ha una infiammazione cronica con attivazione dei macrofagi --> aumento produzione di CRP --> picchi diversi da quelli della fase acuta e piccole variazioni oltre la soglia di 2mcg/ml --> indicano soggetti ad alto rischio di un evento cardiovascolare.

-Proteina A dell'amiloide (SAA): fa parte del gruppo delle pentrassine corte, esistono varie isoforme che vengono classificate in costitutiva (prodotta normalmente, SAA4) e di fase acuta (SAA1 e SAA2). Nel corso di infiammazione abbiamo valori oltre i 100mg/ml.
Anche questa non è specifica per una malattia ma ci aiuta ad individuare una malattia associata all'infiammazione.

Altre proteine di fase acute: Aptoglobina (lega l'emoglobina), fibrinogeno e C3 aumentano in modo più contenuto.
Transferrina e albumina invece diminuiscono di concentrazione.

Il tracciato elettroforetico delle proteine plasmatiche segna che in fase acuta si ha un incremento del picco della banda gamma o della banda beta2 dovuto proprio alla CRP.

# data[].attributes.body
E' un test genico utilizzato per valutare il rischio di recidiva del cancro al seno invasivo.
Il test analizza l'espressione di 21 geni associati alla tumorigenesi del cancro al seno, tra cui 16 geni correlati al cancro e 5 geni di riferimento. Il risultato del test è espresso come un punteggio di recidiva (RS) che va da 0 a 100.
Il punteggio di recidiva viene utilizzato per determinare la terapia più appropriata per il paziente.
I range di rischio sono:
• Rischio basso (RS 0-18), si consiglia la terapia ormonale
• Rischio medio (RS 18-30), si consiglia la terapia ormonale, eventualmente associata a chirurgia e radioterapia
• Rischio alto (RS >31), si consiglia terapia ormonale, chirurgia e radioterapia Inoltre, il rischio di recidiva è anche associato a una prognosi più o meno favorevole per il paziente.
Il test Oncotype DX può essere utilizzato per aiutare a determinare il trattamento più appropriato e a prevedere la prognosi per i pazienti con cancro al seno invasivo

# data[].attributes.body
Presente sulle cellule immunitarie--> serve per spegnere i linfociti T, le cellule tumorali lo esprimono per impedire il loro riconoscimento da parte dei linfociti T.

Sono importanti due score:
-TPS tumor proportion score: numero di cellule tumorali positive al fattore / numero di cellule tumorali totali. Si usa per valutare l'espressione del fattore tumorale.
-CPS cell proportion score : numero di cellule tumorali e immunitarie positive al fattore/ numero di cellule nella sezione del tumore prese in considerazione. Si usa per valutare l’espressione di PD-L1 nei tumori solidi e del sangue.

# data[].attributes.body
E' una forma di biopsia liquida che si usa per rilevare diversi cloni del tumore che possono essere sensibili a trattamenti diversi.
La quantità aumenta con l'aumento delle cellule tumorali--> ergo se il trattamento è efficace diminuisce.

Vantaggi:
-non è invasiva
-Si può ripetere
-offre un monitoraggio in tempo reale
-Può mettere in evidenza mutazioni specifiche
-Si può utilizzare per rilevare MRD (la minima quantità di cellule tumorali residue dopo il trattamento)
-determinare la durata della terapia adiuvante;
-nei pazienti con cancro avanzato, per caratterizzare molecolarmente le cellule, --predire la farmaco resistenza,
-differenziare la pseudoprogressione dalla progressione reale nella terapia immuno-oncologica,
-determinare la durata del trattamento nei pazienti che rispondono alla terapia immuno-oncologica.
-utilizzato per identificare i pazienti senza cancro ma ad alto rischio.
Svantaggi:
-Non perfettamente standardizzata
-Non permette la stadiazione e la specificazione dell'isotopo

# data[].attributes.body
Derivano dal tumore primario a seguito della rottura della membrana basale --> vanno nel circolo e alcune possono avere recettori di homing verso altri tessuti e causare metastasi (transizione epitelio-mesenchimale--> perdita di E-caderina a favore di N-caderina e un'aumentata espressione di vimentina.)
Dopo essere state isolate mediante diverse metodiche, come l'impedenza, l'imaging, la citometria a flusso o l'intelligenza artificiale, le CTC vengono enumerate e caratterizzate molecolarmente per poter avere un'utilità clinica, come diagnostica, prognostica, selezione del trattamento, monitoraggio della terapia e resistenza ai farmaci. Tutto ciò è utile per una futura medicina personalizzata al paziente.

# data[].attributes.body
E' la forma sialilata dell'antigene di Lewis (gruppo sanguigno).
Viene prodotto da: cellule epiteliali, stomaco, polmone, colon, rene, pancreas, endometrio, dotti biliari, ghiandole salivari e esofago.
Un suo valore elevato fa sospettare tumore al pancreas ma viene usato più che altro per vedere la progressione della malattia.

# data[].attributes.body
Mucina espressa dalle cellule del seno --> la produzione aumenta in seguito al cancro al seno, nelle cellule tumorali la si trova glicosilata e in infiammazione.
Può fungere da recettore per NTHi (un tipo di Haemophilus Influenzae) e innescare la via di NfkB, portando infiammazione delle vie aeree.

# data[].attributes.body
Proteina presente nel: muco endocervicale, liquido amniotico, latte materno e muco bronchiale.
Possiede un dominio idrofobico che gli consente di ancorarsi alla membrana della cellula, inoltre, questo dominio può andare incontro a taglio proteolitico e rendere la proteina solubile.

Uso:
Marker tumorale del cancro ovarico (aumenta la sua produzione)
Per distinguere tra benigno e maligno si prende in considerazione insieme ad un altro marker --> HE4 utilizzando il R.O.M.A (algoritmo di rischio del tumore ovarico maligno).

# data[].attributes.body
Opposto del PTH, inibisce gli osteoclasti in seguito ad aumento della calcemia e riduce il riassorbimento renale --> riduzione calcemia.
Sintesi:
Parafollicolari--> pre-pro-ormone--> taglio proteolitico -> pro-ormone --> altro taglio --> calcitonina.
Altre forme che si ottengono che sono modificate enzimaticamente sono la katacalcina e la N-proCT.

Marker:
-Legate ad un suo aumento ematico: Carcinoma midollare alla tiroide (MTC, concentrazioni di calcitonina>100pg/ml --> chirurgia, se <10 si osserva, per valori compresi tra 10<X<100 --> pentagastrin stimulation test --> infatti la calcitonina è stimolata anche da gastrina e pentagastrina), tumori neuroendocrini, gravidanza, esercizio fisico intenso, etilismo, insufficienza renale cronica e la tiroidite cronica autoimmune, sepsi di vari tessuti come ipofisi, ipotalamo, intestino e cellule neuroendocrine (Viene rilasciata Pro-calcitonina).

# data[].attributes.body
E' un ormone prodotto dalla placenta durante la gravidanza --> è simile a LH e FSH (sempre gonadotropine) come funzione e struttura (subunità alpha, beta che permette legami con i recettori LH-R e FSH-R).
Viene prodotta a seguito dell'adesione del sinciziotrofoblasto all'endometrio (1sett dalla fecondazione) --> si decrementa con la produzione di progesterone da parte della placenta.
La HCG ha la funzione di mantenere trofico il corpo luteo che produce progesterone che permette a sua volta il trofismo dell'endometrio mentre dopo il progesterone placentare sostituisce il corpo luteo e non c'è bisogno di HCG.
(HCG--> proteina Gs -->PKA --> AKT e ERK1/2 --> espressione geni steroidogenici)

Funzioni come marker:
-Marker precoce di gravidanza
-Marker di tumori al testicolo, ovaio, coriocarcinoma, tumore del sacco vitellino e carcinomi embrionali e i livelli di HGC sono spesso elevati in questi casi.

# data[].attributes.body
Presente nel sacco vitellino e nel fegato, è una glicoproteina fetale.
Funzioni:
-trasporto (simil albumina)
-Legame con gli estrogeni
-Immunosoppressione--> evita la risposta anticorpale materna verso gli antigeni fetali di origine paterna.

