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É um sequenciamento do DNA que pode sequenciar simultaneamente um grande número de fitas de DNA.

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Next Generation Sequencing: A Step-By-Step Guide to DNA Sequencing.

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Passos do NGS

1° Preparação da biblioteca;

2° Fixação dos fragmentos;

3° Sequenciamento;

4° Análise computacional;

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Sequenciamento de Nova Geração: Ion Torrent

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Sequenciamento de Nova Geração: Ion Torrent

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Ion Torrente: Detecta mudanças de pH durante a incorporação de nucleotídeos. É um exemplo de plataforma do NGS.

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Sequenciamento de Nova Geração Ion Torrent: Desvendando os segredos dos materiais genéticos

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Sequenciamento de Nova Geração: Illumina

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Sequenciamento de Nova Geração: Illumina

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Illumina: Líder no mercado quando se trata em plataformas do NGS, conhecida pelo sequenciamento por síntese.

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Overview of Illumina Sequencing by Synthesis Workflow | Standard SBS chemistry

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O sequenciamento de novas gerações auxilia em diversas áreas de pesquisas, como:

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Medicina personalizada;

Pesquisa do cancêr;

Microbiologia;

Genômica populacional;

Descoberta de novos genes e RNAs

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Alto rendimento;

Flexibilidade;

Custo-Beneficio;

Precisão e Sensibilidade.

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É um método molecular caracterizado pela identificação e localização de ácidos nucleicos alvo, através da ligação complementar de sondas (sequências de DNA conhecidas) marcadas com moléculas fluorescentes (fluorocromos).

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-Obtém-se DNA ou RNA da amostra. Para RNA, realiza-se a transcrição reversa (RT-qPCR) para convertê-lo em DNA complementar (cDNA).

-Inclui primers específicos, DNA alvo, nucleotídeos, corantes e corantes/sondas fluorescentes.

-O DNA é amplificado em três etapas: desnaturação, anelamento e extensão.

-Utiliza marcadores fluorescentes para monitorar o processo em tempo real.

-Permite quantificar o DNA de forma precisa, seja de forma absoluta ou relativa

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Uploaded by Yáskara Freire on 2014-10-16.

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Passos do FISH

1° Marcação da sonda

2° Desnaturação

3° Hibridização

4° Detecção da sonda

5° Visualização no microscópio

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Fluorescent In Situ Hybridization (FISH) in 1 minute

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PCR em tempo real, principais aplicações:

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PCR em tempo real, principais aplicações:

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Diagnóstico Clínico

Detecção de doenças infecciosas:

-SARS-CoV-2 (COVID-19) – detecção do RNA viral.

-HIV – monitoramento da carga viral.

-Influenza e dengue – diagnósticos rápidos e sensíveis.

Detecção de mutações genéticas associadas a doenças:

-Identificação de alterações em genes do câncer de mama e câncer de pulmão

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(a) Sonda de DNA e sequência alvo são os elementos básicos do FISH.

(b) A sonda de DNA é marcada.

(c/d) Processo desnaturado-anelado-desnaturado para hibridizar o DNA alvo e a sonda.

(e) O sinal alvo é visualizado por microscopia de fluorescência. Isso permite a determinação de análise qualitativa, quantitativa e de localização relativa da sequência de ácido nucleico.

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Hibridização de Ácidos Nucleicos (FISH - Fluorescence In Situ)

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Hibridização de Ácidos Nucleicos (FISH - Fluorescence In Situ)

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Avaliar a expressão do HER-2

Detectar amplificação N-MYC em tumores

Diagnosticar infecções virais, como o papiloma vírus humano (HPV)

Analisar danos cromossomais

Mapear genes

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Técnica baseada na hibridização diferencial de DNA que compara o genoma de uma amostra teste com um genoma de referência. A ideia central é identificar regiões do DNA onde há diferenças quantitativas no número de cópias, sem a necessidade de uma análise morfológica direta dos cromossomos.

# data[].attributes.body
1. Isolamento de DNA

2. Fragmentação do DNA

3. Marcação do DNA

4. Hibridização

5. Lavagem e Secagem

6. Leitura e Análise

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Unique - Rare Chromosome Disorder Support Group

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Diagnóstico de síndromes genéticas

Análise de anomalias cromossômicas, como ganhos (duplicações) ou perdas (deleções) de segmentos cromossômicos.

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O PCR específico para metilação, também conhecido como MSP, é um método usado para escanear o DNA para alterações feitas ao DNA através de ilhas CPG. Uma ilha CPG é uma citosina seguido por uma guanina.

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Em princípio, o tratamento com bissulfito converte a citosina não metilada em uracila, que é detectada pelo conjunto de primers específicos para DNA não metilado.

Ao contrário, o DNA metilado permanece sem tratamento com o bissulfito e pode ser detectado pelo conjunto de primers específicos para DNA metilado. Usando um ensaio de eletroforese em gel de agarose convencional, ou ensaio qPCR, o estado de metilação pode ser determinado.

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Se a metilação ocorrer no promotor do gene alvo, isso nos dará uma banda na faixa 'M' da amostra do paciente.

Se não, isso nos dará uma banda de DNA na faixa 'U' do gel, assim como a amostra normal

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É uma técnica molecular para amplificação e quantificação de DNA em tempo real. Amplamente utilizado em diagnóstico clínico e pesquisa, permite monitorar o progresso da evidência de amplificação ciclo a ciclo

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1º Isolamento de DNA

2º Tratamento com Bisulfito de Sódio

3º Design de Primers

4º Amplificação por PCR

5º Detecção e Análise

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o MSP tanto na pesquisa e na medicina é muito importante, pós mostra uma grande versatilidade 

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Pesquisa em Câncer

Diagnóstico de Doenças Genéticas

Epigenética e Regulação Gênica

Medicina Forense

Pesquisa em Doenças Neurológicas

Avaliação de Biomarcadores