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Antes de iniciar os procedimentos, é necessário escolher o ambiente a ser analisado, determinar suas delimitações (tamanho), quantidade de pessoas que utilizam o local e a frequência para a realização dessa coleta de amostras (semanalmente, quinzenalmente ou mensalmente), além do horário.

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 1º Passo: Definir os pontos de coleta de  superfície.

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 1º Passo: Definir os pontos de coleta de  superfície.

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Observar  as superfícies  com base na atividade predominante do local, em seguida ,analisar  frequentemente  tarefas distintas executadas em áreas comuns.

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Inicialmente, é necessário a utilização de EPI's para a realização da coleta, como luva, avental, touca e mascara. Logo em seguida, determina-se a temperatura do ambiente, com auxílio de termômetro. E a exposição dos meios de cultura com as placas abertas por 30 minutos no ambiente em questão, sendo respeitada a distância de 1 metro de obstáculos que interfiram no crescimento de microrganismos.

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Prepara-se os meio de cultura para a coleta de amostra, sendo necessário utilizar 4 placas no total, para a análise (uma para cada meio). Os ágares a serem utilizados são:
1 - DRBC ( Ágar Dicloran Rosa Bengala Cloranfenicol) com ágar base para isolamento seletivo e contagem de leveduras e bolores.
2- PCA (Ágar Padrão de Contagem) para contagem bacteriana de produtos alimentícios, água e outras formas de importância sanitária.
3- Ágar MacConkey para seleção de enterobactérias, contagem de coliformes e patógenos intestinais.
4 - Ágar Tripticase (Triptona) de soja para isolamento e manutenção de microrganismos fastidiosos.

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Após o tempo de exposição ser finalizado, as placas são recolhidas em caixa de isopor e logo em seguida devem ser incubadas em estufa bacteriológica com temperatura de 35º, com exceção do meio DRBC, que deve ser colocado em temperatura de 26ºC. Ambos por 5 dias.

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2 Passo: Garantir a representatividade das áreas 

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2 Passo: Garantir a representatividade das áreas 

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Procurar diminuir as variáveis que  influenciam nos resultados e possibilitar uma melhor interpretação dos dados:
Evitar contaminação cruzada de superfícies, utensílios e equipamentos diferentes

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Após o crescimento desses organismos no ágar DRCB, o fungo filamentoso deve ser submetido a técnica de microcultivo, para observar as estruturas reprodutivas e a sua identificação. Os resultados são expressos em unidades formadoras de colônias por metro cúbico de ar (UFCm-3).

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Após o crescimento bacteriano, realiza-se a identificação dos mesmos pela coloração de Gram. As colônias oriundas das placas de ágar PCA, MacConkey e Ágar Tripticase são repicadas em novas placas com ágar PCA e incubadas por 24h a 35ºC na estufa. Após esse repique, faz-se a distribuição dessas colônias em tubos de cultura com 2 ml de água destilada autoclavada e distribui-se uniformemente entre os meios de cultura do kit Bactray para a posterior identificação. Este kit auxilia na identificação de bactérias fermentadoras e é composto por duas etapas: onde a primeira identificará bacilos gram-negativos oxidase negativa, fermentadora ou não de glicose e na segunda que será identificada a presença de bacilos gram-negativos oxidase positiva não fermentadores.

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A utilização de EPI's é essencial para realização da coleta, tais como: luva, jaleco, touca e mascara. As amostras devem ser coletadas em áreas  de bancadas, equipamentos e utensílios e mãos de  manipuladores

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7º Passo: Cálculo do número de UFCM-3 de ar

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7º Passo: Cálculo do número de UFCM-3 de ar

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Com base na formula de Friberg, Friberg e Burman (1999), que compreende na formação numérica do produto da contagem de unidade formadoras de colônias depositadas em uma superfície por um determinado tempo. Atribui-se uma proporção 23:1 para a média de ar na superfície por ser um processo de sedimentação espontânea.

Após a contagem das colônias específicas, utiliza-se a NT-SCE-02, onde dispõe que o valor máximo recomendável para contaminação microbiológica por bactérias é de 500 UFCm-3, para a relação Ambiente Interno e Ambiente Externo (I/E), sendo realizado a média dos resultados obtidos e dividido o ambiente interno pelo externo.