Come marker:
-Durante la gravidanza aumenta a livello sierico in caso di malformazioni fetali o distacco della placenta
-Negli adulti valori >20ng/ml --> neoplasia epatica, cirrosi o epatite, carcinoma del testicolo, del colon, del pancreas, polmone e ovaio.

Ruolo dell'AFP nella cancerogenesi del carcinoma epatocellulare HCC --> AFP lega il recettore AFP-R presente sugli epatociti --> endocitosi del complesso --> AFP viene liberato a livello intracellulare --> qui interagisce con:
-PTEN --> via di mTOR --> proliferazione
-Inibisce la caspasi 3 inibendo i meccanismi di apoptosi cellulare
-Attivazione dei pathway di MAPAK/WNT/beta-catenina e jak e sta-->proliferazione, invasione, metastasi, farmaco-resistenza, ed inibizione dell’apoptosi

Usi:
-Nei paesi ad alto tasso di epatocarcinomi usato come marker --> se i livelli sono alti ed è presente una massa epatica si prosegue al trattamento chirurgico (si valuta anche lo stato di fucosilazione (coniugazione di AFP-fucosio) che risulta più alto nelle neoplasie).
Se invece i livelli sono bassi si opta per una biopsia della massa per verificare la sua natura maligna/benigna.
-Nei paesi occidentali è usato per monitorare l'epatite cronica da HBV e HCV.

# data[].attributes.body
E' una molecola di adesione che si trova nel fegato, pancreas e intestino nei primi mesi di vita intrauterina --> negli adulti si riscontrano bassi livelli nel colon e nelle mammelle in allattamento.

I livelli aumentano in caso di:
▪ Adenocarcinoma colon, retto, mammella o polmone (anche al pancreas secondo la Fazioli);
▪ Infiammazione cronica intestinale o epatica;
▪ Condizioni benigne come quelle in tabella

Viene utilizzato con valore prognostico nel carcinoma del colon-retto e può essere usato per il monitoraggio post-operatorio (se aumenta post operazione --> recidiva) e quindi è utile anche per fare prognosi e monitorare il trattamento.

Altri marker tumorali:
-CA72.4 nei carcinomi gastrici;
-la mucina CA19.9 per quello opancreatico
-citocheratine e MUC1 utili nel carcinoma mammario.
-CA125 mucina --> nel carcinoma ovarico serve a distinguere quello sieroso (più aggressivo, implica un aumento di CA125) e quello mucinoso (meno aggressivo, con valor di CA125 più stabili).

# data[].attributes.body
Antigene prostatico specifico --> semenogelasi (idrolasi che mantiene fluido il seme durante l'eiaculazione per favorire il movimento degli spermatozoi), è codificato dal gene callicreina3.
Nel sangue si trova libero o legato all'alpha-1-antichimotripsina (ACT, banda alpha1) o all'alpha-2-macroglobulina (A2M, banda Beta1).
Valori fisiologici 4-10ng/ml altrimenti se superiori --> rischio di tumore alla prostata.
Si valuta anche:
-Densità del PSA: normalizzando il valore del PSA per il volume della prostata tramite ecografia transrettale.
-Velocità del PSA: valuta l'incremento annuo del marker
-PSA libero: diminuisce nei tumori, si può distinguere un aumento del PSA totale causato da infiammazione da quello causato da neoplasia

Negli uomini sopra i 50 anni viene dosato a scopo preventivo:
1) <4 ng/ml: è bassissimo il rischio di sviluppo di cancro alla prostata (5%)
2) Tra 4 e 10 ng/ml ho il 25% di probabilità. Dunque, doso il PSA libero: se questo è >25%, sospetto IPB (iperplasia prostatica benigna); mentre se è < 5%, sospetto il cancro;
3)>10ng/ml: ho una probabilità del 55%, quindi sospetto il cancro → devono essere effettuati ulteriori controlli.
E' importante anche valutare:
1) Correlazione tra il valore del PSA e l'età
2)Velocità del PSA e la densità

Se avviene un trattamento chirurgico (rimozione della prostata)--> possono accadere i seguenti casi:
-Il PSA raddoppia in 6 mesi piuttosto che in 10, aumenta il rischio di metastasi.
-I valori di PSA possono diminuire di molto, se poi si rielevano --> recidiva (questo capita anche come risposta alla terapia ormonale)

# data[].attributes.body
sono molecole dosabili che hanno diversi significati:
▪ RISCHIO → valutano la predisposizione di un soggetto a sviluppare una neoplasia;
▪ DIAGNOSTICO→ variabile/i che permette di distinguere i malati dai sani durante lo screening (con un certo grado di verosimiglianza);
▪ PROGNOSTICO→ variabile/i che permettono di stratificare i pazienti in relazione ad uno specifico outcome a prescindere dal trattamento;
▪ PREDITTIVO→ variabile/i che informano sulla risposta o sulla resistenza ad una terapia. Questi vengono utilizzati per tre motivi:
- Efficacia: utile a concentrare l’intervento terapeutico sui pz con più alta probabilità di ricevere un beneficio
- Sicurezza: per evitare effetti collaterali ai pazienti che hanno bassa probabilità di ricevere un beneficio dal trattamento
- Efficienza: risparmiare risorse economiche nei pz che hanno bassa probabilità di ricevere un beneficio;
▪ SURROGATO (valutato durante il trattamento)→ variabile/i le cui variazioni in corso di terapia riflettono l’attività della terapia e sono associate a specifici endpoint. Questo valore viene usato per valutare l’efficacia di una terapia.

i market tumorali possono essere:
▪ Sostanze prodotte dal tumore stesso (tumor-derived marker);
▪ Sostanze prodotte dall’interazione ospite-tumore (es. VES, enzimi epatici, proteine della fase acuta, indicatori di catabolismo osseo).
NB: possono essere presenti anche in condizioni non neoplastiche (fumo, alcol, allattamento, gravidanza, ciclo mestruale)

I marker tumorali si dividono in:
▪ Ag ONCOFETALI, come AFP (alpha-feto-proteina) e CEA (Ag carcino-embrionale);
▪ Ag CARBOIDRATICI come CA125, CA15.3, CA19.9;
▪ ORMONI, come HCG (gonadotropina corionica umana), Calcitonina, PTH;
▪ PROTEINE, come Bence-Jones, Ferritina, beta-microglobulina;
▪ ENZIMI, come LDH (lattico deidrogenasi), ALP (fosfatasi alcalina), Amilasi.
Il MARKER IDEALE ha varie caratteristiche:
▪ produzione esclusiva e precoce da parte della cellula tumorale (specificità 100%);
▪ non misurabile in soggetti senza tumore (sensibilità 100%);
▪ concentrazione correlata allo stadio della malattia;
▪ variazioni di concentrazione in relazione all’efficacia della terapia e all’andamento della malattia;

# data[].attributes.body
L'infiammazione riguardano prevalentemente la componente esocrina --> la necrosi delle cellule acinari --> immette in circolo enzimi digestivi pancreatici --> nelle pancreatiti si ricercano enzimi amilolitici e lipolitici.

Amilasi
E' un enzima prodotto dalle salivari e dal pancreas --> scompone gli amidi in oligosaccaridi, esistono varie isoforme codificate da geni sul cromosoma 1 --> la P3 è quella che aumenta durante le pancreatiti.
Elevati livelli di amilasi si riscontrano in diverse patologie, come le pancreatiti, le neoplasie pancreatiche (a carico del pancreas) e la parotite (ghiandola salivare).
L'amilasi ha una sua curva in relazione al decorso della malattia e anche il fluido in cui la andiamo a ricercare, cambia in base a se siamo in fasi precoci e tardive, rispettivamente SIERO e URINA.
Nel caso di amilosuria (quantità anomala di amilasi) occorre escludere il danno renale calcolando il rapporto tra clearance dell’amilasi e clearance della creatinina. Nella pancreatite questo valore è maggiore di 9.

