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A cubeta é o instrumento utilizado para comportar a solução a ser analisada. Por sua vez, é de extrema importância que seja manuseada com cuidado, pois a luz será incidida (pela fonte de luz na cubeta. Dado isso, qualquer micro ranhura causará erro na leitura. Então PELO SANGUE DE CRISTO, peguem a cubeta em seus dois lados foscos e façam a lavagem e rinçagem adequadamente.

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Passo a passo da criação da curva de calibração TOP TOP TOP (por Mayara)

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Passo a passo da criação da curva de calibração TOP TOP TOP (por Mayara)

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1° Montar duas colunas com seus eixos (o Excel lê a primeira coluna preenchida como o eixo "X") identificando-as e não esquecendo das unidades.
2° Deixar os valores com o mesmo número de casas decimais e centralizar os dados.
3° Selecionar tudo (as identificações e seus dados), ir em "inserir" e selecionar "gráfico de dispersão".
4° Clicar em um dos pontos com o lado direito do mouse e selecionar "Linha de tendência". Aparecerá um aba lateral, nela, selecionar "exibir equação no gráfico" e "R-quadrado".
5° Clicar em "elementos do Gráfico" (sinal de + que fica ao lado do gráfico) e editar título do gráfico e títulos dos eixos.
TÁ PRONTA SUA CURVA DE CALIBRAÇÃO TOP TOP TOP

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Curiosidades sobre as cubetas ( Victoria Soares): 

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Curiosidades sobre as cubetas ( Victoria Soares): 

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Podem ser de vidro ou quartzo.
A cubeta de Quartzo proporciona uma análise do analito de forma mais eficaz, pois é dentre as cubetas existentes a que apresenta a menor absorbância.
Cubeta de Quartzo, pisa menos!!

(JULIO)
Tem um diferencial a mais para a cubeta de quartzo. qual é?

(Victoria)
Além disso o material da cubeta de quartzo não apresenta uma absorbância significativa na faixa na faixa UV-Vis, ao contrário das cubetas de plástico e vidro que apresentam absorbâncias altas principalmente na região do UV.

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O importantíssimo Branco ( Victoria Soares):

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O importantíssimo Branco ( Victoria Soares):

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Para que nossa analise obtenha o resultado mais exato e sensível em relação ao nosso analito, deve-se antes de começar a leitura da amostra, realizar o BRANCO que nada mais é do que tudo que compõem sua solução, EXCETO O SEU ANALITO. Dessa forma informamos ao espectrofotômetro o valor a ser descontado, para que a absorbância registrada seja somente do analito de interesse.

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Condições para a Lei de Lambert Beer (Victoria Soares):

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Condições para a Lei de Lambert Beer (Victoria Soares):

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Algumas condições que são necessárias para a validação da lei:
1. Meio homogêneo, ou seja de igual índice de refração em todas direções;
2.Ausência de reações indesejáveis entre moléculas do soluto e moléculas do solvente.

(JULIO):
O meio deve ser homogêneo, maravilha!
Mas o meio em si altera algo na Lei de Labert-beer? Exemplo: Se meu cromóforo está solubilizado em água ou em isopropanol, faz diferença?

(Victoria)
Sim, o meio altera a lei de Beer. Visto que podemos ter associações moleculares  (interação das moléculas absorventes entre si ou com o solvente), podemos ter também deslocamento de equilíbrio (como nas soluções aquosas de cromato e dicromato). Podemos assim chegar a conclusão que para medirmos a absorbância de um analito, deve-se levar em conta o meio onde ele se encontra.

Isso! (Julio)

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Qual é a diferença? FOTOCOLORÍMETRO X ESPECTROFOTÔMETROS (Victoria Soares):

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Qual é a diferença? FOTOCOLORÍMETRO X ESPECTROFOTÔMETROS (Victoria Soares):

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Os espectrofotômetros e fotocolorímetros diferem entre si quanto a maior ou menor sensibilidade e faixa de trabalho. Os espectrofotômetros são empregados na faixa compreendida entre 200 e 1000 nm. Os fotocolorímetros em geral trabalham na zona do visível (380-780nm).

(JULIO):
O que causa a diferença na sensibilidade das análises por fotocolorímetros e por espectrofotômetros?

A diferenciação da sensibilidade é dada pelo coeficiente angular apresentado pela curva de calibração de cada análise. Sendo, assim quanto menor o coeficiente angular, menor será a sua sensibilidade e mais difícil será definir a concentração do seu analito em absortividades parecidas. (acho que falei merda kkkk, perdoa) :)

(Julio)
QUanto menor a sensibilidade, mais difícil diferenciar concentrações próximas.

