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O que é?

É o processo que controla os genes do DNA da célula que são expressos.

O grupo de genes expressos em uma célula que determina as proteínas e RNAs funcionais que ela possui, o que dá características únicas a elas, apesar de todas as celulas terem o mesmo DNA.

Em eucariontes, a expressão gênica envolve várias etapas e a regulação de genes pode acontecer em qualquer uma delas. Contudo, muitos genes são regulados primariamente no momento da transcrição.

Graças aos diferentes padrões de expressão gênica, que permite os vários tipos celulares possuam conjuntos diferentes de proteínas, isso faz com que cada célula especializada fazer seu trabalho.

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Visão geral: Regulação gênica em eucariontes (artigo) | Khan Academy

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Como diferentes genes são expressos em diferentes tipos de células. O panorama da regulação gênica eucarionte.

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A hemoglobina é a proteína encontrada nas hemácias. Formada pelo heme, uma parte que contém ferro e por cadeias de aminoácidos chamadas globina. A hemoglobina se liga ao oxigênio nos pulmões e o distribui para a células de todo o corpo.
Os tipos normais de hemoglobina são:
•	Hemoglobina A - Representa 95% a 98% da hemoglobina encontrada em adultos; contém duas cadeias proteicas alfa (α) e duas cadeias proteicas beta (β).
•	Hemoglobina A2 - Cerca de 2% a 3% da hemoglobina total em adultos; tem duas cadeias proteicas alfa (α) e duas cadeias proteicas delta (δ)
•	Hemoglobina F - Até 2% da hemoglobina total em adultos; tem duas cadeias proteicas alfa (α) e duas cadeias proteicas gama (γ). É a principal hemoglobina produzida pelo feto durante a gestação. Sua produção diminui muito após o nascimento

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Variantes da hemoglobina ocorrem quando alterações genéticas mudam a sequência de  aminoácidos da globina. Essas mutações alteram a estrutura da hemoglobina e podem alterar seu comportamento, velocidade de produção ou estabilidade. Há quatro genes que codificam a cadeia alfa da globina e dois que codificam a cadeia beta. O distúrbio mais frequente relacionado com as cadeias alfa é a talassemia alfa. Sua gravidade depende do número de genes afetados.
As variantes da cadeia beta da hemoglobina são herdadas como um traço autossômico recessivo. Isso significa que a pessoa deve ter dois genes alterados, herdados um do pai e outro da mãe, para apresentar a doença relacionada com a variante da hemoglobina. Se herdar um gene normal e um anormal, é chamada heterozigota para a hemoglobina anormal ou portadora. O gene anormal pode ser transmitido para os filhos, mas não causa problemas de saúde no portador.

Se dois genes anormais forem herdados, a pessoa é homozigota, e apresenta sintomas e complicações associadas à anormalidade. A gravidade da doença depende da mutação específica, e varia para cada indivíduo.

Quando são herdados dois genes de mutações diferentes, a pessoa é chamada dupla heterozigota, e pode apresentar sintomas característicos de uma ou das duas variantes produzidas.

São conhecidas algumas centenas de variantes da cadeia beta, mas apenas algumas são comuns e têm importância clínica.

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Hemoglobina S: é a principal hemoglobina em indivíduos com anemia falciforme. Quem possui a doença tem dois genes beta anormais (βS) e dois genes alfa normais. A presença da hemoglobina S provoca deformação das hemácias quando são expostas a baixos níveis de oxigênio, assumindo um formato de foice. As hemácias afoiçadas podem bloquear pequenos vasos sanguíneos, causando dor, prejudicando a circulação e diminuindo o tempo de vida das hemácias. Uma cópia isolada do gene βS não causa sintomas, a não ser quando combinada com outra variante da hemoglobina, como a da hemoglobina C (βC).

Hemoglobina C: cerca de 2% a 3% da descendência de pessoas da África ocidental são heterozigotas para esta hemoglobina (têm uma cópia do gene βC). Homozigotos, que possuem duas cópias do gene βC, são raros e têm uma doença relativamente branda. Apresentam graus variáveis de anemia hemolítica e aumento pequeno ou moderado do baço.