Lipasi
E' un enzima glicoproteico --> idrolizza i TG a catena lunga --> essendo riassorbita a livello del tubulo renale non si trova nelle urine mentre viene ricercata nel siero tramite metodi immunometrici.
La lipasi è leggermente più specifica dell'amilasi nell'indicare la patologia pancreatica --> è elevata in condizioni di patologie pancreatiche, infarto miocardico e insufficienza renale (la curva di concentrazione segue quella dell'amilasi nel decorso della malattia).

Diagnosi
Pancreatite acuta: si analizza amilasi (sangue e urine), lipasi e calcio, leucociti e glicemia (se coinvolge le isole pancreatiche).
Pancreatite cronica: si valuta l'emoglobina glicata --> valuta l'andamento glicemico a lungo termine.
Marcatori come glicemia, insulina, glucagone, chimotripsina fecale, elastasi fecale e grassi fecali possono aiutare a determinare se il pancreas sta funzionando correttamente o meno.
Si può utilizzare il test della secretina --> valuta la capacità di secernere amilasi, lipasi ed enzimi proteolitici.

# data[].attributes.headline
Principali patologie con i relativi marker

# data[].attributes.subject
Principali patologie con i relativi marker

# data[].attributes.body
I fattori che influenzano la concentrazione sierica degli enzimi epatici sono la velocità di sintesi epatica, la diminuita escrezione biliare e le alterazioni del circolo ematico.

-Transaminasi ALT/AST (di solito il primo è presente in maggior concentrazione rispetto al secondo):
Sono marker di citolisi --> indicano necrosi cellulare (uso di alcol--> danno epatico)--> però non ci danno indicazioni ne sulla tipologia ne sulla gravità del danno.

-Fosfatasi alcalina (ALP)
E' un enzima che si trova nell'organismo in molti tessuti e organi --> soprattutto nel fegato e ossa.
Ha diverse isoforme --> i livelli ematici ci possono suggerire patologie a scheletro e fegato.

-Bilirubina:
Catabolita dell'emoglobina --> diretta (coniugata) e indiretta (non coniugata) --> la somma è la bilirubina totale --> aumenta in caso di ittero --> caratterizzato da aumento dei suoi livelli ematici.

Lattico deidrogenasi (LDH)
Enzima presente in molti tessuti del corpo, tra cui fegato, muscolo cardiaco e scheletrico, rene e cervello.
L'isoforma LDH5 è particolarmente utilizzata come marcatore per valutare la funzionalità epatica

Colinesterasi
Enzima epatico che viene usato come marcatore della funzionalità residua del fegato dopo patologie gravi --> 2 forme
-Butirrilcolinesterasi (BChE, unica a poter essere dosata nel siero) e Acetilcolinesterasi (AChE).

Albumina
Proteina sintetizzata dal fegato e presente nel sangue --> la sua concentrazione può essere utilizzata come marcatore di diverse patologie epatiche (cirrosi epatica, i livelli sono ridotti a causa di una ridotta sintesi epatocellulare, questo accade anche in caso di ascite (raccolta di liquido nella cavità addominale)

Fattori della coagulazione:
Dipendenti dalla vitamina K (fattori II, VII, IX e X).

# data[].attributes.headline
Marcatori di danno epatico e alle vie biliari

# data[].attributes.subject
Marcatori di danno epatico e alle vie biliari

# data[].attributes.body
Perchè aumentano nell'infarto ma anche in altre patologie.
-AST: aumenta anche in caso di epatopatie ma solo insieme ad ALT
-LDH: lattico deidrogenasi, isoforme 1 e 2 sono le più presenti a livello cardiaco.
-CK totale: creatinchinasi, può aumentare anche in caso di traumi muscolari, attività fisica molto intensa e miopatie.

Marcatori di funzione inotropa
Riguardano la funzionalità cardiaca in generale-->
ANP, BNP (precisamente si studia il NT-proBP, si libera dai miocardiociti ventricolari in condizioni di ipossia, rispetto al BNP ha maggiore emivita --> circa 90 minuti e sono entrambi secreti in modo equimolari)

# data[].attributes.body
Marcatori del cuore

Sindrome coronarica acuta
Diminuzione irrorazione coronarica --> ischemia del miocardio -->

-Ischemia transitoria (angina):
Angina stabile: dopo uno sforzo fisico
Angina instabile: in modo imprevisto con la formazione di un trombo

-Ischemia intermedia

-Ischemia persistente (infarto)
Infarto subendocardico
Infarto transmurale--> indica danno esteso alla parete del miocardio.
Entrambi si verificano in modo imprevisto.

Il miocardio è la pompa muscolare --> necessita di Energia, O2 e contrattilità --> inseguito a necrosi--> perdiamo tutti e tre questi elementi --> rispettivamente creatinfosfochinasi, mioglobina e troponina (marcatori di danno)

Diagnosi:
Sintomi--> anamnesi --> 70% di sensibilità.
ECG --> tratto ST --> 89% di sensibilità
Esami di laboratorio --> 90%.

Analisi dei marcatori:
-Mioglobina: viene liberato nel torrente sanguigno dalle cellule muscolari in seguito a sfozo fisico, essendo molto ma molto precoce è difficile fare diagnosi con questo marker --> per raggiungere un valore predittivo deve essere associata ad anidrasi carbonica 3 (oggi non si usa più)
-CK-MB: creatinchinasi variante MB--> trasforma la creatinina in fosfocreatina con la scissione di una molecola di ATP (esegue anche la reazione inversa)-
Due isoforme: CK-BB (cervello) e CK-MB (muscoloso).
La MB aumenta prima della BB --> può essere utile per la diagnosi di infarto.
Oggi non viene più utilizzato.
-Troponina: dolore toracico sospetto da sindrome coronarica acuta --> sensibilità raggiunge l'80% --> ci sono diverse isoforme che sono più specifiche come marker di infarto (cTnI e cTnT, con la seconda più precoce ed a emivita maggiore).
La troponina viene liberata prima con le molecole presenti nel citoplasma e poi con quelle dei filamenti contrattili --> sono specifiche del miocardio ma non per la patologia.
Oggi si usano troponine cardiospecifiche ultrasensibili (99%) --> hs-cTn.
Questo test ci permette di identificare fasi totalmente precoci di ischemia e danno miocardico e di instaurare il trattamento ideale in modo tempestivo.

# data[].attributes.body
Le proteine plasmatiche si suddividono principalmente in albumina e globuline, ma possono essere classificate anche in base alle caratteristiche fisiche (solubilità, sedimentazione, migrazione elettroforetica), chimiche (proteine semplici, glicoproteine, lipoproteine) e funzionali.
Funzioni: mantenimento pressione oncotica, albumina e ferritina hanno funzione anche di trasporto, alcune sono implicate nella coagulazione e nella difesa immunitaria.

Distinguiamo quattro metodiche elettroforetiche:
-Elettroforesi frontale: si pongono le proteine in una soluzione elettrolitica --> applico una corrente attraverso un tubo di quarzo ad "U" --> in base all'indice di rifrazione si distinguono le varie frazioni: albumina, globuline alpha e beta e gamma.
La problematica è la formazione di moti convettivi nel tubo rendendo imprecisa la distinzione tra le proteine.

-Elettroforesi zonale: si basa su supporti solidi, come carta da filtro, membrana di acetato di cellulosa, gel di agarosio (AGE) e gel di poliacrilamide (PAGE), in base alle caratteristiche del mezzo utilizzato (tampone, potenza del campo elettrico) e in base alle caratteristiche intrinseche delle proteine (massa, forma, carica elettrica e grandezza).

-Elettroforesi capillare: utilizzo di capillari con SiOH nelle superfici interne, posti tra anodo e catodo, quindi in base alla massa e alla carica queste migreranno dall'anodo verso il catodo.

-Immunoelettroforesi: applica il principio dell'immunoprecipitazione --> si separano le proteine in bande con diversa intensità e ampiezza --> producono un grafico bidimensionale.
Dal grafico si prense in considerazione il rapporto tra albumina/globuline che deve essere >1.

