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importância e aplicação da cromatografia gasosa

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Mariana Dourado

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cromatografia líquida de alta eficiência

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Mariana Dourado

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Mariana Dourado

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Aplicação do método da espectrofotometria

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Aplicação do método da espectrofotometria

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Mariana Dourado

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Hevelley de souza
Avaliação da biodisponibilidade de uma nova formulação de micofenolato mofetil e de um método para sua monitorização / Assessment of the bioaviability of a new micophenolate mofetil formulation and a method for therapeutic monitoring

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Aplicação e avanços da espectroscopia de luminescência em análises farmacêuticas

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Hevelley de Souza

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Application and advances in the luminescence spectroscopy in pharmaceutical analyses

IDepartamento de Química Analítica, Instituto de Química, Universidade Estadual Paulista, 14801-970 Araraquara - SP, Brasil
IICurso de Farmácia, Universidade São Francisco, 12916-900 Bragança Paulista - SP, Brasil
IIIDepartamento de Química e Ciências Ambientais, Universidade Estadual Paulista, 15054-000 São José do Rio Preto - SP, Brasil
IV Departamento de Química Analítica, Instituto de Química, Universidade Estadual de Campinas, 13083-970 Campinas - SP, Brasil

This paper provides a review on the latest advances and applications of the luminescence spectroscopy for the development of pharmaceuticals analyses methods, basically based on the photo- and chemiluminescence. The different forms of the drugs determination on pharmaceuticals through the fluorescence and chemiluminescence are discussed. The analyses include the drugs native fluorescence (liquid and solid-phases); the fluorescence from the oxidizing or reducing forms of the drug; the fluorescence from the chemical derivatization and their photochemistry and hydrolysis reactions. The quenching of luminescence and chemiluminescence generation for the pharmaceutical quantification are also shown. Finally, the trends and future perspectives of the luminescence spectroscopy in the field of the pharmaceutical research are discussed.

Keywords: luminescence spectroscopy; drugs; cosmetics analysis;

Devido ao progresso contínuo em técnicas e instrumentos, a indústria farmacêutica busca o emprego de metodologias que ofereçam maior sensibilidade, seletividade, robustez, precisão, exatidão e rapidez. Neste sentido, um grande número de equipamentos de cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE) com diversos tipos de detecção domina este ramo industrial. Contudo, o advento da sofisticação de instrumentação automatizada de espectrômetros de luminescência poderá resultar em um substancial aumento de aplicações desta técnica instrumental na indústria farmacêutica, principalmente, no que se refere à análise diretamente na matriz do medicamento.

Outra vantagem que apresenta os métodos luminescentes é sua ampla faixa linear de resposta. Além disso, a sensibilidade e seletividade oferecidas pela espectroscopia de luminescência têm encontrado amplo uso na análise de numerosos compostos de interesse farmacêutico, biológico, ambiental e industrial. ⁸⁻¹⁰ A estas características devem ser adicionadas a simplicidade instrumental e o baixo custo de manutenção e análise, quando comparados com outros métodos analíticos.

Considerando-se a potencialidade de aplicação da espectroscopia de luminescência na área farmacêutica, este artigo visa descrever os principais avanços alcançados, nos últimos anos, na determinação de fármacos, principalmente em formulações comerciais, no intuito de demonstrar o desenvolvimento e potencial que esta metodologia apresenta.

PRINCÍPIOS BÁSICOS DA ESPECTROSCOPIA DE LUMINESCÊNCIA

Os métodos baseados em fluorescência e fosforescência são aqueles nos quais a excitação da molécula é conduzida pela absorção de fótons. Como conseqüência, os dois fenômenos são muitas vezes referidos e/ou classificados como métodos fotoluminescentes. Neste caso, a molécula é inicialmente excitada e promovida para um estado eletrônico de maior energia, cujo retorno ao estado fundamental é acompanhado pela emissão de radiação eletromagnética ( Figura 1S - material suplementar). Contudo, é importante salientar que a absorção do fóton em fluorescência e fosforescência envolve transições eletrônicas diferentes.

Como observado na Figura 1S, do material suplementar, a energia eletrônica responsável pela transição fluorescente não envolve uma mudança no número quântico do spin do elétron, e passa do nível S ₀ → S ₁, emitindo radiação desde o nível excitado S 1 para algum dos níveis vibracionais do estado eletrônico S ₀. Como conseqüência, a fluorescência possui tempos de vida extremamente curtos, com a luminescência cessando quase que imediatamente, por volta de 10⁻⁹ a 10-6 s (ns a µs). A fluorescência é emitida em comprimentos de onda maiores àqueles de excitação, deslocando-se entre 50 e 150 nm, quando comparado ao comprimento de onda da luz usado para a excitação da molécula. 11,42,43

Por outro lado, uma mudança no numero quântico de spin do elétron acompanha as emissões fosforescentes, envolvendo transições proibidas de elétrons provenientes de um estado excitado tripleto (com spin diferente ao original) para um estado fundamental singleto (T ₁ → S ₀). Como conseqüência, a radiação existe por um tempo no qual pode ser facilmente detectável após o término da irradiação, entre 10⁻⁴ e 10 s. Contudo, este tipo de transição é menos provável que a transição envolvendo dois estados singletos (fluorescência), já que processos paralelos de desativação como a conversão interna e externa, e o relaxamento vibracional, podem competir com ela ( Figura 1S). Desta forma, a emissão de transições fosforescentes tem sido comumente observada apenas em baixas temperaturas, em meios altamente viscosos ou em moléculas adsorvidas em superfícies sólidas para introduzir rigidez ao sistema.

