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Juan Carlos Romero Bustillo 20161031534
Zury Julissa Carcamo Moncada 20172300049
Nancy Gabriela Matamoros Rodriguez 20161001799
Ana Dariela Gonzalez Mejia 20182001180

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Teñir supone una reacción de intercambio de iones del colorante a lugares actvos de la superfcie o interior de las estructuras de la célula, esto permitrá contrastar mucho más el microorganismo con respecto al medio que le rodea. Las tnciones pueden ser: simples, diferenciales o selectvas (González Meléndez, Cuevas, Cortés Cruz, & Sánchez, 2020).

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Los grupos químicos, el cromóforo y auxocromo, completan el componente del colorante. Los grupos cromóforos son los grupos de átomos dentro de una molécula de colorante responsable de su color. El benceno, un compuesto orgánico aromátco, experimenta reacciones de susttución con radicales para formar nuevos compuestos que consttuyen el sistema de resonancia del colorante. El benceno más que un grupo cromóforo es un cromógeno (González Meléndez, Cuevas, Cortés Cruz, & Sánchez, 2020).

Por lo tanto, este grupo no consttuye en sí mismo un colorante. La molécula también debe poseer un grupo ionizante llamado auxocromo, que permite que la molécula del colorante como unidad tenga afnidad. El grupo auxocromo le otorga al compuesto la propiedad de disociación lectrostátca o la capacidad de formar enlaces salinos con los radicales ionizables en proteínas, Glicoproteínas y lipoproteínas en componentes celulares de tejidos u organismos. Algunos colorantes tenen más de un auxocromo, incluso en combinaciones con auxócromos básicos y ácidos, la carga negatva predomina normalmente (González Meléndez, Cuevas, Cortés Cruz, & Sánchez, 2020).

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- Simple
cuando toda la muestra se tiñe del mismo color y se utiliza un sólo colorante (azul de lactofenol o tinta china)  (López-Jácome, y otros, 2014).
- Diferencial
cuando se visualiza más de un color porque se utiliza más de un colorante  (Gram o Ziehl-Neelsen) (López-Jácome, y otros, 2014).
- Especial
uando se utilizan anticuerpos marcados con una molécula fl uorescente para identifi car una estructura celular en particular (inmunocitoquímico) (López-Jácome, y otros, 2014).

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 Características de los tipos de tinciones

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 Características de los tipos de tinciones

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Los fijadores físicos se basan bien en una congelación muy rápida del tejido o bien en la aplicación de calor elevado. Se utilizan cuando los fijadores químicos alteran la estructuras que queremos observar, cuando necesitamos una fijación muy rápida, o cuando el tipo de tejido y la técnica que usaremos lo requieran (Megías et al., 2019).

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- Ziehl Neelsen
- Gram
- De Capsula

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Tinciones especiales usadas en microbiología

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La tinción de Ziehl-Neelsen es la técnica comúnmente usada en el diagnóstico rutinario de tuberculosis.

Es una técnica rápida, fácil y de bajo costo, lo que permite que se pueda realizar en casi cualquier laboratorio clínico.

Esta tinción permite diferenciar a las bacterias en dos grupos: aquellos que son capaces de resistir la decoloración con alcohol-ácido y aquellos que no lo son (Lopez et al., 2014).

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Fotomicrografía de una muestra de expectoración donde se observan los bacilos de color rojo fucsia(Mycobacterium spp)(aumento 100x).

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Como se realiza la tinción de Ziehl Neelsen

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Como se realiza la tinción de Ziehl Neelsen

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La tinción se basa en colocar carbol-fucsina y calentar la preparación ligeramente para solubilizar las ceras, lípidos y otros ácidos grasos de la pared celular para que permita el paso libre del colorante, el cual tiene una enorme afinidad por los ácidos micólicos presentes en la pared. Al enfriar con agua, los componentes de la pared vuelven a solidificar, resistiendo la acción abrasiva del alcohol-ácido, y el azul de metileno se utiliza como contra tinción (Lopez et al., 2014)

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En este grupo de colorantes se encuentran eosinas, auraminas, entre otras  (Lopez et al., 2014).

