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A faca foi analisada para deteção de impressões digitais latentes (invisíveis a olho nu) com o objetivo de identificar quem a manipulou. Utilizou-se o pó de revelação e fita adesiva:

O pó adere às substâncias oleosas deixadas pelas cristas dérmicas dos dedos.

Após a revelação, a impressão foi recolhida com fita própria e analisada com lupa.

Foram comparadas com as impressões digitais dos três suspeitos.

As impressões digitais são únicas e inalteráveis ao longo da vida, servindo como prova individualizada de contacto com objetos.

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A genética forense é essencial à investigação criminal moderna, uma vez que permite a identificação de indivíduos através de análises a evidências biológicas:

sangue

saliva

células epiteliais

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Técnicas aplicadas na investigação criminal:

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Técnicas aplicadas na investigação criminal:

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reconhecimento das impressões digitais

testes presuntivos

análise do tipo sanguíneo

amplificação e sequenciação do DNA mitocondrial

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Investigação de um cenário de homicídio com múltiplas evidências físicas e biológicas, recorrendo à análise laboratorial das evidências para simular a resolução do caso e aplicar os conhecimentos práticos e teóricos adquiridos ao longo do semestre.

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30 de março de 2020;

23h30;

GNR do Crato é alertada por um grupo de turistas da existência de uma casa aparentemente abandonada com a porta aberta;

encontrado corpo de uma mulher em estado de decomposição avançado;

PJ é chamada ao local para recolha de possíveis evidências.

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Maria de Jesus;

77 anos,

viúva e sem família próxima conhecida

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Sendo a vítima proprietária de várias terras e bens valiosos na região do Alentejo, as autoridades suspeitaram que este crime pudesse ter alguma ligação com uma série de assaltos pelo "Gang do Ouro" .

Entretanto Manuel Pavão, surgiu para reinvidicar a herança, afirmando ser meio-irmão.

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Possível fonte de DNA por saliva

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Calças de ganga da vítima com manchas castanhas

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Possível arma do crime com sangue e impressões digitais

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Evidência 4 - Amostra de referência da vítima

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Evidência 4 - Amostra de referência da vítima

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Mulher do "Gang do ouro"

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Homem do "Gang do ouro"

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Manuel Pavão - suposto meio-irmão da vítima

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Teste de Saliva - PHADEBAS® FORENSIC PRESS TEST 

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Teste de Saliva - PHADEBAS® FORENSIC PRESS TEST 

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A ponta do cigarro foi testada para verificar a presença de saliva, através da deteção da enzima α-amilase.

O teste Phadebas® contém microesferas de amido ligadas a um corante azul.

Na presença de α-amilase, o amido é digerido e o corante é libertado, formando uma mancha azul.

Um resultado positivo permite prosseguir com a extração de DNA.

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Testes presuntivos Bluestar® e Kastle-Meyer

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Testes presuntivos Bluestar® e Kastle-Meyer

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Foram testadas as amostras das calças e da faca.

Estes testes detetam a presença de sangue, mas não confirmam se é humano.

Bluestar®: Luminol reage com hemoglobina e emite luz azul (quimililuminescência).

Kastle-Meyer: Reação química com peróxido de hidrogénio causa coloração rosa, confirmando a presença de sangue.

Testes positivos justificam a realização de testes de confirmação.

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Determinação do tipo sanguíneo das evidências (calças de ganga e faca), da vítima e dos suspeitos.

Utilização de soros Anti-A, Anti-B e Anti-Rh.

Observação de aglutinamento permite identificar se o sangue é A, B, AB ou O e se é Rh+ ou Rh-.

Permite excluir ou associar amostras aos suspeitos ou à vitima.

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As amostras (ponta de cigarro, calças e faca) foram submetidas à extração de DNA utilizando o método de Chelex 5% que:

Impede a degradação do DNA em altas temperaturas.

Remove iões metálicos que interferem na PCR.

É eficaz, seguro e não utiliza reagentes tóxicos.

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O DNA extraído foi quantificado, medindo-se a absorção da luz UV a 260 nm.

A260/A280 deve ser ~1.8 para o DNA ser considerado "puro"

Se < 1.8 pode indicar contaminação com proteínas ou fenóis.