Banda alpha 1: può essere divisa in due picchi, la banda alpha 1 che può contenere α1-antitripsina (costituisce la maggior parte delle proteasi circolanti, sintetizzata da epatociti, macrofagi e altri tessuti, inibisce la tripsina pancreatica, la chimotripsina, trombina. la proteina C reattivata, i fattori Xi e XIII della coagulazione, e l'elastasi neutrofila soprattutto a livello polmonare, acquisendo un ruolo nello sviluppo dell'enfisema), α1- glicoproteina acida, α1-antichimotripsina e α1-lipoproteina (HDL),  α1-Antichimotripsina e l’α1-fetoproteina.

Banda alpha 2: invece comprende α2-macroglobulina (anodica, principale inibitore delle proteasi e modulatore dell'attività delle citochine, viene prodotta nel fegato e la produzione aumenta in caso di infiammazione acuta, epatopatie e diabete), aptoglobina (catodica, lega l'emoglobina libera nel plasma e diminuisce in caso di emolisi), proteina carrier della vit D e ceruloplasmina.

Banda beta 1: fanno parte la transferrina (lega lo ione ferrico, aumenta in caso di sideropenie e diminuisce in caso di emosiderosi) e la beta lipoproteina (componente delle LDL) e C3 (fattore del complemento)
Banda beta2: caratterizzata invece da proteine del complemento, beta2-microglobulina, proteina-C-reattiva e fibrinogeno.
Banda gamma: comprende le immunoglobuline, anche se IgM e IgA sono a cavallo tra la banda beta2 e gamma e possono occupare anche la zona alpha.
Anticorpi in orgine di frequenza nel sangue: • IgG • IgA (a cavallo tra banda beta e gamma) • IgM • IgD • IgE

L'elettroforesi siero-proteina andrebbe richiesta solo per la ricerca di picchi monoclonali --> studio di gammapatie monoclonali.
La componente monoclonale è dovuta alla proliferazione di un singolo clone plasmacellulare e caratterizzato da un'unica mobilità elettroforetica --> si presenta in caso di gammopatia monoclonale di incerto significato (MGUS), mieloma multiplo e sue varianti, microglobulinemia di Waldenstrom, malattie delle catene pesanti, amiloidosi e leucemia plasmacellulare.

L'immunoelettroforesi serve a distinguee all'interno della banda in esame quali proteine hanno una concentrazione aumentata.

Picco della pre-albumina:
Vi è un picco prima del picco dell'albumina, questo corrisponde al picco della prealbumina (la proteina prodotta a livello epatico, essendo più veloce migra davanti l'albumina, tra le sue funzioni lega la tiroxina e la retinol-biding protein, inoltre, si riduce in condizioni di malnutrizione, epatopatie e diabete, mentre aumenta in caso di amiloidosi.)
NB: vi è una distinzione anodica e catodica perchè ogni banda ha uno spettro interno in  cui una parte di proteine di questo picco si dispone più verso l'anodo e da una parte più verso il catodo.
NB2: amiloidosi: è una patologia provocata da proteine che hanno assunto una configurazione anomala e formano fibrille amiloidi che si accumulano in tessiti e organi --> disfunzioni e insufficienze organiche e morte del soggetto.

Albumina: regola la pressione oncotica e permette il trasporto di ormoni, ioni e alcuni farmaci --> essendo prodotta nel fegato, il suo dosaggio è rappresentativo di funzionalità epatica.

Bisalbuminemia: dovuta a varianti genetiche che portano alla presenza di forme diverse di albumina

Ipoalbuminemia: causata da:
-infiammazioni acute --> possono aumentare le globuline (diminuzione relativa, diluizione-
-Epatopatie--> la diminuzione dell'albumina stessa.

Analbuminemia: dovuta a diminuita sintesi o sintesi di forme inattive.

Quadri elettroforetici patologici:
-Profilo renale: caratteristico della sindrome nefrosica con perdite di proteine plasmatiche nelle urine --> si osserva riduzione di albumina, alpha1-antitripsina (banda alpha1), transferrina (banda beta) e Ig (banda gamma) e un aumento di beta lipoproteina.

- Profilo epatico, caratterizzato da ridotta capacità protidogenetica e formazione di liquido ascitico (ricco di albumina). Si osservano riduzione dell’albumina, un aumento delle Ig, ponte β- γ (dovuto ad aumento policlonale di IgA).

- Profilo infiammatorio, caratterizzato da aumento delle proteine di fase acuta, come α1- antitripsina (banda α1), α1, glicoproteina acida (banda α1), aptoglobina (banda α2), C3 (banda β), Ig policlonali (banda γ). Si osserva riduzione relativa dell’albumina, infatti il rapporto A/G <1

# data[].attributes.body
Fattori che li determinano:
-Problemi vasali --> alterazione del flusso e/o alterazioni dell'endotelio
-Problemi nella coagulazione --> alterazioni delle piastrine, alterazione dei fattori della coagulazione
-Problemi del sangue --> alterazioni della viscosità

Trombofilia: tendenza all'ipercoagulazione con propensione di alcune persone a formare coaguli sanguigni che possono essere disseminati in varie parti dell'organismo--> manifestazioni:
- trombosi arteriosa, che passa per la formazione di una placca arteriosclerotica - trombosi venosa, che invece avviene all’interno del circolo ed è favorita anche da alterazioni che possono riguardare le valvole dei vasi venosi
- aborti spontanei ricorrenti.

La trombofilia può essere:
-Congenita:

Problemi al fattore V di Leiden: autosomica dominante, mutazione puntiforme del gene Q506R --> scambio della glicina con arginina --> questa modificazione non permetterà il riconoscimento da parte della proteina C reattiva (APC) che ne permette lo spegnimento --> regolazione della coagulazione alterata
Diagnosi:
1)Test di resistenza alla APC:
E' un esame di laboratorio indiretto che valuta la funzionalità della APC, si misura la PTT quando si aggiunge APC --> in condizioni fisiologiche la  concentrazione è direttamente proporzionale con il tempo di coagulazione (più APC aumenta e più aumenta il tempo di coagulazione per inibizione del fattore V)--> se ci sono problemi al fattore V non c'è aumento del tempo di coagulazione
2)Test genetico: tramite PCR--> si osserva la presenza di una mutazione del fattore V.

Mutazione della protrombina (FII): autosomica dominante, causata da una mutazione puntiforme, sostituzione di guanina con adenina all'estremità dell'mRNA --> alterata trascrizione--> accumulo di protrombina --> formazione di coaguli.
Diagnosi:
test genetico con kit specifico per il sequenziamento --> criteri da rispettare per fare il test: soggetti di età inferiore a 50 anni con storia di eventi trombotici, eventi trombotici ricorrenti, eventi trombotici durante la gravidanza, l'uso di contraccettivi orali, o parenti di primo grado con la patologia.
Mutazione del gene MTHFR: codifica per l'enzima metilen-tetraidrofolatoreduttasi --> converte il 5,10-metilen-tetraidrofolato in 5-metil-tetraidrofolato, una molecola che consente la ri-metilazione dell'omocisteina in metionina, tramite l'intervento della vitamina B12 come cofattore --> aumento della concentrazione di omocisteina e aumento del rischio cardiovascolare.
Test diagnostici:
-Dosaggio dell'omocisteina: tramite cromatografia o processi immunoenzimatici
-Test genetico: sequenziamento e ricerca della mutazione

Deficit dei fattori della coagulazione:
autosomica dominante, sono coinvolti l'antitrombina III, la proteina C e S
Diagnosi:
Valutazione del PT e dell'aPTT, test immunoenzimatici per identificare questi fattori

-Acquisita: si sviluppa in corso di malattie autoimmunitarie come ad esempio il LES

Sindrome da anticorpi anti-fosfolipidi:autoimmune, colpisce soprattutto le donne in età fertile e può associarsi al lupus --> coinvolge due tipologie di autoanticorpi:
-Autoanticorpi anti-fosfolipidi veri: anticardiolipina o antifosfatidilcolina
-Lupus anticoagulans: legano le proteine leganti i fosfolipidi
Test diagnostici (vengono effettuati solo se è presente un criterio clinico tra trombosi venose, arteriose o aborti ricorrenti):
-Test con veleno di vipera di Russel diluito: contiene una sostanza che attiva il fattore X, convertendo la protrombina in trombina --> il test è sensibile al lupus anticoagulans perchè questo determina tempi di coagulazione maggiori.
-IgM o IgG anti-fosfolipidi
-IgM o IgG anti-cardiolipina --> più specifico del precedente.

