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La chromatographie est une technique qui permet de séparer et identifier les constituants d'un mélange. Les solutés, ici les solutions d'acides aminés, sont déposés sur une phase stationnaire,( ici une plaque de gel de silice). Il s’établit des liaisons faibles entre les molécules et la surface du papier: on dit que les molécules sont absorbées et on parle de chromatographie d'absorption. Suivant la polarité des solutés, la fixation sera plus ou moins forte. Dans un deuxième temps, un solvant, l'éluant qui constitue la phase mobile; migre par capillarité le long de la plaque; il décroche et entraîne les solutés en commençant par les moins fixés. Les vitesses d’entraînement des solutés sont différentes, et on peut séparer les constituants d’un mélange, à condition de bien choisir l’éluant (ici butan-2-one, acide aspartique et méthanol)

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Le Sargenor est un médicament servant à lutter contre la fatigue. Son principe actif est l'aspartate d'arginine, un mélange de deux acides aminés. Il contient également des excipients: le saccharose, un arôme d'abricot, du caramel, du parahydroxybenzoate de méthyle, du parahydroxybenzoate de propyle et de l'eau purifiée. Il est sous forme de solution buvable (forme galiénique).

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Principe de la Chromatographie échangeuse d'ions

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Principe de la Chromatographie échangeuse d'ions

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La chromatographie échangeuse d'ions est un type de chromatographie en phase liquide permettant d'isoler une substance chargée électriquement d'un mélange de molécules chargées (liquide, ici le Sargenor). Pour cela, on fait passer le mélange sur une phase stationnaire solide (résine Amberlite) chargée déjà associée à des ions connus (solution tampon pH 4,2) et on remplace ces ions par les ions/molécules chargées du mélange à séparer. Les molécules chargées négativement (anion) tomberont vers le bas tandis que les cations resteront accrochés sur les molécules de résines. On change ensuite de solution tampon pour en prendre une a pH12 et ainsi changer la charge de la résine. Les cation tomberont alors a leur tour vers le bas de la colonne chromatographique. En faisant couler petit a petit les acides aminés séparés l'un après l'autre dans des tubes on récupère des tube contenant qu'un seul des deux acides aminés.

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Grâce à la chromatographie échangeuse d'ions nous avons pu récupérer 11 tubes d'acides aminés. dans les tubes 1 à 4, de l'acide aspartique et dans les tubes 5 a 11, de l'arginine

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Résultats obtenus: Photographie des deux plaques.

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Résultats obtenus: Photographie des deux plaques.

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Plaque 1, fractions 1 à 4,

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- Analyse des plaques
- Calculs des Rf

Plaque 1:
-> Ordre des dépôts de gauche à droite: Acide aspartique, Sargenor, F1, F2, F3, F4, Arginine. Sur la photo on peux voir que les dépôts de fractions semblent être au même niveau que le dépôt d'acide aspartique. On vérifie cette hypothèse grâce au calcul des rapports frontaux.
H= distance (cm) entre la ligne de dépôt et le front du solvant
h= distance (cm) entre la ligne de dépôt et le centre du spot.
Rf=h/H
Rf (Acide aspartique)= 2/4,6=0,43
Rf (Sargenor, premier dépôt)= 1,45/4,6=0,31 (deuxième dépôt)=
1,9/4,6=0,41
Rf (F1)= 2/4,6=0,43
Rf (F2)= 2/4,6=0,43
Rf (F3)= 2/4,6=0,43
Rf (F4)= 2/4,6=0,43
Rf (Arginine)= 1,6/4,6=0,34

Plaque 2:
-> Pour la plaque contenant l'Arginine, le Sargenor, les 4 fractions ainsi que l'Acide Aspartique, nous pouvons dire que comparée au Sargenor et au deux témoins (arginine et acide aspartique) les 4 fractions (F5,F6,F7,F8) sont des fractions d'Arginine, car elles sont placées à une distance h environ égale à celle de l'Arginine ( h: distance entre le centre du spot et la ligne de dépôt).
- Calculs des Rf de la plaque contenant les Fractions F5 à F8:
Rf (Arginine)=1.6/4.7=0.34
Rf (Sargenor,[1er dépôt])=1.6/4.7=0.34
Rf (Sargenor, [2eme dépôt])=2/4.7=0.43
Rf (F5)=1.6/4.7=0.34
Rf (F6)=1.6/4.7=0.34
Rf (F7)=1.6/4.7=0.34
Rf (F8)=1.6/4.7=0.34
Rf (Acide Aspartique)=2/4.7=0.43

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La séparation a t'elle été selon vous bien réalisée ?