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Tinción mediante proceso físico de congelación 

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Tinción mediante proceso físico de congelación 

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La congelación rápida es un buen método de preservación de las características moleculares, puesto que no se verán alteradas por ninguna sustancia química. La congelación es conveniente que sea rápida puesto que así se impide la formación de grandes cristales de hielo que nos destrozarían la estructura del tejido (Megías et al., 2019).

Una una congelación rápida se consigue sumergiendo la pieza en isopentano (-170 ºC) enfriado con nitrógeno líquido, o colocando la muestra sobre un metal, el cual se sumerge parcialmente en nitrógeno líquido (-196 ºC), en mezclas de hielo seco y acetona (-70 ºC) o incluso en helio líquido (-268 ºC) (Megías et al., 2019).

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MOOC Técnicas Básicas de Laboratorio Aplicadas a la Biología

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La tinción de cápsula es una técnica de coloración diferencial que tiene la propiedad de resaltar la estructura polisacárida que rodea a ciertas bacterias y levaduras denominada cápsula (Gil, 2019)

Se utiliza en los laboratorios clínicos para ayudar al diagnóstico de ciertas patologías originadas por microorganismos capsulados (Gil, 2019)

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- Cubrir la muestra con metanol por 5 minutos para fijar muestra. Luego dejar secar.
- Cubrir con colorante Wright por 2 minutos.
Agregar el mismo volumen de agua destilada y mezclar con el colorante Wright. Dejar actuar por 2 minutos.
Enjuague con agua potable.
Cubrir con Giemsa por 1 minuto.
Enjuague con agua potable y luego con ácido acético al 0,5% - Dejar secar en soporte.  (Diaz,2013)

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La extensión,  consiste en extender, sobre un portaobjetos, una gota de una solución en la que se encuentran suspendidos  elementos celulares (sangre, bacterias, espermatozoides, etc.), para su observación con el microscopio. La impronta consiste en poner en contacto la superficie de corte de un órgano (por ejemplo un ganglio linfático) con la superficie del portaobjetos, de esta forma una fina capa de células queda adherida a la superficie de este para su observación al microscopio. Una vez realizadas la extensión o la impronta, las células pueden ser teñidas con diferentes técnicas según convenga.

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Tinción mediante proceso físico de calor

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Tinción mediante proceso físico de calor

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La fijación por calor no es frecuente en histología, puesto que produce deterioros de los tejidos. Su efecto es la coagulación de proteínas y disolución de lípidos. Sin embargo, se emplea para la observación de microorganismos, ya que preserva la forma de éstos y sirve para su identificación. Hoy en día, sin embargo, se suele emplear el calor como un complemento a la fijación química. Así, las muestras inmersas en un fijador se introducen en un microondas y se llevan hasta temperaturas de unos 55 ºC (Megías et al., 2019).

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Existen distintas técnicas para aplicar una tinción que se adecuan a los distintos tipos de muestras.

Si se ha  preparado una muestra en fresco,  se puede aplicar un tinte siguiendo los siguientes pasos:

1. Depositamos unas gotas del tinte sobre uno de los bordes del cubreobjetos.

2. Colocamos papel absorbente al lado opuesto del cubreobjetos para forzar el movimiento del tinte a través de la muestra.

3. Una vez la muestra ha absorbido el tinte retiramos el papel absorbente.

Los tintes permiten aumentar el contraste y facilitar la observación de algunos detalles concretos de la muestra. Existen tintes de distintos colores y características adecuados para distintos tipos de muestras. (Gil, 2018)

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Colorantes histológicos más comunes para microorganismos

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Colorantes histológicos más comunes para microorganismos

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Colorantes neutros:  el eosinato azul de metileno  (Lopez et al., 2014).

Colorantes indiferentes:  Sudán II, Negro Sudán  (Lopez et al., 2014).

Colorantes naturales:  la hematoxilina extraída del tronco de una planta que por oxidación origina a hematina o el carmín que es extraído de un animal, la cochinilla  (Lopez et al., 2014).