Coagulazione intravasale disseminata
A metà tra patologie trombotiche e emorragiche--> si ha la formazione si coaguli nei piccoli vasi e il sequestro di fattori della coagulazione insieme alle piastrine (parte emorragica), inoltre, si ha liberazione di citochine pro-infiammatorie del fattore tissutale da parte dei macrofagi --> insufficienza multiorgano.
Test diagnostici:
• Concentrazione delle piastrine ridotta • aPTT aumentato • PT/INR aumentato • Fibrinogeno ridotto • D-dimero aumentato: questo viene liberato in seguito alla degradazione della fibrina, anche se può aumentare anche in altre patologie, come nelle neoplasie.
Fattori prognostici:
• Proteina C ridotta • Antitrombina III ridotta • PAI-1 aumentato
Il punteggio per valutare la presenza di CID si ottiene tramite conta delle piastrine, fibrinogeno e PT --> se il punteggio totale di questi è maggiore di 5 --> molto probabilmente si ha la CID

Terapia anticoagulanti:
-Eparina: velocizza l'azione inibente dell'antitrombina su FXa e trombina, viene somministrata per via sottocutanea--> non è pratico come utilizzo e non richiede un attento monitoraggio dell'IRN.
Per vedere se la terapia con eparina funziona -->
-aPTT > 2,5 --> dosaggio eccessivo
-Contapiastrinica < 100.000 --> presenza di anticorpi contro il fattore piastrinico.

-Anticoagulanti dicumerolici: (o TAO=terapia anticoagulante orale) inibiscono la sintesi della vitamina K, fondamentale per vari fattori della coagulazione (farmaco = Warfarin).
Se si è sotto Warfarin bisogna valutare periodicamente INR < 2 --> indica un rischio di trombosi mentre se <3 --> presenza di anticorpi contro il fattore piastrinico.

-(NAO) nuovi anticoagulanti orali -> sono diretti poichè inibiscono alcuni fattori della coagulazione come la trombina e il FX.
Test per l'efficacia della terapia contro la trombina: si valuta il dTT (tempo di trombina diluito, nel momento del test si aggiunge trombina, appunto diluendo la soluzione --> all'aumentare della concnetrazione del farmaco aumenta il tempo di formazione del coagulo --> da questo test si può valutare la concentrazione di farmaco in circolo).
Ecarina: trasforma la protrombina in meizotrombina, si effettua il test dell'ECT "tempo di coagulazione dell'ecarina" --> in base a quest'azione si può capire se c'è o meno un aumento del tempo di coagulazione.
Test specifico per valutare l'attività degli inibitori del FX --> si aggiunge eparina nel campione e poi FX attivato --> in base a quanto FX rimane libero (si osserva con tecniche colorimetriche9 --> si valuta se il dosaggio è corretto.

# data[].attributes.body
Mixing test
Serve per distinguere la carenza di un fattore della coagulazione dalla presenza di un inibitore --> si ripete il test PT o aPTT su una miscela 1:1 di plasma del paziente e plasma normale --> si incuba a 37 gradi per 30 minuti.
Risultati:
- PT o aPTT corretto → difetto di un fattore coagulativo
- PT o aPTT non corretto → presenza di un inibitore.
N.B. L’inibitore può essere per esempio un anticorpo. In questo caso io non so quale fattore manca quindi si può procedere facendo un altro test usando un plasma di riferimento, mancante di un fattore.

Dosaggio dei fattori della coagulazione:
Dosaggio del fibrinogeno:
Non è utile se PT e aPTT sono normali --> ci sono 2 metodi:
1)Coagulativo (funzionale) --> può essere a sua volta derivato o diretto.
2)Immunologico (non funzionale), consiste nella nefelometria o ELISA.
Livelli bassi di fibrinogeno:
• Insufficienza epatica
• CID
Livelli elevati di fibrinogeno:
• Reazione di fase acuta
• Gravidanza
NB: i valori fisiologici sono compresi tra 1,5 e 4 grammi per ogni litro di sangue

Dosaggio dell'antitrombina III
Deficit di antitrombina è associato a trombosi venosa --> può essere valutato assieme a proteina C e S.
È indicato prima di eseguire procedure chirurgiche, in caso di diatesi trombofilica, in caso di inadeguata risposta alla terapia anticoagulante con eparina.

Fibrinogenesi e fibrinolisi
E' costituito da domini D (domini laterali) e domini E (dominio centrale).
La trombina attiva la formazione di polimeri di fibrina.
Il fattore XIII stabilizza i polimeri di fibrina con cross-link.
La plasmina degrada la fibrina a FDP tra cui il D-dimero.

Plasminogenesi:
1. Via intrinseca → mediata da FXII, callicreina, HMWK
2. Via estrinseca → mediata da t-PA
3. Via esogena → mediata da urochinasi e streptochinasi

Dosaggio del D-dimero:
Il test del D-dimero viene utilizzato per escludere la presenza di un coagulo inappropriato (trombo).
Quindi può aiutare a escludere la trombosi venosa profonda TVP e l'embolia polmonare EP.
Ci sono 2 metodiche:
-Test di agglutinazione:
a)Test di agglutinazione con anticorpi: si utilizzano degli anticorpi specifici che si legano al D dimero e al globulo rosso.
Maggiore è la quantità di D-dimero e maggiore sarà l'agglutinazione (in quanto si formano degli agglutinati costituiti da anticorpo, D-dimero e globulo rosso)--> in base al grado di agglutinazione il campione sarà più o meno torbido --> questa verrà misurata con la turbidimetria.
b)Test di agglutinazione al lattice: si usano anticorpi legati al lattice, specifici per il D-dimero --> gli agglutinati formati dal D-dimero e dal lattice causano torbidità.
-Test immunoenzimatici:
a)Test ELISA: si mettono degli anticorpi sul fondo della piastra specifici per il D-dimero coniugati ad un fluorocromo --> si aggiunge il campione e si misura la fluorescenza emessa dall'anticorpo che ha legato il D-dimero.

Il dosaggio del D-dimero è indicato nel caso di sospetta embolia polmonare e trombosi venosa profonda, se il risultato è negativo si possono escludere entrambe mentre se è positivo --> oltre alle due menzionate si aggiungono queste (CID, epatopatie, nefropatie, neoplasie) o condizioni fisiologiche (gravidanza, intenso sforzo fisico). È un test che ha una bassa specificità e un basso valore predittivo positivo.

Le patologie dell’emostasi si distinguono in emorragiche e trombotiche.
Le patologie emorragiche sono:

Malattie emorragiche da difetto vascolare
Porpora da vasculite:
Test dell’emostasi:
- Numero piastrine
- aPTT
- PT
-Tempo di sanguinamento
Se tutti questi valori sono normali bisogna eseguire test reumatologici specifici.