Hemoglobina E: é uma das variantes da cadeia beta da hemoglobina mais comuns no mundo. É muito frequente no sudeste asiático, especialmente Camboja, Laos e Tailândia, e em descendentes de pessoas dessa região. Homozigotos para hemoglobina E (com duas cópias do gene βE) apresentam anemia hemolítica branda, microcitose e aumento discreto do baço. Uma cópia única do gene não causa sintomas, a não ser quando associada a outra mutação, como o traço talassêmico beta.

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Existem muitas outras variantes. Algumas não causam sinais nem sintomas, enquanto outras afetam a função ou a estabilidade da molécula da hemoglobina. Exemplos dessas outras variantes incluem hemoglobina D, hemoglobina G, hemoglobina J, hemoglobina M e hemoglobina Constant Spring, uma mutação do gene da cadeia alfa da globina que resulta em uma cadeia alfa (α) muito longa e em uma molécula de hemoglobina instável. Outros exemplos de distúrbios genéticos da hemoglobina são:

Hemoglobina F: é o principal tipo de hemoglobina produzido pelo feto, sendo mais eficiente para transportar oxigênio em ambientes com pouca quantidade desse gás. A produção dessa hemoglobina diminui no nascimento e atinge os níveis de adultos em cerca de um ano. Pode permanecer elevada em diversos distúrbios hereditários. Os níveis são normais ou aumentados na talassemia beta e, com frequência, elevados em pessoas com anemia falciforme ou com a combinação de anemia falciforme e talassemia beta. Indivíduos com anemia falciforme e aumento da hemoglobina F podem ter uma doença mais branda porque esse tipo de hemoglobina inibe o afoiçamento das hemácias. Os níveis de hemoglobina F também permanecem aumentados na persistência da hemoglobina fetal, distúrbio hereditário assintomático (sem sintomas). Existem diversas mutações diferentes que causam persistência da hemoglobina fetal.

Hemoglobina H: hemoglobina anormal que ocorre em alguns casos de talassemia alfa. É composta de quatro cadeias beta (β) e ocorre quando há falta de síntese de cadeias alfa (α). Embora as cadeias beta (β) sejam normais, a função do tetrâmero não é normal. A molécula de hemoglobina resultante tem grande afinidade pelo oxigênio, o que diminui a liberação desse gás para as células.

Hemoglobina de Bart: ocorre em alguns fetos com alfa talassemia. É formada por quatro cadeias gama (γ). Como tem afinidade muito grande pelo oxigênio, com frequência causa morte fetal ou nos primeiros meses de vida.

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Uma pessoa pode herdar dois genes anormais diferentes, um do pai e um da mãe, sendo chamada heterozigota composta. Exemplos:

Hemoglobinopatia SC. A herança de um gene beta S e/ou gene beta C resulta na hemoglobinopatia SC. Pessoas com essa situação têm anemia hemolítica branda e aumento moderado do baço. Podem apresentar oclusões vasculares como as observadas na anemia falciforme, em geral menos graves.

Hemoglobinopatia SD. Quem herda um gene beta S e um gene beta D pode apresentar oclusões vasculares ocasionais e anemia hemolítica moderada.

E-talassemia Heterozigotos compostos para hemoglobina E e talassemia beta têm anemia de intensidade variável, de branda (ou assintomática) a grave.

S-talassemia. A combinação dos genes beta S e de beta talassemia causa anemia de grau variável, dependendo da mutação talassêmica herdada. A produção de cadeias beta pode estar reduzida (beta⁺) ou completamente eliminada (beta⁰). A combinação beta S e beta⁺ talassemia tende a ser menos grave que a combinação beta S e beta⁰ talassemia. Os pacientes com beta S beta⁰ talassemia têm episódios de oclusão vascular mais frequentes e anemia mais grave. Pode ser difícil distinguir a anemia falciforme da Sbeta⁰ talassemia.

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O que são?