Apesar das vantagens que possam ser enxergadas neste tipo de fotoluminescência, não se deve esquecer a supressão da fosforescência originada pelo oxigênio molecular, o qual em seu estado fundamental é um tripleto () possuindo dois estados singletos conhecidos como oxigênio e oxigênio , cujas energias de excitação são de aproximadamente 23 e 38 kcal mol). Contudo, apesar deste fenômeno de supressão ser muitas vezes indesejado, diversas técnicas de supressão têm sido usadas como ferramentas para aplicações nas áreas de bioquímica e médica. ³Σ ¹Δ ¹Σ⁻¹, respectivamente. 41,44 ¹¹ Assim, moléculas excitadas, que possuam energia menor ou igual a 23 kcal mol⁻¹, podem ter sua luminescência suprimida através da transferência de energia para o oxigênio tripleto, produzindo o oxigênio singleto ( ¹ Δ

O terceiro tipo de luminescência, a quimiluminescência ( Esquema 1), está baseada na emissão de luz de uma espécie excitada que é gerada no curso de uma reação química, ao contrário dos processos fotoluminescentes acima citados, onde a molécula emite luz após absorção de fótons. Desde que a emissão é gerada sem luz, nenhuma fonte será usada durante a medida do sinal. Desta forma, quando usado um espectrômetro fluorescente convencional ( Figura 1) a fonte de luz será desligada durante a etapa de medida, para não interferir com o sinal de interesse.

A quimiluminescência é caracterizada por sua alta sensibilidade, ampla faixa linear de resposta, ausência de efeitos de espalhamento e simplicidade de instrumentação, tendo sido empregada na determinação de vários fármacos importantes e de amplo uso. 3,29

Sistemas quimiluminescentes como luminol, ⁴⁴⁻⁴⁷ métodos quimiluminescentes baseados no sistema peróxi-oxalato ⁴⁷⁻⁴⁹ e acridina, ⁵⁰ têm sido empregados na determinação de fármacos. O mecanismo da quimiluminescência promovida pelo luminol é mostrado no Esquema 2. Neste caso, o luminol (5-amino-2,3-diidroftalazina-1,4-diona) reage com peróxido de hidrogênio na presença de íons hidroxila e um catalisador para formar um intermediário rico em energia (íon aminoftalato excitado) com subseqüente emissão de luz. ⁵⁰

Métodos quimiluminescentes baseados no sistema peróxi-oxalato ⁴⁸ são considerados até o momento os processos não-enzimáticos com maior eficiência quântica. 47,48,53 O mecanismo pode ser explicado através da luminescência quimicamente iniciada por intercâmbio de elétrons ou CIEEL ( chemically initiated electron exchange luminescence). ⁴⁷ Uma reação típica baseada neste tipo de quimiluminescência é mostrada no Esquema 3.

O Esquema 3 mostra a quimiluminescência obtida a partir de um éster fenólico de ácido oxálico e peróxido de hidrogênio, catalisada por base na presença de uma substância com rendimento quântico alto a qual é chamada, neste tipo de reações, de ativador. Estas reações são acompanhadas por uma forte emissão de luz, a qual é oriunda da fluorescência do ativador, 48,54 resultando em sistemas luminescentes que superam àqueles baseados em luminol, e apresentam-se como ferramentas em potencial para serem aplicados na determinação de fármacos. ⁴⁹

Outros sistemas quimiluminescentes que eventualmente também podem ser empregados na determinação de fármacos incluem aqueles baseados nos derivados da acridina, tal como a lucigenina, cuja reação quimiluminescente é mostrada no Esquema 4.

Analogamente ao luminol, derivados da acridina reagem com peróxido de hidrogênio em soluções alcalinas, produzindo intermediários excitados, seguidos por luminescência. Embora aplicações na determinação de fármacos ainda não tenham sido devidamente exploradas, este tipo de reações abre uma nova alternativa de aplicação.

APLICAÇÃO DA ESPECTROSCOPIA DE LUMINESCÊNCIA NO CAMPO FARMACÊUTICO

Determinação de medicamentos baseada na fluorescência do princípio ativo

A fluorescência nativa tem sido explorada para a quantificação de fármacos em medicamentos; com base nisto, muitos trabalhos têm sido descritos na literatura. 19,20,58-74,80,110-115,118-122,124,125,129,133-135 A Tabela 1 mostra os principais fármacos determinados através da fluorescência nativa em solução.