Porpora trombotica trombocitopenica:
Test dell'emostasi:
- Numero delle piastrine → piastrinopenia
- Test della coagulazione → normali
Le cause possono essere da auto-anticorpi o da tossine (es. E. coli)

MALATTIE EMORRAGICHE DA DIFETTO PIASTRINICO QUALITATIVO CONGENITE:
1. MALATTIA DI VON WILLEBRAND (rallentamento della coagulazione del sangue che può provocare emorragie prolungate) → è causata da un difetto di adesività e deficit del vWF. In questo caso si possono fare vari test diagnostici:
o Concentrazione totale plasmatica dell’Ag del fattore di von Willebrand
o Test di funzionalità del fattore di von Willebrand
o Livelli plasmatici del fattore VII
o aPTT

2. SINDROME DI BERNARD SOULIER → causata da un difetto di adesività e deficit di gpIb-IX.
I test diagnostici sono:
- Tempo di emorragia allungato
- Adesività piastrinica ridotta
- Aggregazione piastrinica assente

3. TROMBOASTENIA DI GLANZMANN→ causata da un difetto di aggregazione e deficit di GP IIb- GPIIIb.
Test diagnostici:
- Mancata aggregazione piastrinica dopo l’esposizione ad adrenalina, collagene o ADP
- Aggregazione transitoria dopo l’esposizione alla ristocetina

MALATTIE EMORRAGICHE DA DIFETTO PIASTRINICO QUALITATIVO ACQUISITO:
Le cause possono essere:
- Produzione midollare di piastrine intrinsecamente anormali (es. disordini mieloproliferativi)
- Interazione delle piastrine con fattori esogeni (farmaci, anticorpi)
Test diagnostici:
- Conta piastrinica
- Tempo di sanguinamento
- Test di aggregazione piastrinica

MALATTIE EMORRAGICHE DA DIFETTO DEI FATTORI DELLA COAGULAZIONE
Le principali cause di queste patologie sono legate alla carenza di vit K, epatopatia, terapie anticoagulanti orali, malattie autoimmunitarie, emofilia acquisita.

EMOFILIA A → deficit di fattore VII (150 diverse mutazioni descritte). È una malattia X linked.
I test diagnostici sono:
- aPTT allungato
- dosaggio del FVIII: assente
- analisi genetica
EMOFILIA B → deficit di fattore IX (300 mutazioni conosciute). È una malattia X linked.
I test diagnostici sono:
- aPTT allungato
- Dosaggio del FIX: assente
- Analisi genetica

Le TROMBOSI
sono patologie che portano alla formazione di un trombo all’interno di un vaso. Si verificano se si hanno contemporaneamente tre condizioni (triade di Virchow):
1. Alterazione endoteliale
2. Modifiche del flusso ematico
3. Iper coagulabilità

TROMBOFILIA
È la tendenza all’ipercoagulazione con propensione di alcune persone a formare coaguli sanguigni che possono essere disseminati in varie parti dell’organismo. Le manifestazioni sono: trombosi arteriosa (il trombo si forma a causa di un danno endoteliale), trombosi venosa (l’endotelio è integro, il trombo si forma nel lume del vaso), aborti spontanei ricorrenti.

# data[].attributes.body
Processo coagulativo inseguito a danni vasali.
Emostasi primaria: tappo piastrinico
Emostasi secondaria: coagulo di fibrina
Empstasi terziaria: processo che porta all'attivazione del sistema fibrinolitico --> dissoluzione del coagulo.

Danno endotelio--> si contrae (in caso di arteriole e piccoli capillari, non per grandi vasi) --> riduzione del lume per limitare lo stravaso ematico --> contemporaneamente avviene il richiamo delle piastrine circolanti con le quali si scambiano messaggi molecolari --> attivazione piastrinica --> aggregazione--> aderiscono prima all'endotelio (per via del collagene subendoteliale che ha carica negativa e tramite dei fattori della coagulazione riesce a legare le piastrine che avendo anch'esse carica negativa tendono a respingere la parete endoteliale) --> quando si legano trasducono il segnale internamente --> cambio di forma e rilasciano il contenuto dei granuli e si aggregano con formazione del tappo piastrinico contemporaneamente si attivano le proteasi (rappresentate da fattori della coagulazione tra cui alcuni dotati di attività enzimatica o di cofattori) --> conversione del fibrinogeno in fibrina --> coagulo di fibrina.

Analisi dettagliata delle varie fasi:
1. VASCOLARE (inizio) → attività pro-coagulante sulla lesione endoteliale
Contrazione muscolatura liscia e formazione del trombo --> arrestare il flusso di sangue.

Piastrine--> esami
Trombocitopoiesi:
Progenitore unipotente CFU-Meg --> magacarioblasto --> endomitosi --> si formano nuclei poliploidi (fino a 64N) --> viene stimolato dalla trombopoietina a proliferare --> si dispone vicino i sinusoindi su cui invia dei filamenti plasmatici --> forma dei canali --> si frammenta in piastrine e immesse nei sinusoidi --> ognuno ne produce 400.

Conteggio delle piastrine

Fattori che favoriscono un non idoneo conteggio delle piastrine:

-Prelievo di sangue,
- Stasi venosa (il sangue non scorre correttamente nelle vene, causando un accumulo di sangue nei tessuti)
- Tempo intercorso dal prelievo all’analisi maggiore di sei ore
- Malattie autoimmuni
- Concomitanza di tumori
Indici piastrinici:
-MPV: volume piastrinico medio --> dimensione media delle piastrine --> riflette l'attività di produzione midollare, quelle giovani sono più grandi --> di solito 7-12fl.
-PDW: (ampiezza di distribuzione delle piastrine): indica il grado di anisocitosi piastrinica. I valori normali sono 10-16fl
-PCT (piastrinocrito): indica il volume di sangue occupato dalle piastrine --> 0,19/0,38%.
Morfologia:
forma ovoidale di 2-3micron, hanno uno sfondo chiaro (ialomero) e granuli viola al centro
Alterazioni quantitative delle piastrine:
a)Piastrinopenie: è caratterizzata da un basso numero di piastrine nel sangue <150.000/mm3
Possono essere:
-Acute: da farmaci (FANS, antibiotici) e malattie infettive (mononucleosi, malaria ecc)
-Croniche: Da aumentata distruzione periferica (MVP alto) --> per via di anticorpi antipiastrine (lupus eritematoso sistemico) o per sequestro piastrinico (es. cirrosi epatica).
Da ridotta produzione midollare (MPV basso) --> leucemia acuta.
b)Piastrinosi: condizione patologica, in cui il numero di piastrine è superiore a 400.000/500.000 per mm3 di sangue.
Causata da:
-Natura reattiva (post-emorragie)
-Disordine mieloproliferativo (es trombocitemia essenziale)
NB: Le malattie mieloproliferative croniche sono un gruppo eterogeneo di malattie caratterizzate da proliferazione anomala e neoplastica della cellula staminale mieloide. A causa di tale alterazione il midollo osseo produce troppi globuli rossi, globuli bianchi o piastrine.
Alterazioni qualitative delle piastrine:
test per vedere le alterazioni qualitative-->
-Test di aggregazione piastrinica: plasma ricco di piastrine -> si aggiunge un aggregante (ADP, trombina, acido arachidonico) -> poi si valuta l'aggregazione facendo passae la luce attraverso il campione (più luce passa e meno le piastrine sono aggregate) --> si costruisce una curva atipica.

-Test turbidimetrico: si costruisce una curva in relazione all'assorbanza del campione che dipende dalla torbidità.

-Test impedenzometrico (POCT): quando le piastrine si attivano aderiscono alle piastre dello strumento, di conseguenza si riduce la corrente che passa attraverso lo strumento stesso. Questa riduzione viene poi rilevata ed analizzata da alcuni sensori.

- Test di chiusura (POCT): sono fatte passare le piastrine attraverso un capillare e si vede il tempo che occorre per chiudere il capillare stesso.

Il tempo di emorragia è un test utilizzato per valutare la fase vascolare della coagulazione --> si effettua un piccolo taglio sull'avambraccio e esercitando una pressione di 40mmHg --> misura il tempo necessario per l'arresto spontaneo del sanguinamento --> valore normale inferiore a 10 minuti.
Se aumenta --> la causa potrebbe essere causato da vasculopatie croniche, malattia di von Willebrand, alterioni numeriche e qualitative delle piastrine.

2. PIASTRINICA (propagazione) → tappe enzimatiche con la formazione della trombina.
Consolida il trombo (formate da piastrine grazie a fattori piastrinici e di fattori di attivazione delle piastrine--> vengono rilasciati dalle piastrine stesse e dalle cellule) formato nella fase vascolare e di impedire la sua dissoluzione.