Quem é mais sensível?
Por que? (a resposta principal, dentre outras,  é por conta de um elemento na construção do equipamento)

(Victoria)
O mais sensível é o fotocolorímetro. Sendo assim na
construção do monocromador o seletor de comprimento de onda é encontrado antes do porta amostra, ou seja, é necessária a definição do comprimento de
onda para se poder fazer uma análise quantitativa do analito, possibilitando uma análise mais precisa do analito.

(Julio)
Não... O fotocolorímetro pe menos sensível. Nele, emprega-se filtros como elementos seletores de comprimento de onda. Os filtros não conseguem selecionar faixas estreitas em torno do lãmbda máximo , na verdade o filtro seleciona faixas maiores..
Espectrofotômetros apresentam monocromador com rede de difração... Quanto melhor a seleção do comprimento de onda em torno do lâmbda maximo, mais sensível é a determinação quantitativa do analito.

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Eu acho que o meio importa pq deve alterar o coeficiente de absortividade.

Isso!!! (Julio)

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Para realização de uma analise por espectrofotometria seja ela em um fotocolorímetro ou espectrofotômetro é indispensável a presença de uma fonte de luz na construção do equipamento.
Ela é responsável por fornecer a energia eletromagnética necessária à amostra.

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Podemos definir luz através da teoria corpuscular e ondulatória:
TEORIA CORPUSCULAR ---> Luz é um feixe de partículas minúsculas, emitidas, transmitidas ou refletidas por um objeto, que atinge os olhos estimulando a visão.
TEORIA ONDULATÓRIA--> Luz é um tipo de energia radiante, emitida, transmitida ou refletida por um objeto, em forma de ondas do mesmo modo que o som e outros tipos de ondas, que atinge os olhos estimulando a visão.

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Bizu da sensibilidade usando a curva de calibração (Rafa)

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Bizu da sensibilidade usando a curva de calibração (Rafa)

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Através da curva de calibração, obtida pela leitura de absorbância das soluções, em diferentes concentrações, mas com o mesmo analito, é possível verificar a sensibilidade do equipamento, já que a equação da reta (obtido no gráfico TOP TOP TOP que a Mayara deu tutorial) nos fornece o coeficiente angular. Um coeficiente angular maior indica maior sensibilidade, EU ACHO!

* Dúvida para os amiguinhos e para o prof:  Qual a relação entre o coeficiente angular e a sensibilidade?
(Sei  que o coeficiente angular tem uma relação direta com a sensibilidade, como disse, mas não sei o pq disso!)
Obs: Sei que devia saber, mas não sei!

(Julio)
O coeficiente angular determina a curvatura da curva de calibração e quanto maior o ângulo que a curva faz com o eixo x, maior a capacidade da curva em diferenciar concentrações próximas...

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Coeficiente angular da curva de calibração indica a  sensibilidade da curva e não a sensibilidade do equipamento....

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Monocromador e Rede de Difração (Victoria)

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Monocromador e Rede de Difração (Victoria)

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Para efetuarmos uma análise na faixa do visível, precisamos decompor a luz (policromática), pois ela apresenta todas as cores, ou seja, todos os comprimentos de onda. Então, a parte responsável por efetuar essa decomposição é a rede de difração que é feita de um material rígido e polido que possui algumas ranhuras que são capazes de decompor a luz. Após a decomposição da luz, temos a colimação desses feixes (direcionamento dos feixes de luz) em relação ao porta amostra ou ao detector (Depende do tipo do equipamento) e logo após temos uma fenda seletora que determina uma faixa de comprimento que será ideal para sua análise.
Ex práticos de decomposição da luz por redes de difração: CD's ou DVD's.
Obs: As ranhuras feitas na rede de difração são feitas com discos de DIAMANTE ($$$$$) KKK.

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Um fato interessante, é que podemos dizer que a energia dos fótons está diretamente proporcional à energia luminosa, na qual é determinada pela frequência e pelo comprimento de onda (lâmbdazinho).

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Os detectores de radiação geram um sinal elétrico proporcional à luz não absorvida(P), e esse sinal elétrico é transformado(através de um medidor ou registrador) em um valor numérico que seria a transmitância podendo ser representada em porcentagem e convertida para absorbância através da formula A=Log 100/%T.

# data[].attributes.body
Po --> Seria a quantidade de luz incidida na amostra.
P --> É a quantidade de luz que a amostra não absorveu, passou direto.
T --> Quantidade de luz transmitida. A --> Quantidade de luz absorvida. Ex.: se temos um objeto amarelo, vemos ele amarelo porque ele absorveu todos os outros comprimentos de onda, menos o comp. de onda da região do amarelo.