O uso da calibração multivariada 62,114,118-125 para resolução de sinais superpostos de misturas de fármacos fluorescentes também tem sido empregada. São relatados desde os métodos multivariados mais simples como PLS ( partial least-squares regres-sion), 62,114,118,119,121-123,125 PARAFAC ( parallel factor analysis) e BLLS ( Bilinear Least-Squares), ¹²⁴ até o uso de redes neurais mais sofisticadas como as redes de Kohonen ¹²⁰ ( Tabela 1), cujo objetivo é conferir maior seletividade à metodologia, visando determinação dos fármacos em amostras complexas, como soro e urina.

Determinação de fármacos em fase sólida

Uma técnica recentemente explorada para determinação de fármacos em medicamentos tem sido a quantificação da fluorescência em fase sólida ( Tabela 2). Esta técnica tem demonstrado vantagens na redução do consumo de reagentes e geração de resíduos. Outra vantagem é o ganho obtido na intensidade de luminescência, uma vez que em fase sólida a molécula se encontra com uma estrutura mais rígida quando comparada em solução, evitando com isto perdas da intensidade luminescente por processos paralelos de desativação ( Figura 1S).

A espectroscopia de luminescência em fase sólida para compostos que possuem fluorescência nativa ainda tem sido muito pouco explorada, 19,20,70,112-115,125,133,135 apesar das várias vantagens que este tipo de aplicação pode oferecer. Adicionalmente, podem ser realizadas análises não-destrutivas, seguindo a tendência atual em direção à Química Limpa, bem como análises on-line e/ou in situ. Outra vantagem ao induzir luminescência diretamente na matriz da amostra diz respeito à eliminação de reações paralelas capazes de suprimir a luminescência, as quais comumente podem ocorrer em solução, e têm limitado a aplicação da espectroscopia de fluorescência na determinação de muitos analitos.

Recentemente, trabalhos empregando a quantificação de luminescência diretamente nas amostras sólidas, tal como comercializadas (comprimidos e cápsulas sob a forma de partículas sólidas finamente pulverizadas), têm sido descritos na literatura por Moreira e colaboradores 19,20,125,133 ( Tabela 2); os mesmos demonstraram a viabilidade e vantagens inerentes que este tipo de análise oferece, tais como simplicidade, rapidez, nenhuma geração de resíduos, nenhum preparo de soluções, nem pré-tratamento de amostra. Essas características tornam a espectrofluorimetria em fase sólida uma ferramenta bastante promissora para o controle de qualidade, quantificação e identificação de medicamentos com baixa solubilidade, como o ibuprofeno, 97,136 possibilitando ainda avaliar interações reais entre o princípio ativo e os excipientes diretamente na matriz oriunda do fármaco.

Uma contribuição extremamente importante dos trabalhos descritos por Moreira e colaboradores é o fato de terem encontrado propriedades luminescentes em moléculas quando em estado sólido, as quais em solução aparentemente não apresentavam lumines-cência. ²⁰ Este fato abre um precedente para investigar as propriedades luminescentes de fármacos em fase sólida, que até agora, em solução, não apresentaram luminescência.

Complexos fluorescentes de fármacos

No intuito de obter um sinal fluorescente, a formação de complexos entre o fármaco e outras espécies tem sido bastante explorada por muitos grupos de pesquisa 15,74,78,94-110,117,132 ( Tabela 3).

Muitos artigos têm demonstrado que a inclusão do fármaco dentro da cavidade de ciclodextrinas pode induzir a emissão de várias moléculas. 94-99,102,117 Este fato é explicado principalmente pela rigidez adicional à qual a molécula de fármaco é submetida. Outra vantagem deste tipo de complexos é que podem ser determinados fármacos que são insolúveis em meio aquoso, pois as ciclodextrinas fornecem simultaneamente sítios de ligação hidrofílicos e hidrofóbicos, estes últimos servindo para inclusão da molécula de fármaco, formando complexos do tipo hóspede-hospedeiro, como são conhecidos.

É bastante conhecido que quelatos orgânicos de íons lantanídeos exibem propriedades espectroscópicas bastantes peculiares. Enquanto seus espectros de absorção apresentam o perfil esperado para os respectivos complexos orgânicos, seus espectros de emissão são bandas extremamente estreitas características das transições 4 f dentro dos íons lantanídeos. 106,132 Este fenômeno conhecido como luminescência sensibilizada por lantanídeos 5,130-132,137 pode ser explicado como sendo devido à transferência de energia intramolecular desde o nível tripleto mais baixo do complexo para um nível 4 f do íon, resultando em uma mudança notória de espectros de bandas largas de excitação para uma banda estreita de emissão. ¹³² Isto tem sido bastante utilizado para determinação de fármacos em preparações farmacêuticas. 5,78,105,106,130-132 Nestes casos o íon mais empregado é o Eu(III), e baseia-se no comportamento espectroscópico do complexo Fármaco-Eu(III), no qual o fármaco, após absorver fortemente radiação eletromagnética a um comprimento de onda característico, transfere esta radiação para o íon Eu(III), resultando em um pico de emissão atômica estreito e intenso, característico da emissão do íon lantanídeo a 615 nm. Deste modo, o pico de emissão atômico do Eu(III) aparece em uma região espectral distante da possível interferência da matriz. ¹³⁷ Adicionalmente, pesquisas demonstraram que a intensidade da fluorescência em meios micelares de tensoativos não-iônicos é grandemente amplificada, 5,130 permitindo a determinação de alguns fármacos em matrizes onde se encontram a níveis de traços, como em alimentos. ⁵