A hemoglobina, proteína encontrada nas hemácias, é formada pelo heme, uma parte que contém ferro, e por cadeias de aminoácidos chamadas globina. A hemoglobina se liga ao oxigênio nos pulmões e o distribui para a células de todo o corpo.

Os tipos normais de hemoglobina são:

Hemoglobina A - Representa 95% a 98% da hemoglobina encontrada em adultos; contém duas cadeias proteicas alfa (α) e duas cadeias proteicas beta (β).

Hemoglobina A₂ - Cerca de 2% a 3% da hemoglobina total em adultos; tem duas cadeias proteicas alfa (α) e duas cadeias proteicas delta (δ)

Hemoglobina F - Até 2% da hemoglobina total em adultos; tem duas cadeias proteicas alfa (α) e duas cadeias proteicas gama (γ). É a principal hemoglobina produzida pelo feto durante a gestação. Sua produção diminui muito após o nascimento

Variantes da hemoglobina ocorrem quando alterações genéticas mudam a sequência de aminoácidos da globina. Essas mutações alteram a estrutura da hemoglobina e podem alterar seu comportamento, velocidade de produção ou estabilidade. Há quatro genes que codificam a cadeia alfa da globina e dois que codificam a cadeia beta. (Para mais informações sobre testes genéticos veja O universo dos testes genéticos.) O distúrbio mais frequente relacionado com as cadeias alfa é a talassemia alfa. Sua gravidade depende do número de genes afetados (para mais informações, veja Talassemia).

As variantes da cadeia beta da hemoglobina são herdadas como um traço autossômico recessivo. Isso significa que a pessoa deve ter dois genes alterados, herdados um do pai e outro da mãe, para apresentar a doença relacionada com a variante da hemoglobina. Se herdar um gene normal e um anormal, é chamada heterozigota para a hemoglobina anormal ou portadora. O gene anormal pode ser transmitido para os filhos, mas não causa problemas de saúde no portador.

Se dois genes anormais forem herdados, a pessoa é chamada homozigota, e apresenta sintomas e complicações associadas à anormalidade. A gravidade da doença depende da mutação específica, e varia para cada indivíduo. Uma cópia do gene anormal é transmitida para todos os filhos.

Quando são herdados dois genes de mutações diferentes, a pessoa é chamada dupla heterozigota, e pode apresentar sintomas característicos de uma ou das duas variantes produzidas. Todos os filhos herdam um dos dois genes.

São conhecidas algumas centenas de variantes da cadeia beta, mas apenas algumas são comuns e têm importância clínica. Essas serão discutidas na próxima página.

Hemoglobina S: é a principal hemoglobina em indivíduos com anemia falciforme. Cerca de 8% das pessoas de origem africana nos EUA apresentam a mutação em um ou dois genes, e 0,15% têm anemia falciforme. Quem possui a doença tem dois genes beta anormais (βS) e dois genes alfa normais. A presença da hemoglobina S provoca deformação das hemácias quando são expostas a baixos níveis de oxigênio, assumindo um formato de foice. As hemácias afoiçadas podem bloquear pequenos vasos sanguíneos, causando dor, prejudicando a circulação e diminuindo o tempo de vida das hemácias. Uma cópia isolada do gene βS não causa sintomas, a não ser quando combinada com outra variante da hemoglobina, como a da hemoglobina C (βC).

Hemoglobina C: cerca de 2% a 3% da descendência de pessoas da África ocidental são heterozigotas para esta hemoglobina (têm uma cópia do gene βC). Homozigotos, que possuem duas cópias do gene βC, são raros e têm uma doença relativamente branda. Apresentam graus variáveis de anemia hemolítica e aumento pequeno ou moderado do baço.

Hemoglobina E: é uma das variantes da cadeia beta da hemoglobina mais comuns no mundo. É muito frequente no sudeste asiático, especialmente Camboja, Laos e Tailândia, e em descendentes de pessoas dessa região. Homozigotos para hemoglobina E (com duas cópias do gene βE) apresentam anemia hemolítica branda, microcitose e aumento discreto do baço. Uma cópia única do gene não causa sintomas, a não ser quando associada a outra mutação, como o traço talassêmico beta.