3. COAGULATIVA (termine) → contenimento del processo coagulativo.
I fattori della coagulazione vengono attivati e generano una cascata di reazioni che portano alla formazione del trombo stabile:
trombina --> attiva il fibrinogeno nel plasma --> fibrina --> polimerizza e si intreccia --> rete solida --> rafforza il tappo piastrinico --> sigilla la lesione vascolare e attira e attiva i leucociti e i fattori di fibrinolisi che stabilizzano il trombo e infine ne indurranno la degradazione.

Test di screening:
1. Tempo di protrombina (PT) o tempo di Quick, che indaga l’attività della via estrinseca e comune della coagulazione;

Si raccoglie il sangue intero in provetta con Na-citrato (si usa la provetta con il tappo azzurro) --> centrifuga --> raccoglie il plasma --> si aggiungono calcio e tromboplastina (fattore tissutale e fosfolipidi) e si lascia incubare per alcuni minuti --> misura il tempo impiegato alla formazione del coagulo di fibrina.
PT RATIO: rapporto fra (PT del paziente)/PT riferimento (0,8-1,2 che è il pool di plasma norlmalmente di riferimento).
ISI (international sensivity index): valore ottenuto dal produttore rispetto alla tromboplastina di riferimento della WHO (valore ideale: 1).
INR (international normalized ratio): normalizzazione del PT ratio in base ad ISI.
CAUSE INR ELEVATO:
- Uso di anticoagulanti (hanno valore IRN tra 2 e 3)
- Ridotta sintesi dei fattori coagulativi (epatopatie croniche, carenza di vitamina K)
- Aumentato consumo di fattori della coagulazione (sepsi, CID)

2. Tempo di tromboplastina parziale attivata (aPTT), che indaga la via intrinseca e comune. N.B. per tromboplastina si intende il fattore tissutale attaccato ai fosfolipidi.

Si raccoglie il sangue con Na-citrato come anticoagulante e si raccoglie il plasma --> si aggiungono calcio e tromboplastina parziale (solo fosfolipidi) e agenti attivanti --> si incuba per 5 minuti e poi si misura il tempo in secondi per formare il coagulo di fibrina dopo l'inserimento del calcio --> valore normale è di 25-40s.
Metodo di calcolo:
aPTT ratio: aPTT paziente/aPTT riferimento. Valori normali: 0,8-1,2
Se i valori sono superiori a 1,2:
-difetto congenito (FXII, precallicreina, HMWK, FXI, FIX, FVII, FV, FX, trombina, fibrinogeno)
- difetto acquisito (FXII, HMWK, precallicreina, FXI, FIX, FVII, FV, FX, trombina, fibrinogeno)
Altri: • Uso di anticoagulanti • Malattia di von Willebrand • Emofilia • Sindrome da anticorpi anti-fosfolipidi • Sepsi • CID

3. Tempo di trombina (TCT), che misura esclusivamente l’attività della trombina nel convertire il fibrinogeno in fibrina, e non dà alcuna informazione su cosa possa essere successo a monte.

Si raccoglie sempre il sangue intero in proveta con sodio citrato --> centrifuga --> si raccoglie il plasma, si aggiungono calcio e trombina esogena --> si lascia incubare per alcuni minuti --> si misura il tempo in secondi per formare il coagulo di fibrina dopo l'inserimento di calcio.
Il valore normale è di 12-14 secondi.

Di solito si prescrivono conta piastrinica, PT e PTT-> questi permettono di capire se il sanguinamento riguarda le piastrine o una delle vie della coagulazione (dopo nel caso si ricerca il fattore danneggiato).
Tutti questi esami si fanno da un prelievo di sangue --> sangue in una provetta con anticoagulante.

4. FIBRINOLITICA (risoluzione) → fibrinolisi e ricostruzione del lume vascolare

# data[].attributes.body
Fanno parte dei disordini genetici (catene alpha e beta) della sintesi dell'emoglobina e sono alterazioni di tipo quantitativo della composizione dovute a perdita, sostituzione o aggiunta di amminoacidi in una delle catene.

Classificazione:
- Alterazioni qualitative:
• Anomala polimerizzazione (HbS)
• Anomala cristallizzazione (HbC)
• Emoglobine instabili § Hb con > affinità per O2 (policitemia)
• Hb con < affinità per O2 (cianosi)
• Anomala polimerizzazione (HbS)
• Anomala cristallizzazione (HbC)
• Emoglobine instabili § Hb con > affinità per O2 (policitemia)
• Hb con < affinità per O2 (cianosi)

- Alterazioni quantitative:
• Alfa-talassemia
• Beta-talassemia
• Delta/Beta-talassemia
• Alfa-talassemia
• Beta-talassemia
• Delta/Beta-talassemia

Anemia falciforme: autosomica recessova, HbS: mutazione al sesto AA della catena beta (A.glutammico--> valina) --> Hb diventa meno solubile e tende a precipitare nell'eritrocita che assume la forma a falce --> gli eterozigoti sono protetti dalla malaria.
Diagnosi:
• Emocromo: Anemia Normocromica, leucocitosi, trombocitosi, reticolociti 5-30%
• Striscio di sangue periferico: Drepanociti, policromasia, emazie nucleate, corpi di Jolly
• Midollo osseo: Iperplasia
• Fragilità osmotica: diminuita
• Elettroforesi dell’Hb: HbS 50-80%, HbF presente, HbA2 normale, rapporto HbA/HbS 60:40
• TEST della falcizzazione (metabisolfito di sodio): positivo

Beta talassemia: sono sintetizzate in eccesso le catene alfa e gamma --> la beta-talassemia major (o Morbo di Cooley) è la più grave perchè omozigote.
La forma eterozigote è minor e major.

# data[].attributes.body
Definizione: riduzione dell'Hb al di sotto dei livelli di normalità che determina una ridotta capacità del sangue di trasportare ossigeno.

Morfologia: dimensioni degli eritrociti --> descritta precedentemente (macrocitico,normo e micro)

Patogenetica:
• Difetto di produzione • Aumentata emolisi • Perdita • Difetti di compartimentazione

Classificazione patogenetica:
-Difetti di produzione:
o Difetti del precursore ematopoietico
o Difetto della sintesi di DNA
o Difetto della sintesi dell’eme
o Carenza di EPO.
-Perdità: emorragie acute o croniche
-Difetti di compartimentazione: ipersequestro splenico
-Aumentata emolisi: difetti eritrocitari e fattori extra-eritrocitari

Diagnosi anemia, da aplasia midollare: difetto di produzione da difetto del precursore eritropoietico.
• Normocitica e Normocromica,
• Riduzione di tutte le cellule del sangue,
• Bassa percentuale di reticolociti < 1%,
• Aumento Sideremia e Ferritina,
• Possibili cause: Farmaci antiblastici, sostanze chimiche, radiazion

Diagnosi anemia megaloblastica: difetto di produzione da difetto della sintesi di DNA
• Macrocitica ipercromica,
• Basso dosaggio di vit. B12 e/o acido folico,
• Acido metilmalonico e omocisteina elevati (carenza vit.B12),
• Solo omocisteina elevata (carenza folato),
• Test di Schilling positivo (se deficit di fattore intrinseco),
• Presenza di Ab anti-FI.

Diagnosi di anemia sideroblastica: difetto di produzione da difetto di sintesi dell'eme.
• Microcitica ipocromica / Anisocitosi,
• Aumento di sideremia e ferritina,
Possibili cause:
o Congenite (emocromatosi ereditaria),
o Acquisite (sindrome mielodisplastiche, artrite reumatoride),
o Da emopatie maligne (leucemie, policitemia),
o Da farmaci (isoniazide, cloramfenicolo),
o Da intossicazioni (Pb, alcol),

Diagnosi anemia sideropenica e anemia da patologia cronica: difetto di produzione da difetto di sintesi dell'eme.