Fluorescência nativa de íons metálicos

A quantificação da intensidade fluorescente emitida por compostos que possuem fluorescência nativa e que, por sua vez, reagem estequiometricamente com o fármaco de interesse tem sido amplamente utilizada na determinação de princípios ativos. 64,75-77,81,123

O íon fluorescente TlCl ₃ 2- formado pela redução quantitativa do íon Tl ³⁺ na presença do fármaco em meio de ácido clorídrico tem sido explorado na quantificação em fluxo de fármacos contendo grupos tióis como a tiopronina ( N-2-mercaptopropioniglicina) e a penicilamina (3-mercapto-D-valina), ⁷⁹ empregados no tratamento de doenças do fígado e pele, e na artrite reumatóide, respectivamente.

Fluoróforos obtidos por derivatização do fármaco

Processos mais complexos, com a finalidade de converter o fármaco em um derivado fluorescente, 15,82-84 permitindo aumentar ou gerar fluorescência a partir de compostos não fluorescentes, têm sido propostos.

Desta forma, o ácido ascórbico (vitamina C) tem sido quantificado em batelada e em fluxo em diferentes formulações comerciais, através da fluorescência da quinoxalina obtida pela reação de o-fenilenodiamina com o ácido deidroascórbico (produto da oxidação aeróbia do fármaco). ¹² O antiipertensivo captropil, foi quantificado a partir da fluorescência do ácido 1,2-diidroxinaftaleno-4-sulfônico, produto da redução estequiométrica do ácido 1,2-naftoquinona-4-sulfônico na presença do fármaco. ¹³ A dopamina foi determinada através da fluorescência do produto de condensação da etilenodiamina com a DOPAquinona, produto de oxidação da dopamina com nitrato de mercúrio (II), permitindo analisar dopamina na faixa de concentração em níveis biológicos (ng mL⁻¹). ¹⁵

Aly ⁸² desenvolveu uma metodologia para a determinação de cloreto de prenalterol, agente simpatomimético, baseada na derivatização deste fármaco em duas etapas, na primeira, é realizada a derivatização para obter um nitro-derivado, e na segunda o fármaco nitrogenado reage com 2-cianoacetamida em meio amoniacal, obtendo-se um composto fluorescente.

O anestésico procaína foi determinado pelo composto fluorescente obtido da reação do fármaco com a fluorescamina em tampão citrato/fosfato em pH 4,0, ⁸³ permitindo a determinação deste anestésico na faixa de concentração de ng mL⁻¹. Finalmente, a tiamina (vitamina B ₁) foi quantificada através da fluorescência emitida pelo composto 1-alquil-tio-2-alquil-isoindol, obtido da derivatização do grupo amino primário da vitamina com o o-ftalaldeído na presença de 2-mercaptoetanol.

Quantificação de fármacos baseada em diversos tipos de reações

Determinação de fármacos baseada em reações fotoquímicas

A vitamina K ₃ (menadiona) foi determinada através da quantificação de sua forma reduzida (diidronaftoquinona), fotoquimicamente obtida pela irradiação UV de uma solução do fármaco preparada em meio micelar de docecilsulfato de sódio (no qual é solúvel) e empregando análise por injeção em fluxo. ⁸⁹

Determinação baseada na hidrólise de fármacos

Muitos fármacos apresentam fluorescência nativa fraca, contudo a intensidade da emissão pode aumentar após hidrólise ácida, ⁹³ básica 120,121 ou até ser promovida em meio orgânico e catalisada por íons metálicos. ⁹² Neste sentido, Fernández e colaboradores descreveram um método para determinação de ampicilina em cápsula e suspensão, baseada na hidrólise ácida (pH 3,7) do fármaco, catalisada pelo íon cúprico em meio micelar de dodecilsulfato de sódio empregando sistema em fluxo. ⁹²

Por outro lado, os sedativos derivados das benzodiazepinas, diazepam, oxazepam e nitrazepam, foram quantificados após hidrólise em meio de ácido sulfúrico e etanol para os dois primeiros e em metanol para o último. ⁹³

O antimicótico tolnaftato foi satisfatoriamente determinado após hidrólise em meio básico para formar o fluoróforo β-naftolato, em preparações comerciais na forma de creme e pó. ⁶¹

Determinação baseada na cinética da reação luminescente de fármacos

Feng e colaboradores ¹ descreveram a determinação de ácido ascórbico ao nível de traços, baseada na inibição da velocidade de oxidação do fluoróforo pironina Y pelo nitrito na presença de ácido ascórbico. O método foi convenientemente empregado na determinação de ácido ascórbico em comprimidos, injeções, vegetais, frutas e bebidas.