Grâce aux résultats de la CCM nous pouvons conclure que la séparation a été bien réalisée car les rapports frontaux correspondent très bien avec les acides aminés recherchés, même au moment ou l'on change de solution tampon pour récupérer le deuxième acide aminé.

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Points communs:
- Séparer les différents composant d'un mélange

Différences:
- La chromatographie échangeuse d'ion ne permet pas de comparer plusieurs séparations de mélanges car on ne peux séparer qu'un seul liquide à la fois.
- Pour la CCM le but et de séparer et d'identifier alors que pour la chromatographie échangeuse d'ions le but est juste de séparer.

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Points communs:
-Il y a une phase stationnaire et une phase mobile pour les deux méthodes
- Il y a un solvant pour les deux méthodes, dans la chromatographie échangeuse d'ions c'est sous formes de deux solutions tampons de pH différents.
- Les substances séparées doivent être liquides

Différences:
- Le support: la CCM se fait sur une plaque de silice alors que la chromatographie échangeuse d'ions se fait dans une colonne chromatographique
- Il y a deux solvant différents pour la chromatographie échangeuse d'ions contre un pour la CCM.

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Point commun:
- Il y a un temps d'attente pour la séparation
- L'ensemble des produits est mis dans le même ordre : la plaque ou la résine, le ou les produits a séparer puis le ou les solvant.

Différences:
- On applique pas de révélateur pour la chromatographie échangeuse d'ions.
- Le solvant n'est pas en contact direct avec la substance a séparer dans la CCM
- Pas de calculs a la fin de la chromatographie échangeuse d'ions.

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Le but du dosage pH-métrique d’un acide aminé est de calculer sa concentration molaire en soluté apporté et de retrouver les valeurs des pKa caractéristiques de la solution titrée. L’étude des graphes pH=f(Vacide ou base) permet, en utilisant la méthode des tangentes, de repérer les points d’équivalence et d’en déduire les caractéristiques des solutions

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Le principe est d'utilisée un dosage Phmétrique par titrage. Le titrage d’une solution acide (ou basique) consiste à déterminer la concentration apportée d’acide

(ou de base) dans cette solution. Pour cela, on réalise le titrage d’un volume précis de la solution de

concentration inconnue d’acide (ou de base) par une solution de base (ou d’acide), de concentration

connue, afin de déterminer l’équivalence. L'équivalence doit être facile a repérer pour se faire; dans ce TP, nous avons observer la brusque variation du Ph de la solution a l'équivalence.

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Pour conclure nous pouvons dire que par rapport au tangente A et B, ce qui nous permet de trouvés les coordonnés équivalent qui correspondent a la neutralisation de la fonction neutralisée, qui est ici à un volume de NaOH de 12.27 ml avec un Ph de 6.623

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Dans un premier temps, nous avons cherché à trouver les différents acides aminés contenus dans le Sargenor en les séparant, grâce a la chromatographie échangeuse d'ions, en 11 micro-tubes (ou fraction), 4 d'acide aspartique et 7 d'arginine. Dans un deuxième temps, nous avons pu confirmer que nos fractions ( micro-tubes) contenaient bien de l'Arginine et de l'Acide Aspartique grâce à une CCM. Et pour finir, dans un troisième temps, nous avons cherché le volume à équivalence d'une solution de NaOH pour pouvoir observer les brusques variations de Ph.
Pour conclure nous avons trouvé comme résultats: Dans le Sagenor nous avons deux acides aminés qui sont l'Arginine et l'Acide Aspartique, la CCM nous l'a confirmé. Et grâce au dosage Ph-métrique, nous avons pu trouver que le volume équivalent de NaOH est de12;27 avec un Ph de environ 6.62.