Diagnosi anemia da insufficienza renale: difetto di produzione da carenza di EPO
-Normocitica normocromica
-Aumento dell'azotemia e creatinemia
-Basso dosaggio della eritropoietina plasmatica

Diagnosi anemia da sanguinamento:
o Normocromica Normocitica
o Dato anamnestico di emorragie acute e croniche
o Ricerca di possibili sedi di sanguinamento occulto
o Cause più frequenti di emorragia cronica:Gastrite erosiva / ulcera peptica, varici esofagee, Proctorragia (es. da emorroidi), Neoplasie benigne o maligne del colon

Diagnosi anemia da ipersplenismo:
o Normocromica Normocitica
o Riscontro obiettivo (o ecografico) di splenomegalia
o Possibili cause di splenomegalia: acromegalia, anemia, cirrosi biliare primitiva, cirrosi epatica, leucemia, lupus erimatoso sistemico, mononucleosi, rosolia, sepsi, toxoplasmosi, tubercolosi.

Diagnosi anemie emolitiche:
• Normocromiche Normocitiche
• Da difetti eritrocitari (o intra-corpuscolari): difetti di membrana, difetti enzimatici, difetti dell'emoglobina.
• Da fattori extra-eritrocitari (o extra-corpuscolari): Autoanticorpi, farmaci, malattie infettive, setticemia, malattie del metabolismo, trasfusioni di sangue di gruppo incompatibile, parassiti (Babesia, Trypanosoma), squilibri osmotici.

Test diagnostici:
Test di Coombs diretto: si applica a malattie emolitiche autoimmuni e malattie emolitiche del neonato e per reazioni trasfusionali.

Test di Coombs indiretto: si usa per incompatibilità donatore/ricevente per emotrasfusioni, ricerca di specifici anticorpi anti-emazie

Test di fragilità osmotica:
Gli eritrociti vengono esposti a soluzioni saline sempre più diluite --> negli eritrociti normali l'emolisi comincia a 0,48% NaCl, completa a 0,3%.
Sferociti: emolisi comincia poco sotto 0.9%
Drepanociti: più resistenti all'emolisi.

# data[].attributes.body
Struttura: acido pteroilmonoglutammico e poliglutammati --> viene convertito in acido tetraidrofolico --> deve essere convertito in acido tetraidrofolico come accettore di unità carboniose.
Funzione:
E' un cofattore enzimatico --> partecipa a numerosi processi metabolici come la sintesi di purine e pirimidine e la conversione dell'omocisteina in metionina (cofattore vitamina B12) e la conversione di serina in glicina (cofattore vit B12), inoltre, è coinvolto nel metabolismo dell'istidina e al mantenimento della normale eritropoiesi.

# data[].attributes.body
Fegato--> epatocita --> epcidina --> regolazione del riciclo del ferro e dell'equilibrio del ferro corporeo.
Fegato--> emocaretesi --> si libera ferro -->depositato come emosiderina o ferritina o riutilizzato per le nuove emazie --> i progenitori eritroidi legano con il recettore la transferrina con 2 atomi di ferro --> endocitano --> incorporano nel gruppo eme prodotto nei mitocondri.

Compartimenti di deposito del ferro:
-Emoglobina 65% mioglobina 4%
-Ferritina o emosiderina 30%
-Transferrina 1%
Sideremia o ferro sierico: parametro poco sensibile per via della grande variabilità individuale in base all'alimentazione ed ai ritmi circardiani --> diminuisce quando le riserve non compensano il deficit --> maschi: 59-158 microg/dl, femmine: 37-145microg/dL.
Patologie che ne determinano l'aumento:
• Emocromatosi idiopatica, • Emosiderosi (da eccessiva assunzione), • Emosiderosi (da ripetute trasfusioni), • Anemie emolitiche, • Necrosi epatica, • Epatopatie croniche • Fase premestruale
Patologie che la diminuiscono:
• Talassemie, • Anemia sideropenica, • Anemia da malattia cronica, • Sindrome nefrosica, • Polimenorrea, • Ustioni estese, • Gravidanza.

Ferritina: E' una proteina di fase acuta --> dà informazioni sia sull'eccesso, che sulla carenza di ferro.
NB: 1ng/mL = 8-10mg di ferro di deposito.
Maschio: 30-300ng/mL
Femmine: 15-200ng/mL
Aumenta nei casi di:
• Infezioni, • Epatopatie acute e croniche, • Neoplasie,  • Necrosi epatica, • Epatopatie croniche • Fase premestruale • Polimenorrea, • Ustioni estese, • Gravidanza. • Alcolismo, • Ipertiroidismo, • Infarto miocardico acuto.
Quando diminuisce: Anemia sideropenica e nei Vegetariani.

Transferrina sierica: proteina che presenta 2 siti di legame per Fe3+ e non lega Fe2+ --> è sintetizzata a livello epatico (emivita 7gg) --> la sintesi è regolata dalla disponibilità di ferro.
Può presentarsi come: Apotransferrina, Trasferrina monoferrica e Transferrina diferrica.
Aumenta nei casi di: uso di anticoncezionali, gravidanza e carenza di ferro.
Casi in cui diminuisce:
• Sindrome nefrosica, • Epatopatie, • Malattie infiammatorie croniche, • Neoplasie, • Malnutrizione • Terapia marziale, • Terapia cortisonica, • Diagnostica ematologica, • Globuli rossi Metabolismo del ferro.

TIBC: Total Iron Binding Capacity: quantità di ferro necessaria per saturare al 100% la transferrina, è inversamente proporzionale alla sideremia --> 240-450microg/dL.
Quando aumenta: • sideropenia • Emorragia acuta e cronica, • Epatopatia acuta, • Gravidanza
Quando diminuisce: • Emocromatosi, • Cirrosi epatica, • Talassemia, • Anemia perniciosa, • Anemie emolitiche, • Infezioni, • Sindrome nefrosica e ipertiroidismo.

Saturazione della tranferrina sierica: è la percentuale di siti di legame del ferro che sono occupati.
calcolo: Saturazione transferrina %= Sideremia/TIBC, valori di riferimento: 20-50%.
- Quando aumenta: Emocromatosi, Emosiderosi, Talassemia, Anticoncezionali.
- Quando diminuisce: Anemia sideropenica, Infezioni, Malattie infiammatorie croniche

Recettore solubile della transferrina (STFR): presente nell'80% da progenitori eritroidi, 20% da altri tessuti.
Varia in relazione all'eritropoiesi per distacco della membrana degli eritrociti --> i recettori si staccano e diventano solubili.
Esprime la carenza di ferro nei precursori eritroidi midollari.
Risulta in eccesso nei casi di eritropoiesi inefficace (talassemia, dialisi, intossicazione da piombo).

Vitamina B12:
Struttura anello corrinico composto da 4 anelli pirrolici e 3 ponti metinici, al centro vi è un atomo di cobalto (Co3+) legato a 4 atomi di azoto e due legami perpendicolari al piano dell'anello con 5,6dimetilbenzimidazolo (legata a un ribosio-3-fosfato) e 5'deossiadenosilcobalamina.
Ruolo nell'eritropoiesi: coadiuva la reazione citoplasmatica tra metil-folato e omocisteina --> metionina che insieme all'acido folico è necessaria per la formazione del DNA specialmente nelle cellule ad intensa attività mitotica.
Metabolismo:
-Bisogno giornaliero modesto, essendo che le riserve permettono l'eritropoiesi per 4 anni a partire dal giorno di non assunzione.
-Assorbimento: nell'ileo in presenza di  fattore intrinseco (glicoproteina secreta da cellule parietali di corpo e fondo dello stomaco)
-Viene trasportata nel sangue dalla transcobalammina I e II.

Test di Schilling: si usa per valutare la capacità d'assorbimento dell'intestino tenue.
Svolgimento: si somministrano contemporaneamente vit B12 marcata e non marcata --> quella marcata viene eliminata con le urine mentre quella non marcata viene assorbita --> si misura la vit B12 marcata urinaria che rappresenta una misura di quella assorbita per via intestinale --> valore di riferimento >8%.