Por outro lado, Pérez e colaboradores ¹¹¹ descreveram um método em fluxo para a determinação do hipotensivo nitroprussida, baseado na inibição da velocidade de fotorredução do fluoróforo fluoxina (fluorescência rosa, λ emissão=543 nm) pelo EDTA na presença do fármaco. Quando uma solução contendo floxina e EDTA é irradiada na ausência de oxigênio com luz branca em um pH adequado, a fotorredução do fluoróforo ocorre e a cor rosa desaparece. Na presença de nitroprussida a velocidade da reação fotoquímica diminui grandemente e esta mudança pode ser quantificada pela intensidade de fluorescência da floxina. Esta inibição pode ser explicada pela interação entre a nitroprussida com o estado triplete da floxina, assim a redução da cor devido à reação com o EDTA é impedida. O método foi aplicado satisfatoriamente na determinação do fármaco em preparações farmacêuticas e em soro sangüíneo.

Fluorescência nativa da espécie oxidada ou reduzida do princípio ativo

A fluorescência inerente das espécies oxidadas e reduzidas de fármacos não fluorescentes tem sido aplicada na determinação de ácido fólico, ¹³⁸ vitamina K ₃ ⁸⁶ e prenalterol. ⁸⁷ Zhang e Tang ¹³⁸ descrevem a determinação de ácido fólico pela oxidação on line do fármaco com chumbo em um sistema em fluxo. A metodologia foi empregada na determinação em comprimidos e em teste de dissolução de medicamentos.

A vitamina K ₃ foi determinada pela fluorescência inerente da espécie reduzida do fármaco, obtida pela reação com zinco metálico em meio de ácido clorídrico, empregado na forma de um reator de fase sólida em um sistema em fluxo. A metodologia foi empregada na determinação de vitamina K ₃ em diferentes formulações comerciais (comprimidos, solução e injetáveis) com sucesso.

Finalmente, o agente simpatomimético prenalterol foi determinado a partir da quantificação da forma oxidada fluorescente do fármaco pela ação de hexacianoferrato de potássio em tampão borato a pH 9,2, sendo aplicada na determinação do fármaco em comprimidos e injetáveis. ⁸⁷

Determinação de fármacos por métodos indiretos

β-estradiol, baseado em um ensaio imuno-fluorescente acoplado à cromatografia líquida e MIPs.

Os fármacos piroxicam e propanolol foram quantificados indiretamente, através da medida da intensidade emitida pelo fluoróforo formado da reação entre a N-bromosuccinimida e cloreto de metildilazina. ¹⁷ O método envolve a oxidação inicial dos fármacos com um excesso conhecido de N-bromosuccinimida, seguida da geração do fluoróforo pela reação da N-bromosuccinimida não consumida com cloreto de metildilazina.

A determinação indireta das vitaminas K ₁ e K ₃ também tem sido relatada na literatura. 16,85 Pérez e colaboradores ⁸⁵ desenvolveram um método para determinar vitamina K ₁ em fluxo, através da medida da fluorescência do ácido hidroxibenzóico (fluoróforo), quantitativamente gerado pela oxidação do ácido benzóico com peróxido de hidrogênio e catalisada pelo íon ferroso. O peróxido de hidrogênio foi estequiometricamente gerado, pela oxidação fotoquímica com radiação UV, da glicose na presença da vitamina.

Determinação de fármacos baseada na supressão de fluorescência

Metodologias baseadas na supressão da fluorescência têm sido empregadas para determinação de diversos analitos de interesse em inúmeras áreas de pesquisa. A teoria da supressão fluorescente tem sido descrita na literatura ¹⁴⁰⁻¹⁴⁹ e basicamente é governada pela Equação de Stern-Volmer (Equação 1):

onde, I ₀ e I são, respectivamente, a intensidade de fluorescência na ausência e na presença do fármaco supressor de fluorescência, [ Q] a concentração do fármaco e K SV é a constante de Stern-Volmer. Esta equação permitirá a quantificação do fármaco de interesse.

