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Se incuba en aerobiosis a 35-37°C, durante 18-24 h, no menos no más.

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Kligler Hierro Agar, broitanialab.con, consultado el (19/04/2022), disppnible en: https://www.britanialab.com/back/public/upload/productos/upl_60706c3393e51.pdf

Kligler. I. J. 1917. A simple medium for the differentiation of members of the thyphoid paratyphoid group. Am. J. Public Health. 7:1042.

Kligler. I. J. 1918. Modifications of culture media used in the isolation and differentiation of thyphoid, dysentery, and allied bacilli. J. Exp.Med. 28:319.

MacFaddin. 1985. Media for isolation-cultivation-identificationmaintenance of medical bacteria, volume 1. Williams & Wilkins, Baltimore, Md.

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No aplica

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El KIA detectará dos tipos de gases:
a) C 0 2 y H2, que son los productos finales del metabolismo de los hidratos de carbono y
(b) H2S. El H2S es incoloro y produce un precipitado negro cuando entra en contacto con el citrato de amonio férrico o el sulfato ferroso.

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Se usa para identificar a todos los miembros de la familia Enterobacteriaceae (entéricos) y los bacilos intestinales gramnegativos no entéricos.

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Observar el color del medio de cultivo y la producción de gas.

1- Superficie alcalina/profundidad ácida (pico rojo/fondo amarillo): el microorganismo solamente fermenta la glucosa.

2- Superficie ácida/Profundidad ácida (pico amarillo/fondo amarillo): el microorganismo fermenta glucosa, lactosa y/o sacarosa.

3- Superficie alcalina/Profundidad alcalina (pico rojo/fondo rojo): el microorganismo es no fermentador de azúcares.

4- La presencia de burbujas o la ruptura del medio de cultivo indican que el microorganismo produce gas.

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Los resultados de la prueba deber ser leídos luego de 18 a 24 horas de incubación. Si la lectura se efectúa a tiempos menores pueden existir falsos positivos por la presencia de acidez o la acidez generada no sea suficiente para producir el viraje del indicador rojo de fenol del color rojo al amarillo. Si se lee luego de 24 horas se pueden obtener resultados falsos negativos por consumo de peptonas durante el crecimiento de los microorganismos con la consecuente alcalinidad del medio de cultivo.

Si la generación de SH2 es elevada puede llevar al ennegrecimiento de todo el fondo del medio de cultivo y dificultar la visualización de la acidez producida. Es necesario aclarar que para que se produzca SH2 debe existir un ambiente ácido, por eso si no se observa se debe considerar igualmente acidez positiva.

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El agar con hierro de Kligler (KIA) y el agar con azúcar triple y hierro (TSI) son medios de cultivo diferenciales en tubo que cumplen un doble propósito:
a) la determinación de fermentaciones de hidratos de carbono b) la determinación de la producción de H2S.

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Pruebas en agar con hierro de Kligler/azúcar triple y hierro

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Pruebas en agar con hierro de Kligler/azúcar triple y hierro

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En el medio de cultivo, el extracto de carne y la pluripeptona, aportan los nutrientes adecuados para el desarrollo bacteriano.

La lactosa, sacarosa y glucosa son los hidratos de carbono fermentables. El tiosulfato de sodio es el sustrato necesario para la producción de ácido sulfhídrico, el sulfato de hierro y amonio, es la fuente de iones Fe3+ , los cuales se combinan con el ácido sulfhídrico y producen sulfuro de hierro, de color negro. El rojo de fenol es el indicador de pH, y el cloruro de sodio mantiene el balance osmótico. El agar es el agente solidificante.

Por fermentación de azúcares, se producen ácidos, que se detectan por medio del indicador rojo de fenol, el cual vira al color amarillo en medio ácido. El tiosulfato de sodio se reduce a sulfuro de hidrógeno que reacciona luego con una sal de hierro proporcionando el típico sulfuro de hierro de color negro.

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El inóculo se debe de tomar a partir de un cultivo puro de
un aislamiento primario. La siembra se debe llevar a cabo con
una asa recta o aguja de inoculación, el modo de siembra es
mixta, no importa el orden, sí primero se estría la superficie y después se punciona o viceversa.

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Gramos por un litro
EXTRACTO DE CARNE...3.0

PLURIPEPTONA ...20.0

CLORURO DE SODIO ...5.0

LACTOSA ...10.0

SACAROSA ....10.0

GLUCOSA ....1.0

SULFATO DE HIERRO Y AMONIO... 0.2

TIOSULFATO DE SODIO ... 0.2

ROJO DE FENOL ...0.025

AGAR ...13.0

pH FINAL: 7.3 ± 0.2