Variantes menos comuns da hemoglobina
Existem muitas outras variantes. Algumas não causam sinais nem sintomas, enquanto outras afetam a função ou a estabilidade da molécula da hemoglobina. Exemplos dessas outras variantes incluem hemoglobina D, hemoglobina G, hemoglobina J, hemoglobina M e hemoglobina Constant Spring, uma mutação do gene da cadeia alfa da globina que resulta em uma cadeia alfa (α) muito longa e em uma molécula de hemoglobina instável. Outros exemplos de distúrbios genéticos da hemoglobina são:

Hemoglobina F: é o principal tipo de hemoglobina produzido pelo feto, sendo mais eficiente para transportar oxigênio em ambientes com pouca quantidade desse gás. A produção dessa hemoglobina diminui no nascimento e atinge os níveis de adultos em cerca de um ano. Pode permanecer elevada em diversos distúrbios hereditários. Os níveis são normais ou aumentados na talassemia beta e, com frequência, elevados em pessoas com anemia falciforme ou com a combinação de anemia falciforme e talassemia beta. Indivíduos com anemia falciforme e aumento da hemoglobina F podem ter uma doença mais branda porque esse tipo de hemoglobina inibe o afoiçamento das hemácias. Os níveis de hemoglobina F também permanecem aumentados na persistência da hemoglobina fetal, distúrbio hereditário assintomático (sem sintomas). Existem diversas mutações diferentes que causam persistência da hemoglobina fetal. A hemoglobina F também pode se apresentar elevada em leucemias e outros distúrbios mieloproliferativos.

Hemoglobina H: hemoglobina anormal que ocorre em alguns casos de talassemia alfa. É composta de quatro cadeias beta (β) e ocorre quando há falta de síntese de cadeias alfa (α). Embora as cadeias beta (β) sejam normais, a função do tetrâmero não é normal. A molécula de hemoglobina resultante tem grande afinidade pelo oxigênio, o que diminui a liberação desse gás para as células.

Hemoglobina de Bart: ocorre em alguns fetos com alfa talassemia. É formada por quatro cadeias gama (γ). Como tem afinidade muito grande pelo oxigênio, com frequência causa morte fetal ou nos primeiros meses de vida.

Uma pessoa pode herdar dois genes anormais diferentes, um do pai e um da mãe, sendo chamada heterozigota composta. Algumas combinações com significado clínico são citadas abaixo:

Hemoglobinopatia SC. A herança de um gene beta S e/ou gene beta C resulta na hemoglobinopatia SC. Pessoas com essa situação têm anemia hemolítica branda e aumento moderado do baço. Podem apresentar oclusões vasculares como as observadas na anemia falciforme, em geral menos graves.

Hemoglobinopatia SD. Quem herda um gene beta S e um gene beta D pode apresentar oclusões vasculares ocasionais e anemia hemolítica moderada.

E-talassemia Heterozigotos compostos para hemoglobina E e talassemia beta têm anemia de intensidade variável, de branda (ou assintomática) a grave.

S-talassemia. A combinação dos genes beta S e de beta talassemia causa anemia de grau variável, dependendo da mutação talassêmica herdada. A produção de cadeias beta pode estar reduzida (beta⁺) ou completamente eliminada (beta ⁰). A combinação beta S e beta⁺ talassemia tende a ser menos grave que a combinação beta S e beta ⁰ talassemia. Os pacientes com beta S beta ⁰ talassemia têm episódios de oclusão vascular mais frequentes e anemia mais grave. Pode ser difícil distinguir a anemia falciforme da S-beta ⁰ talassemia.

Exames laboratoriais para variantes de hemoglobina incluem avaliação das hemácias, avaliação da hemoglobina dentro das hemácias e análise de mutações ou deleções dos genes relevantes. Cada exame fornece informações sobre as variantes presentes. Os exames para investigar variantes de hemoglobina são também usados para investigar talassemia. Essa pesquisa simultânea é importante porque algumas vezes, por ser uma talassemia, é herdada junto com uma variante da hemoglobina.