Se > 1.8 pode indicar contaminação por RNA.

Quantificação importante para definir o volume a utilizar na PCR.

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Resultado:

2 impressões digitais detetadas na faca: uma no cabo e uma na lâmina

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Antes de realizar a PCR, foi necessário calcular a temperatura de annealing (Ta). Para isso, utilizámos a ferramenta online “Tm Calculator”, que indicou um valor de aproximadamente 48 °C.

No entanto, decidiu-se utilizar 55 °C como temperatura de annealing, já que o ideal é que este valor seja superior a 50 °C para garantir maior especificidade na ligação dos primers. Contudo, durante a programação do termociclador, a temperatura já estava definida para 50 °C.

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Impressão no cabo corresponde ao meio-irmão

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Amplificação de DNA mitocondrial (Região HVI, "Core Kit")

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Amplificação de DNA mitocondrial (Região HVI, "Core Kit")

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Utilizou-se a técnica de PCR para amplificar a região hipervariável 1 (HV1) do DNA mitocondrial.

O DNA mitocondrial é mais resistente à degradação, ideal para vestígios antigos.

Herdado exclusivamente pela mãe, permitindo traçar a linhagem materna.

Dois pares de primers foram utilizados para amplificar diferentes segmentos da HV1.

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Impressão na lâmina corresponde à vítima

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Resultado: Positivo para saliva (cor azul difusa)

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Kastle-Meyer (Faca):

Resultado: Positivo (formação de cor rosa)

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Verificação da amplificação em Gel de Agarose a 2%

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Verificação da amplificação em Gel de Agarose a 2%

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Os produtos da PCR foram analisados em gel de agarose a 2% para verificar a amplificação.

Fragmentos mais pequenos deslocam-se mais rapidamente.

A presença de bandas confirma a amplificação bem-sucedida.

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Bluestar (Calças):

Resultado: Positivo (quimiluminescência azul visível)

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Os fragmentos amplificados foram sequenciados por eletroforese capilar.

Permite comparar os perfis mitocondriais da vítima com os dos supeitos.

No caso do suspeito 3 (meio-irmão), verifica-se compatibilidade mitocondrial, uma vez que este tipo de DNA herdado exclusivamente da mãe. Se forem filhos do mesmo pai, os perfis mitocondriais devem ser diferentes, ajudando a confirmar ou excluir o parantesco alegado.

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Vítima - A⁺

Suspeito 1 (mulher – gangue do ouro) - O⁻

Suspeito 2 (homem do gangue do ouro) - AB⁺

Suspeito 3 (meio-irmão) - O⁻

Evidência 2 (Calças) - O⁻

Evidência 3 (Faca) - A⁺

A faca tem sangue A⁺, que coincide com o grupo sanguíneo da vítima

As calças têm sangue O⁻, que não corresponde à vítima, mas é compatível com dois suspeitos, o 1 (mulher – gangue do ouro) e o 3 (meio-irmão)

A tipagem sanguínea sozinha não permite distingui-los.

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Sangue da faca

Sangue das calças

Saliva da beata

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Concentração de DNA em cada uma das amostras igual a:

147 µg/mL - ponta de cigarro

177 µg/mL - faca

2,91 µg/mL - calças

Todos com pureza inferior a 1.80, pelo que pode considerar-se que o DNA se encontrava contaminado com proteínas, não sendo indicado para o desenvolvimento do PCR.

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PCR e Eletroforese em gel de agarose do DNA mitocondrial 

# data[].attributes.subject
PCR e Eletroforese em gel de agarose do DNA mitocondrial 

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Ocorreu amplificação, confirmado pela banda visivel no gel de agarose.

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A análise de impressões digitais, sangue e DNA revelou evidências importantes: a faca tinha sangue da vítima e impressões do meio-irmão, sugerindo o seu envolvimento direto.

Embora o DNA mitocondrial tenha sido amplificado com sucesso, não foi possível concluir a comparação genética. Por isso, não foi possível confirmar o grau de parentesco entre a vítima e o suspeito 3, nem determinar a quem pertencia o sangue encontrado nas calças.

Este caso mostrou a importância de combinar diferentes tipos de evidência para reconstruir um crime, mesmo quando há limitações técnicas.