Os antibióticos metronidazol e tetraciclina também foram quantificados através da supressão da fluorescência. Sulkowska ¹²⁸ relatou a determinação de metronidazol a partir da supressão da fluorescência dos resíduos de triptofanil contidos na proteína de soro albumina na presença do fármaco. A metodologia foi aplicada na determinação de metronidazol em comprimidos. A determinação da tetraciclina foi realizada através de um sensor construído empregando como fase sensora uma membrana plastificada imobilizada na ponta de um feixe bifurcado de fibras ópticas. A membrana foi preparada imobilizando o fluoróforo 1,4- bi(5,5´-dimetilbenzoxazol-1´,3´-il-2´) benzeno em uma matriz polimérica de PVC e bis(2-etilexil)sebacato (DOS). Na presença do fármaco a intensidade de fluorescência diminui e esta pode ser relacionada com a concentração de tetraciclina presente na amostra. A metodologia foi aplicada na determinação do fármaco em comprimidos. ²²

Determinação de fármacos através de reações quimiluminescentes

A análise empregando quimiluminescência oferece alta sensibilidade, ampla faixa de resposta linear e instrumentação simples. A vitamina K ₃ tem sido quantificada pela medida da quimi-luminescência gerada pela reação entre luminol e peróxido de hidrogênio, catalisada por hematina. ¹⁶ Neste caso, o peróxido de hidrogênio é estequiometricamente gerado pela oxidação fotoquímica, com radiação UV, de etanol na presença da vitamina.

Fukutsu e colaboradores-lactâmico do antibiótico em meio alcalino. ⁴⁶ determinaram cefmetazol, um derivado semi-sintético do antibiótico cefamicina, em um sistema por injeção em fluxo. Neste sistema a quimiluminescência entre o antibiótico e o luminol foi induzida pela oxidação do luminol com a espécie superóxido, gerada da decomposição do grupo β ¹⁵⁰ Esta metodologia permitiu a determinação de traços deste fármaco em águas de limpeza de equipamentos industriais, como reatores, centrífugas, filtros, pulverizadores e tanques da indústria farmacêutica Sankyo Co. Ltd. ⁴⁶

O antibiótico gentamicina tem sido quantificado empregando análise em fluxo e a quimiluminescência do complexo peróxi-oxalato. ⁴⁹ Neste caso, o fármaco foi previamente derivatizado com o-ftalaldeido, com a finalidade de obter o ativador necessário para a reação. O catalisador usado foi o imidazol e a reação quimiluminescente foi realizada empregando dodecilsulfato de sódio (meio micelar) como carregador para evitar a degradação do peróxi-oxalato. A metodologia permitiu a determinação de gentamicina em várias formulações oftálmicas comerciais, permitindo análises na faixa de concentrações entre 4 e 30 µg mL⁻¹.

A determinação da dipirona foi realizada pela geração da luminescência após a oxidação do grupo sulfito da analgina (SO ₃ ²⁻) pelo MnO ₂ em meio ácido para formar dióxido de enxofre excitado (SO ₂*). Para aumentar a intensidade luminescente foi adicionada Rodamina B (fluoróforo) que gera uma luminescência mais intensa, após sua reação com o SO ₂*, uma vez que a energia adicional do sulfito pode ser facilmente transferida a um fluoróforo intencionalmente adicionado ao sistema. Esta metodologia foi aplicada na determinação do fármaco em comprimidos como Dipirona ®, Novalgina ® e Metamizol ® e em testes de dissolução. ⁵⁵ Huang e colaboradores ⁵⁶ determinaram dipirona pela auto-oxidação do grupo sulfito em meio de ácido sulfúrico contendo 0,1% de Tween 80 (meio micelar) e empregando Rodamina 6G para aumentar a sensibilidade do método.

Fármacos derivados da fluoroquinolona (FQ) foram quantifi-cados pela luminescência gerada na reação entre a fluoroquinolona complexada com íons lantanídeos e a molécula de SO ₂*, que é o produto da reação entre sulfito e íon cérico. Foram avaliadas as respostas para levofloxacina, moxifloxacina e trovafloxacina. Os íons lantanídeos empregados para complexar cada fármaco foram Eu ³⁺ para os dois primeiros e Tb ³⁺ para a trovafloxacina. O Esquema 5 mostra o mecanismo de determinação de trovafloxacina. ⁴⁵

É conhecido que nos últimos anos tem crescido enormemente o consumo e a produção de filtros solares, como conseqüência dos efeitos adversos que a irradiação UV pode causar à pele. Neste sentido, Townshend e colaboradores ⁵⁷ relataram a quantificação de octil-dimetil-PABA, um filtro solar de grande absortividade na região UV-B, através da quimiluminescência do fármaco induzida pelo íon MnO ₄⁻ em meio ácido. Esta metodologia foi eficientemente empregada na determinação do filtro solar em cremes comercialmente disponíveis, permitindo identificar o composto em concentrações na ordem de ng mL⁻¹.