Hemograma. Examina as células circulantes do sangue. Entre outras coisas, informa o número de hemácias presentes, a quantidade de hemoglobina dentro delas e uma avaliação de seu tamanho e forma. O volume corpuscular médio (VCM) é uma medida do tamanho das hemácias. Se for baixo pode ser a primeira indicação de talassemia. Se o VCM estiver baixo e for excluída deficiência de ferro, a pessoa pode ser portadora de um traço talassêmico ou ter uma das variantes de hemoglobina que causa microcitose, como a hemoglobina E.

No exame de esfregaço de sangue, o profissional do laboratório examina ao microscópio uma fina camada de células coradas sobre uma lâmina de vidro. Nesse processo podem ser observadas diversas alterações das hemácias:

microcitose

Hipocromia

Variação de tamanho (anisocitose) e de forma (poiquilocitose)

Presença de hemácias nucleadas

Distribuição anormal da hemoglobina, produzindo células em alvo

Quanto maior é a percentagem de células com aspecto anormal, maior é a probabilidade de existir um distúrbio oculto, com diminuição da capacidade de transporte de oxigênio.

Pesquisas de variantes de hemoglobina. Esses exames identificam os tipos e medem as quantidades relativas das hemoglobinas presentes nas hemácias. A medida das quantidades relativas de hemoglobinas variantes permite o diagnóstico de combinações entre variantes de hemoglobina e talassemia (heterozigotos compostos).

Análise de DNA. Exame usado para investigar deleções e mutações nos genes das cadeias de globina. Podem ser feitos estudos de famílias para identificar portadores e mutações em parentes. O exame do DNA não é realizado como rotina, mas pode ser usado para diagnosticar variantes de hemoglobina e talassemia e para identificar portadores.

É necessária alguma preparação?
Nenhuma preparação é necessária.

Por que são feitos?
Os exames para variantes de hemoglobina são feitos para:

Triagem de variantes da hemoglobina comuns em recém-nascidos. Em muitos países, faz parte da rotina de triagem de recém-nascidos. Bebês com variantes como a hemoglobina S podem se beneficiar com diagnóstico e tratamento precoces.

Triagem pré-natal também pode ser feita em mãe de alto risco: descendentes de grupos étnicos associados a alta prevalência de variantes de hemoglobina (como as de origem africana) ou com pessoas afetadas na família. A triagem pode ser feita em conjunto com aconselhamento genético antes da gravidez para identificar portadores.

Identificação de variantes da hemoglobina em pais assintomáticos de crianças afetadas.

Identificação de variantes da hemoglobina em pessoas com anemia, microcitose ou Hipocromia.

Transfusões de sangue podem interferir nos exames para identificar variantes da hemoglobina. Os pacientes devem esperar alguns meses após uma transfusão. Entretanto, os exames podem ser feitos em pacientes com anemia falciforme após uma transfusão, para determinar se foi transfundida hemoglobina normal suficiente para inibir o afoiçamento das hemácias.

Desde que foi introduzida em alguns estados do Brasil e em outros países a pesquisa de variantes da hemoglobina na triagem de recém-nascidos, foram identificadas milhares de crianças portadoras. Isso ocorre devido ao uso de novas tecnologias, e não ao aumento da incidência de mutações. A saúde da criança não é prejudicada pela presença de um único gene, mas as novas informações aumentaram a necessidade de conhecimento sobre as variantes da hemoglobina e sobre sua herança.

Em outros sites da internet
The Sickle Cell Disease Association of America
Sickle Cell Information Center
National Institutes of Health: What is Sickle Cell Anemia?
The Children's Hospital of Oakland, Northern California Comprehensive Thalassemia Center
University of Rochester Medical Center, Division of Genetics Hemoglobinopathies
National Newborn Screening & Genetics Resource Center, Newborn Screening
Cooley's Anemia Foundation
National Human Genome Research Institute, Sickle Cell Disease
Thalassemia
Fontes do atrigo
NOTE: Este artigo se baseia em pesquisas que incluíram as fontes citadas e a experiência coletiva de Lab Tests Online Conselho de Revisão Editorial. Este artigo é submetido a revisões periódicas do Conselho Editorial, e pode ser atualizado como resultado dessas revisões. Novas fontes citadas serão adicionadas à lista e distinguidas das fontes originais usadas.

