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Uma vez preparados os cromossomos, através das técnicas citológicas podemos montar o cariótipo. Para montar o cariótipo as dispersões metafásicas bem coradas são fotografadas e cada imagem dos cromossomos são recortadas e combinadas com a de seus parceiros formando os pares homólogos.

Deve-se então organizar os pares em ordem decrescente de tamanho, sendo assim o maior par com número 1 e o menor par com número 21, o segundo menor par é o número 22 por motivos históricos. O cromossomo X é de tamanho intermediário e o Y possui quase o mesmo tamanho do par 22.

É preciso levar em consideração que ao escolher os conjuntos de cromossomos só se deve escolher os com qualidade suficiente para identificação inequívoca, não escolher metáfases muito próximas  pois pode ocorrer sobreposição de cromossomos pertencentes as células diferentes.

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Em algumas ocasiões as técnicas convencionais podem não ser necessárias para determinar o resultado de uma análise.

Atualmente temos uma técnica mais avançada que permite criar imagens coloridas dos cromossomos, além de permitir a identificação de genes específicos a Hibridização fluorescente in situ.

Nessa técnica é utilizada sondas ligadas a corantes fluorescentes para corar os cromossomos, as sondas. A sonda é um fragmento de DNA que pode por exemplo, pertencer a um gene específico. Essa sonda se liga ao seu par complementar no cromossomo.

Entre as finalidades desses tipos de marcação temos: detectar anomalias cromossômicas como microdeleções e rearranjos complexos, diagnósticos de leucemia e etc.

Existe uma variação dessa técnica chamada iFISH, ela é realizada em células durante a interfase e permite a detecção de anomalias cromossômicas encontradas apenas em pequenas grupos de células bem difíceis de ser encontradas, até mesmo pelas técnicas de iFISH.

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O bandeamento T cora a região dos telômeros.

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Há também o bandeamento C que permite a identificação da heterocromatina constitutiva e que temos um DNA altamente repetitivo próximo das regiões dos centrômeros.

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O bandeamento R é o reverso, resulta num padrão de bandas escuras e claras, inverso ao bandeamento G.

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Outra técnica utilizada para detectar essas anomalias é o bandeamento G, para se realizar essa coloração, primeiro os cromossomos sofrem ação da Tripsina, uma enzima proteolítica, para depois serem corados com Geimsa.

Esse bandeamento coincide com o bandeamento Q. As bandas G escuras correspondem as bandas Q brilhantes e as bandas G claras corresponde as bandas Q escuras. As bandas G claras mostram regiões ricas em base GC e com muitos genes ativos.

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O bandeamento Q foi descoberto logo em seguida, é realizado através do uso da Quinacrina permitindo obter um padrão de bandas brilhantes e opacas que é característico para cada par de cromossomo.

Essa coloração é fluorescente e deve ser observada através da luz ultra violeta (UV) e possui uma utilidade de detectar deleções, inversões e duplicações nos cromossomos.

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Uma das primeiras colorações utilizada era a coloração com Reagente de Feulgen, que por tingir o cromossomo de forma uniforme, dificultava a distinção de um cromossomo do outro, assim se tornou necessário técnicas de coloração que se permitissem uma diferenciação mais exata dos cromossomos.

Para isso temos as técnicas de bandeamento, essas técnica colorem seletivamente o cromossomo o qual apresentam um padrão específico de faixas ou bandas, permitindo assim um maior entendimento das alterações cromossômicas.

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Passo a passo de Técnica de Análise Citogenética

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Passo a passo de Técnica de Análise Citogenética

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Atualmente é possível realizar o uso da análise em diferentes tipos de células. Nos humanos é utilizado a cultura de leucócitos extraídos do sangue periférico.

O primeiro passo: Recolhe-se o sangue periférico e em seguida as células são inoculadas no meio de cultura. É adicionado um agente mitogênico que irá estimular a divisão das células dos linfócitos. Deixa-se esse meio encubado por até cinco dias.

Segundo passo: Depois da encubação adiciona-se colchicina ao meio, essas substância irá fazer com que as células durante o ciclo celular pare na etapa da metáfase.

Terceiro passo: É feito a centrifugação para retirada da colchicina e então as células são colocadas em um meio hipotônico que provocará lise das membranas plasmáticas e maior espalhamento dos cromossomos.

Quarto passo: É realizada mais uma centrifugação para retirada do meio hipotônico e fixação por meio de ácido acético e metanol. São feitas várias lavagens com fixador.

Quinto passo: Coloca-se uma gota de suspenção em uma lâmina de vidro. É preparado uma solução para corar os cromossomos para melhor observá-lo e analisá-lo.

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Como é ideal que a célula esteja na divisão celular para ser feito a análise, os primeiros estudos deste tipo eram feitos em tecido durante o crescimento, tais como: embriões de animais e as extremidades de raízes de vegetais. Porém com a evolução das técnicas é possível realizar a análise em outras células.

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Esse estágio é o ideal pois nessa etapa da divisão celular as cromátides apresentam o máximo de condensação, isso facilita a visualização dos cromossomos. Mas antes de analisar esses cromossomos é necessário realizar a preparação desse material genético.

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As células usadas nessas técnicas encontram-se geralmente em um estágio da mitose denominado metáfase. 

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Como acontece a Análise da Técnica Citogenética? 

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Como acontece a Análise da Técnica Citogenética? 

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Para podermos detectar algumas doenças e estudas alterações cromossômicas de organismos é necessário fazer o uso de técnicas de análise citogenética.
Com essas técnicas que envolve a preparação e coloração dos cromossomos podemos analisar o número e a estrutura destes.