Colorantes artificiales:  Son productos de derivados químicos, obtenidos en su mayor parte de alquitrán de hulla, son colorantes de anilina y se distinguen los colorantes que conocemos comúnmente; los colorantes ácidos y básicos, que pueden estar formando sales, así como colorantes neutros (Lopez et al., 2014).

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-La tinción de Wrigth es una técnica de coloración creada por el patólogo estadounidense James Homer Wright en 1902, a partir de la tinción de Romanowsky.

-Esta coloración es policromática, lo que quiere decir que genera varios colores dependiendo de la estructura que absorbe el colorante. Esta técnica de coloración ha sido muy utilizada para realizar recuentos diferenciales de glóbulos blancos y estudiar la morfología de los glóbulos rojos, plaquetas y leucocitos en sangre periférica y médula ósea.

-También es útil en otras muestras diferentes a la sangre y médula ósea, como por ejemplo en muestras de secreción nasal, moco fecal, esputo, piel, entre otros.

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Prácticas de Microbiología. Tinción de G. 

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Es definida como una tinción diferencial, ya que utiliza dos colorantes y clasifi ca a las bacterias en dos grandes grupos: bacterias Gram negativas y bacterias Gram positivas (López-Jácome, y otros, 2014).

Desarollada por Hans Christian en 1884 (López-Jácome, y otros, 2014).

Economica, Sencilla y Eficaz.

Basada en las características de la pared celular de las bacterias, la cual le confiere propiedades determinantes a cada microorganismo (López-Jácome, y otros, 2014).

Las bacterias Gram positivas se observan de color azul obscuro a morado, mientras que las Gram negativas se observan de color rosa a rojo  (López-Jácome, y otros, 2014).

No todas las Bacterias se pueden teñir con esta técnica debido a las diferentes composiciones quimicas de su envoltura (carencia de pared celular o con abundancia de ácidos micólicos)  (López-Jácome, y otros, 2014).

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Prácticas de Microbiología. Tinción de Gram. Vídeo 1

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La Tinción de Gram, es una de las tinciones más utilizadas en los laboratorios de Microbiología, permite diferenciar las bacterias Gram positivas de las Gram negativas, debido a la diferente composición de su pared celular. Este vídeo muestra paso a paso cómo llevar a cabo dicha tinción.

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Las endosporas poseen unas cubiertas exclusivas que las hacen resistentes a los factores ambientales adversos. Además, estas cubiertas hacen que las esporas aparezcan en el microscopio óptico como estructuras refringentes y de difícil tinción.

La tinción específica de esporas requiere dos colorantes: Verde malaquita: capaz de teñir las esporas en caliente. Safranina: colorante de contraste que tiñe las formas vegetativas.

Las endosporas, tras la primera tinción, no perderán el colorante en el lavado con agua, y sí lo harán las formas vegetativas, que quedarán teñidas con el segundo colorante. (CBTIS, 2015)

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La tinción de azul algodón de Lactofenol no es considerada una tinción diferencial, sin embargo, posee características tintoriales que permiten observar cada uno de los componentes fúngicos y apreciar fácilmente las estructuras para una adecuada identificación. El fenol inactiva las enzimas líticas de la célula e impide que ésta se rompa; de igual forma, destruye la flora acompañante e inactiva a la célula, quitándole el grado de patogenicidad. (López. et al, 2014)

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utilizando  el método de azul algodón de lactofenol. Exserohilumsp. (izquierda); Mucor spp. (derecha)(aumento 40x). (López. et al, 2014)

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Modernamente adquiere más importancia el uso de métodos basados en biología molecular donde, a través de procedimientos y reactivos, se pueden detectar determinadas secuencias de ADN que son propias de un determinado agente microbiano(González Meléndez, Cuevas, Cortés Cruz, & Sánchez, 2020).
El método que se está utilizando ampliamente en los laboratorios de diagnóstico es el PCR (Polymerase Chain Reaction), que se aplica generalmente para la identificación de- microorganismos que no pueden ser cultivados por los métodos convencionales. A través de este método, puede aumentarse la cantidad de ADN hasta niveles detectables mediante electroforesis o mediante sondas de ADN (González Meléndez, Cuevas, Cortés Cruz, & Sánchez, 2020).
Ejemplos

Bacterias: Borrelia burghdoferi, Vibrio cholerae, Helicobacter pylori, Stahylococcus aureus, Chlamydea trachomatis, Shigella dysenteriae, Treponema pallidum, Escherichia coli enterotoxinogénica, Mycobacterium tuberculosis, etc (González Meléndez, Cuevas, Cortés Cruz, & Sánchez, 2020).