TENDÊNCIAS E PERSPECTIVAS FUTURAS

Emprego de técnicas fluorimétricas não convencionais

No intuito de aumentar a sensibilidade e seletividade na determinação de compostos com fluorescência nativa outras técnicas fluorimétricas têm sido descritas. Dentre elas incluem-se a espectroscopia fluorescente sincronizada convencional, ¹⁵¹ a espectroscopia sincronizada derivada, 108,152,153,157 a espectroscopia fluorescente sincronizada de ângulo variável 129,154,155 e a espectroscopia sincronizada isopotencial. 155,156

Sabe-se que a fluorescência convencional envolve a obtenção de um espectro de emissão pela varredura em uma determinada faixa de comprimentos de onda (λ em) quando uma amostra é irradiada com um comprimento de onda de excitação (λ exc) fixo. De maneira similar, um espectro de excitação é obtido pela varredura nos diferentes comprimentos de onda de excitação enquanto se registra o sinal de emissão em um único comprimento de onda. Contudo, existe a possibilidade de variar simultaneamente λλ em, e dependendo da velocidade de varredura dos dois monocromadores é possível obter os diferentes formatos da técnica fluorimétrica conhecida como espectroscopia de fluorescência sincronizada.

Assim, se a velocidade de varredura é constante para os dois monocromadores, será gerado conseqüentemente um intervalo de comprimentos de onda (Δλ) constante entre λλ sejam apropriadamente selecionados, os quais podem ser rápida e convenientemente determinados a partir de gráficos tridimensionais. em e neste caso obtém-se a técnica conhecida como espectroscopia de fluorescência sincronizada convencional, a qual foi introduzida por Lloyd há mais de três décadas, ¹⁵¹ sendo esta amplamente empregada. Nos casos em que a fluorescência de um composto é mascarada pelo espalhamento de Rayleigh, esta técnica permite uma melhora nas medidas em relação ao método convencional, desde que os Δλ

Se os comprimentos de onda de excitação e emissão são variados simultaneamente, porém a diferentes velocidades, a técnica é conhecida como espectroscopia de fluorescência sincronizada de ângulo variável. 129,155 Essas diferentes velocidades permitem a construção de planos em ângulos entre +90º e -90º ao eixo X de excitação em toda a extensão do espectro completo. Esta técnica é mais seletiva e foi proposta por Kubic em 1980, ¹⁵⁴ e tem sido aplicada à determinação simultânea das vitaminas B ₂ e B ₆, ¹⁵⁸ na determinação simultânea dos diuréticos, furosemida, triamteno epiretamida, ¹²⁹ assim como em amostras ambientais de hidro-carbonetos aromáticos policíclicos. ¹⁵⁹

A introdução de artifícios matemáticos, como o emprego da derivada de primeira e segunda ordem em combinação com a fluorimetria sincronizada, tem sido empregada para aumentar as características espectrais minoritárias e para conseguir uma identificação mais confiável. Já a segunda derivada do espectro sincronizado pode ser útil para resolver bandas muito próximas nos casos de análise de misturas. As principais características desta técnica são a seletividade, sensibilidade, rapidez, simplicidade e baixo custo. ¹⁵² A técnica tem sido empregada para determinar simultaneamente meticilina e naftilina ¹⁵³ e norfloxacina na presença de ácido nalidíxico, ambas aplicando-se a primeira derivada do espectro sincronizado. A norfloxacina foi determinada em urina empregando-se a segunda derivada do espectro sincronizado. ¹⁰⁸ De la Pena e colaboradores ¹⁵⁷ descreveram um método para determinação simultânea dos ácidos salicílico e salicilúrico na análise de urina, através da espectroscopia sincronizada com a primeira derivada.

Emprego de técnicas de separação com detecção fluorimétrica

As Tabelas 4 e 5 relacionam os fármacos que têm sido quantificados empregando métodos de separação como CLAE ¹⁶¹⁻¹⁷⁷ ( Tabela 4) e eletroforese capilar 50,178-181 ( Tabela 5) na análise de amostras complexas, como plasma e urina, ou na quantificação de misturas de fármacos e em estudos relacionados com bioequiva-lência, farmacocinêtica e biodisponibilidade. Desta forma, estas técnicas apresentam grande potencialidade de uso em situações específicas onde a matriz da amostra seja muito complexa.

A espectroscopia de luminescência exibe inúmeras características vantajosas quando comparada com métodos já existentes e bem estabelecidos, pois compostos que aparentemente não apresentam fluorescência nativa poderão ser detectados através de técnicas fluorescentes não-convencionais. As técnicas não-convencionais conferem maior sensibilidade e seletividade à metodologia, uma vez que não é necessário realizar etapas prévias de separação, como ocorre nos métodos cromatográficos. Ressalta-se ainda que a implementação em análise de rotina destas técnicas não-convencionais não acarretará custo adicional de instrumentação, apenas dependerá de um treinamento e um software adequados para a execução dos experimentos e para o tratamento de dados.

CONSIDERAÇÕES FINAIS E CONCLUSÕES

O controle da qualidade de produtos farmacêuticos é um ramo da química analítica que tem um grande impacto econômico, social e principalmente na saúde pública, de forma tal que o desenvolvimento de metodologias analíticas confiáveis, rápidas e precisas para determinação de seus princípios ativos ainda é bem-vindo. Neste contexto, a espectroscopia de luminescência apresenta-se como uma técnica adequada e promissora para esses objetivos.