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são insumos preparados em laboratórios que fornecem os nutrientes para o crescimento e desenvolvimento de microrganismos (como bactérias, fungos e leveduras). Prepara-se  as semeadura em placas de Petri, assim, os meios de cultura para identificação microbiológica de superfície são:
1- Agar PCA (Plate Count Agar) é   sugerido pela para contagem total de bactérias aeróbicas e anaeróbicas heterotróficas facultativas.
2-placa  Replicate Organism Direct Agar Contact (RODAC) para a análise microbiológica  indicadas para superfícies planas.
3-Análise de Swab: são cotonetes desenvolvidos para avaliações laboratoriais específicas, são utilizados tanto para análises de superfícies, quanto para análises microbiológicas em equipamentos.
4-  Ágar Batata -A infusão de batatas realizada na preparação deste meio incentiva de crescimento dos fungos e leveduras.

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Preparo de meio de cultura por Kissyla Tonon - BRQuality

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ALMEIDA, Ana Carolina Gomes de; ARAðJO, Jéssica Mayara de. Análise Microbiológica da Qualidade do Ar em ambiente hospitalar na região do Oeste do Paraná. 2018. 47 f. TCC (Graduação) - Curso de Tecnologia em Gestão Ambiental, Universidade Tecnológica Federal do Paraná, Medianeira, 2018.

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Após a coleta das amostras nas superfícies determinadas, as placas são levadas a  estufa de incubação ou bacteriológica é um equipamento é primordial para favorecer o crescimento e a multiplicação dos microorganismos em uma temperatura pré-determinada.

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6 Passo: Crescimento e quantificação bacteriana

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6 Passo: Crescimento e quantificação bacteriana

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Após a retirada das placas da estufa, fazer a contagem das unidades formadoras de colônias em cada placa.
Agar PCA  é necessário  a contagem (placas com crescimento entre 30 e 300 UFC) das colônias e reporte os resultados (por ml ou gramas).

Placa Rodac - Havendo crescimento, contar as colônias. Deve-se  Proceder a contagem dos microrganismos , Dividir o resultado por 25 para obter o número de UFC/cm2 (Unidades Formadoras de Colônias por cm2 ) de superfície;
Em seguida, realiza-se  a  técnica de coloração de Gram para identificação  de bactérias G+ e G-

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7 passo: Crescimento e quantificação  de fungo

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7 passo: Crescimento e quantificação  de fungo

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Após o tempo e condições ideais de incubação, avaliar as características das colônias e efetuar análise microscópicas fungos e leveduras do Agar Batata, posteriormente, foi realizado a   técnica de microcultivo em lâmina , para observar e  analisar as estruturas das hifas, verificando a presença ou não de septos, as estruturas microscópicas dos conidióforos, assim como as estruturas microscópicas das fiálides, verificando a disposição das mesmas, a qual permite a diferenciação dos fungos filamentosos em diversos gêneros

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As recomendações da APHA forem tidas como referência, uma vez que essa preconiza uma contagem de até 2 UFC/cm2 para superfícies de bancadas e 100 UFC/utensílios ou área amostrada de equipamentos.
Pela dificuldade de adequação ao padrão americano, alguns pesquisadores e instituições admitem contagens superiores,  que preconiza uma contagem menor ou igual a 50 UFC/cm² para equipamento, utensílios ou superfície em razão principalmente das condições de temperatura ambiental no Brasil.

RECOMENDAÇÕES INTERNACIONAIS:
APHA- 2 UCF /cm2
OPAS-50 UCF/cm2
OMS-50 UCF/cm2

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COELHO, Ana Íris Mendes et al. Contaminação microbiológica de ambientes e de superfícies em restaurantes comerciais. Ciência & Saúde Coletiva, v. 15, p. 1597-1606, 2010.
NETO, João Calamares; COLOMBO, Tatiana Elias. Isolamento e identificação de fungos filamentosos em peças anatômicas conservadas em formol. J Health Sci Inst, v. 33, n. 3, p. 218-22, 2015.
POTATO DEXTROSE AGAR. Disponível em: https://www.laborclin.com.br/wp-content/uploads/2019/05/POTATO_DEXTROSE_AGAR_12042019.pdf
AGAR PCA . Disponível em: http://www.probac.com.br/Anexos/Bulas/Isentos/Agar%20PCA%20-%20Rev%2002.pdf
PLATE COUNT RODAC ÁGAR . Disponível em:https://www.laborclin.com.br/wp-content/uploads/2019/06/PLATE_COUNT_RODAC_AGAR_540172.pdf
SALVATORI, Rosângela U. et al. Laboratório de Microbiologia: normas gerais, instruções de trabalho e procedimentos operacionais padrões. Lajeado: Ed. da Univates, 2013.