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Sickle Cell Disease. The Merck Manual - 2nd Home Edition [On-line information]. Available online at http://www.merck.com/pubs/mmanual_home2/sec14/ch172/ch172g.htm through http://www.merck.com.

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Hemoglobin C without Hemoglobin A. University of Rochester Medical Center, Division of Genetics [On-line information]. Available online at http://www.urmc.rochester.edu/genetics/FactSheets/HbC.htm through http://www.urmc.rochester.edu.

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A hemoglobina, proteína encontrada nas hemácias, é formada pelo heme, uma parte que contém ferro, e por cadeias de aminoácidos chamadas globina. A hemoglobina se liga ao oxigênio nos pulmões e o distribui para a células de todo o corpo.

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obs: o podcast ta em varias partes porque meu celular não aguenta áudios com mais de 3 min e dividi ele por assuntos

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aplicação da PCR na minha área de interesse

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aplicação da PCR na minha área de interesse

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Sequenciamento de Sanger - PPCC Biologia Molecular UFSC

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Formatos disponíveis

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Sobre a aula

Este vídeo mostra um passo a passo no laboratório da técnica da eletroforese em gel de agarose, largamente usada em laboratórios de Biologia Molecular. Todas as etapas estão explicadas, desde a montagem do gel até a análise dos resultados, de maneira simples e direta.Narração e execução: Rebeka Tomasin.

EMENTA

Estrutura do DNA e RNA. Fluxo da informação genética. Organização e estrutura de genes e do genoma. Cromossomos e cromatina. Elementos genéticos móveis. Replicação do DNA. Mutação e reparo do DNA. Síntese e processamento de RNA. Biossíntese de proteínas. Regulação da expressão gênica em bactérias. Regulação da expressão gênica em eucariotos. Metodologias e aplicações da tecnologia do DNA recombinante e da genômica.

Objetivo

Proporcionar aos alunos uma visão global de conceitos fundamentais da Biologia Molecular, procurando capacitá-lo a compreender os mecanismos moleculares que regem a função celular.

Índice de vídeos da disciplina

1. Operon Lac Jacob e Monod

2. Eletroforese de DNA em gel de agarose

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Seu browser não suporta JavaScript. A aplicação não funcionará corretamente. Assista a esse vídeo em: MP4 (1280 X 720 px) | MP4 (640 X 360 px) Este vídeo mostra um passo a passo no laboratório da técnica da eletroforese em gel de agarose, largamente usada em laboratórios de Biologia Molecular.

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curiosidades- eletroforese em gel de poliacrilamida

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curiosidades- eletroforese em gel de poliacrilamida

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Curiosidades:

Melhor resolução que a eletroforese em agarose

A poliacrilamida é uma mistura de dois polímeros, acrilamida e bisacrilamida. Para preparar este gel, basta adicionar os dois polímeros nas concentrações desejadas em um suporte de vidro e na presença de um catalisador.

A acrilamida é a matriz de gel mais resistente que a agarose, portanto, não quebra facilmente

Esta técnica é utilizada,  pois o gel poliacrilamida tem a capacidade de separar fragmentos muito pequenos de DNA e RNA que apresentam uma mínima diferença de massa, além disso o gel pode recuperar e purificar determinada amostra.

Apesar das vantagens, o gel de agarose é mais utilizado pois a poliacrilamida é neuro tóxica e difícil de ser preparada.

Existem dois tipos de gel de poliacrilamida:

Desnaturante: separa e purifica fitas simples de DNA, e convenciona desnaturante pois e polimerizado pela uréia.

Não desnaturante: separa e purifica fitas duplas de DNA.