Virus: Parvovirus, Herpes-simplex virus, Rotavirus, Papillomavirus, Virus del dengue, Virus Varicella-Zoster, Virus de la Rubéola, Adenovirus, Rhinovirus (González Meléndez, Cuevas, Cortés Cruz, & Sánchez, 2020).

Protozoarios: Plasmodium falciparium, Toxoplasma gondii, Entamoeba histolyticum, Pneumocystis carinii, Trypnanosoma cruzi(González Meléndez, Cuevas, Cortés Cruz, & Sánchez, 2020).

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En este grupo de colorantes se encuentran los derivados del trifenil metano como la fucsina básica, cristal violeta o violeta de genciana, así como los derivados de tiacinas como azul de toluidina, azul de metileno o las tioninas  (Lopez et al., 2014).

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González Meléndez, R. C., Cuevas, B. E., Cortés Cruz, M. E., & Sánchez, M. O. (2020). Las tnciones básicas en el Laboratorio de Microbiología: Un enfoque gráfco. Ciudad de México: Universidad Nacional Autónoma de México Facultad de Estudios Superiores Zaragoza.

López-Jácome, L. E., Hernández Durán, M., Colín Castro, C. A., Ortega Peña, S., Cerón Cerón, G., & Franco Cendejas, C. (2014). Las tinciones básicas en el laboratorio de microbiología. Investigacón en Discapacidad, 3(1), 10-18.

Megías M, Molist P, Pombal MA. (2019). Atlas de histología vegetal y animal. Técnicas histológicas. Recuperado (fecha de consulta) de: http://mmegias.webs.uvigo.es/6-tecnicas/1-introduccion.php

López-Jácome, L. E., Hernández-Durán, M., Colín-Castro, C. A., Ortega-Peña, S., Cerón-González, G., & Franco-Cendejas, R. (2014). Las tinciones básicas en el laboratorio de microbiología. Investigación en discapacidad, 3(1), 10-18.

González R, Cuevas B, Cortés M, Orduña M. (2020) Las tinciones básicas en el laboratorio de microbiología: Un enfoque gráfico. UNAM, pp 238.

Herrero J.  La técnica histológica. rua.ua.es. Recuperado de https://rua.ua.es/dspace/bitstream/10045/18703/1/HISTOLOGIA_P1.pdf

Díaz, J (2013), Guía de procedimiento para laboratorio de hematología en pre grado. Recuperado de: https://www.ispch.cl/sites/default/files/RECOMENDACIONES%20PARA%20LA%20TINCI%C3%93N%20DEL%20FROTIS%20SANGU%C3%8DNEO.pdf

Marielsa Gil. (23 de diciembre de 2018). Tinción de Wright: fundamento, materiales, técnica y usos. Lifeder. Recuperado de https://www.lifeder.com/tincion-de-wright/.

Marielsa Gil. (18 de junio de 2019). Tinción de cápsula: fundamento y técnicas. Lifeder. Recuperado de https://www.lifeder.com/tincion-de-capsula/.

CBTIS (2 de diciembre del 2015 ). 11. Tipos y medios de cultivo, Microbiología. Obtenido de; https://labdemicrobiologia.wixsite.com/scientist-site/tipos-y-medios-de-cultivo

López. L., Hernández M., Colín C., Ortega S., Cerón. G., Franco. (2014).Las tinciones básicas en el laboratorio
de microbiología.Vol. 3, Núm. 1.https://www.medigraphic.com/pdfs/invdis/ir-2014/ir141b.pdf