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No laboratório utiliza-se mini-géis de poliacrilamida de 6,5%. O gel de 5ml polimeriza-se a partir da reação de:

Eletroforese
A Eletroforese, ferramenta amplamente utilizada no meio científico, é uma técnica baseada na separação de partículas em um determinado gel de acordo com sua massa e carga.. A eletroforese pode ser utilizada para separação de diversas moléculas orgânicas, como lipoproteínas, proteínas, RNA e DNA. O princípio da eletroforese utilizada para separação de DNA se baseia na carga negativa global de uma fita de DNA. Portanto, íons livres , moléculas de DNA ou fragmentos de DNA em uma solução podem ser separados aplicando-se uma certa voltagem. Ao final do processo as cadeias de DNA estarão próximas ao catodo (positivo), que atrai, devido à polaridade, moléculas de carga negativa. O gel de poliacrilamida forma uma malha constituida por uma rede de polímeros que permite a migração de moléculas. Moléculas de menor peso molecular terão mais facilidade em atravessar a malha do gel, se posicionando assim mais próximas do catodo; enquanto as moleculas com maior peso apresentam maior dificuldade e se posicionam mais próximas do anodo. A distância que o fragmento percorreu a partir do ponto de aplicação é comparada com a distância que outros fragmentos de tamanhos conhecidos percorreram no mesmo gel. São os marcadores de tamanho molecular (Ladders = Escadas), que são misturas de trechos de DNA com tamanhos variáveis.

Existem dois modelos básicos de eletroforese: Baseada em géis de agarose ou em géis de poliacrilamida. As duas substâncias formam tramas de poros de tamanhos variáveis, possibilitando a separação dos fragmentos, que terá sua eficiência dependente da concentração do polímero e da intensidade da voltagem e amperagem aplicada.

- acrilamida (C 3 H 5 NO) 30% 1,079 ml

- perssulfato de amônio(APS) 40 m l

-Catalisada por TEMED (N,N,N´,N´-Tetrametiletilenodiamino) 4 m l

- Tampão de TBE 10X 0,65 ml

- Água destilada 3,22 ml

Fig. 1 - Gel de poliacrilamida em polimerização. Pode-se visualizar o pente ainda inserido no sistema.

Solução de acrilamida 30%
- acrilamida 290 g

- Bis-Acrilamida (N,N´- Metileno-bis-acrilamida) 10 g

- Água destilada (completar para) 1000 ml

Solução de TBE 20X

Já a solução de TBE 20X é feita da forma que se segue abaixo e dissolvida para a concentração desejada conforme a necessidade.

- Tris Base 121,0g

- Ácido Bórico 61,7 g

- EDTA 7,9 g

- Água destilada (completar para) 1000 ml

- Ajustar pH para 8,3

Corrida do Gel

Após a polimerização, os procedimentos são:

* cobertura pelo tampão de corrida (TBE 1X) na cuba de eletroforese,

* aplicação das amostras nas canaletas (de 3 a 6,5 m l) misturadas a 1,5 m l de gel load

* aplicação do ladder (1,5 m l)

* aplicação da corrente elétrica que, em geral, varia de 10 a 200V.

Logo após a corrida e gel é fixado com uma solução de ácido acético, para impedir a eluição (forma borrões no gel) das amostras.

Revelação do gel

Em seguida a revelação é feita agitando o gel por:

- 10 minutos numa solução de ácido acético

- 3 minutos em água destilada

- 10 minutos numa solução de prata (este composto escurece quando oxidado pelo revelador)

- 30 segundos por 2 vezes em água destilada

- revelador até aparecerem as bandas do DNA

Solução de prata

- Nitrato de prata 10X (nitrato de prata 10,2g em 500 ml de água destilada) 4ml

- Água destilada (completar para) 50 ml

- Formaldeído 37 % 75 m l
Revelador
- Carbonato de sódio 1,5 g

- Água destilada (completar para) 50 ml

- Formaldeído 37% 75 m l

Fig. 2 - Gel de poliacrilamida corado com nitrato de prata. Devido à alta sensibilidade do método de coloração, observa-se bandas inespecíficas e DNA não amplificado na base da foto. A seta indica a corrida do Ladder

- Tiosulfato de sódio (10mg/ml de água destilada) 20 m l

A distância que o fragmento percorreu a partir do ponto de aplicação é comparada com a distância que outros fragmentos de tamanhos conhecidos percorreram no mesmo gel. São os marcadores de tamanho molecular ( Ladders = Escadas), que são misturas de trechos de DNA com tamanhos variáveis, normalmente eqüidistantes entre si.

Essa mistura é aplicada entre duas placas de vidro e também é posto um pente para a formação de poços.

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No laboratório utiliza-se mini-géis de poliacrilamida de 6,5%. O gel de 5ml polimeriza-se a partir da reação de: Eletroforese A Eletroforese, ferramenta amplamente utilizada no meio científico, é uma técnica baseada na separação de partículas em um determinado gel de acordo com sua massa e carga..

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Separating Proteins using SDS Polyacrylamide Gel Electrophoresis

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O que é biologia molecular?

É o estudo da estrutura e função dos genes, ademais da organização e funcionamento do genoma em uma determinada célula.

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Johann F. Miescher (1869) – estudo do núcleo de glóbulos brancos; nucleína: molécula grande, rica em P e N.

Albrecht Lossel (1880) – nucleína tem bases nitrogenadas.

Richard Altmann (1889) – nucleína tem natureza acida = ácido nucleico.

Phoebus Levine e Walter Jacobs (1912) – estrutura do nucleotídeos; ácidos nucleicos são polinucleotídeos.

Oswald Avery (1944) – ‘’DNA é a molécula que contém as informações hereditárias”.

Frederick Griffith (1928) – elucidação a partir de testes com Streptococcus pneumoniae.

Francis Crick e James Watson (7 de março de 1953) – a molécula do DNA tem uma estrutura de dupla helice

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Francis Crick- 1958

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revista da usp que usei de referencia para o podcast

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·         Alimentos transgênicos

·         Melhoramento genético animal

·         Identificação de espécies

·         Diagnóstico molecular: Iniciadores específicos, Presença/ausência do gene (positivo ou negativo para o teste)

·         Medicina forense: Identificação humana, Marcadores humanos específicos (necessidade de controles)

·         Teste de paternidade: Identificação humana, Marcadores humanos específicos (teste em todos os envolvidos)

·         Clonagem;

·         Amplificação de fragmentos específicos de DNA;

·         Diagnóstico molecular;

·         Detecção de mutações;

·         Análises de expressão gênica;

·         Filogenia molecular

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Frederick Griffith– 1928
Experimento de Griffith: Através deste, descobriu o Princípio Genético da Transformação em 1928, a  transformação é uma maneira de recombinação, troca ou transferência de informação genética entre organismos  ou de um organismo para o outro, ocorrendo em vírus, mas não em todas as espécies de bactérias, seu interesse  era a bactéria que causava pneumonia Streptococus pneumoniae.

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A transcriptase reversa é uma enzima, também denominada DNA-polimerase ou RNA-dependente, responsável por realizar o processo de transcrição, essa enzima polimeriza moléculas de DNA a partir de moléculas de RNA, o oposto do que comumente ocorre nas células.

É exatamente devido ao fato dessa enzima agir de modo “reverso”, que certos vírus como o HIV, entre outros, são chamados de retrovírus. Esses vírus injetam o seu material genético na célula hospedeira através da ajuda da enzima em questão utilizam os nucleotídeos presentes no citoplasma da célula para montar uma fita de DNA usando de base o seu material genético (a fita de RNA). Deste modo, o maquinário da célula hospedeira irá reconhecer a fita de DNA, que acabara de ser produzida, como não sendo estranha e, consequentemente, não a destruirá. Já a molécula de RNA do vírus será destruída pela enzima RNAse-H, por meio do processo de hidrólise.

O elucidamento desse processo permitiu o desenvolvimento da tecnologia da PCR (reação em cadeia da polimerase), que é um método de amplificação de DNA a partir