A literatura relata uma ampla gama de metodologias analíticas empregadas para a determinação fluorescente de fármacos, que vão desde a modificação do ambiente químico ao redor do analito para promover fluorescência em solução; derivatização ou complexação da molécula alvo com outras, para gerar uma espécie fluorescente; determinação da fluorescência em fase sólida, até o emprego de técnicas fluorimétricas mais sofisticadas, como espectroscopia sincronizada, espectroscopia sincronizada derivada e fluorescência de varredura de ângulo variável. As vantagens das análises por fluorescência incluem economia, redução no tempo de análise e na quantidade de rejeitos lançados ao meio ambiente, quando comparada com análises que empregam técnicas de separação acopladas com detecção fluorimétrica, visto que pode ser dispensado, em alguns casos, o pré-tratamento de amostra, e até o preparo de soluções nos casos da determinação fluorimétrica em fase sólida.

A versatilidade das técnicas de amostragem dos novos espectrômetros de luminescência, como o acoplamento de fibras ópticas, análise em fluxo e monitoramento em fase sólida, aliada às inúmeras possibilidades para obter compostos fluorescentes, poderá implementar novas metodologias baseadas em lumi-nescência para determinação de substâncias de relevância terapêutica. Assim, a quantificação luminescente de analitos, como filtros solares orgânicos, ácido p-metocinâmico, 2-etil-metil- p-metoxicinamato ¹⁸² e derivados da benzofenona; ¹⁸³⁻¹⁹¹ substâncias estrogênicas, como os derivados do estradiol; e antiinflamatórios não-esteróides (AINEs) como a indometacina, acetamicina, ibuprofeno, e muitos outros fármacos, será plausível dependendo apenas da habilidade do pesquisador para investigar e/ou explorar novas rotas alternativas que permitam quantificar esses analitos através da espectroscopia de luminescência.

Por outro lado, a análise fluorescente diretamente na matriz da amostra pode se tornar uma realidade, visto a excelente resposta que a determinação de medicamentos diretamente em fase sólida tem apresentado. Isto abre a possibilidade de desenvolvimento de metodologias de análise para quantificar princípios ativos em outros tipos de formulações como cremes, géis e ungüentos, além das amostras sólidas (comprimidos pulverizados e cápsulas) que já têm sido propostas na literatura.

A quimiluminescência como ferramenta analítica também pode oferecer muitas vantagens, principalmente em sistemas que possuem boa eficiência quântica, como luminol e peroxi-oxalato. Contudo, pesquisas que elucidem reação quimiluminescente de fármacos (derivatizados ou não) têm sido muito pouco exploradas, o que torna esta uma área de pesquisa bastante interessante. As muitas inovações das técnicas de detecção quimiluminescente também podem ser uma ferramenta promissora na determinação de moléculas de importância biomédica e ambiental conforme destacado na literatura. ¹⁹²

Desta forma, estudos relacionados com a utilização de métodos luminescentes em geral, na determinação de compostos farmacêuticos e cosméticos, ainda apresentam um grande campo de exploração e merecem ser incentivados.

O diagrama de Jablonski ( Figura 1S), mostrando os processos físicos que podem ocorrer após uma molécula absorver um fóton com energia da faixa ultravioleta ou visível, é apresentado como material suplementar (disponível em http://quimicanova.sbq.org.br em forma de arquivo PDF, com acesso gratuito), pois pode ser encontrado em livro texto. ⁴³

7. Guilbault, G. G.; Practical Fluorescence, 2 nd ed., Wiley: New York, 1990. [ Links ]

42 Lakowicz, J. R.; Principles of Fluorescense Spectroscopy, 2 nd ed., Plenum Press: New York, 1998. [ Links ]

43. Skoog, D. A.; West, D. M.; Holler, F. J.; Fundamentals of analytical Chemistry, 7 th ed., Saunders College Publishing: New York, 1996. [ Links ]

Recebido em 20/10/06; aceito em 30/11/07; publicado na web em 4/9/08

Figura 1S - clique para ampliar

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Aplicação e avanços da espectroscopia de luminescência em análises farmacêuticas

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Application and advances in the luminescence spectroscopy in pharmaceutical analyses IDepartamento de Química Analítica, Instituto de Química, Universidade Estadual Paulista, 14801-970 Araraquara - SP, Brasil IICurso de Farmácia, Universidade São Francisco, 12916-900 Bragança Paulista - SP, Brasil IIIDepartamento de Química e Ciências Ambientais, Universidade Estadual Paulista, 15054-000 São José do

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Hevelley de Souza

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TRABALHOS ORIGINAIS

Aplicação do método da espectrofotometria de derivadas na identificação e doseamento simultâneo de sistemas multicomponentes

Application of derivative spectrophotometric method in identification and simultaneous analysis of multi-component system

Luís Roberto Paschoal; Weverson Alves Ferreira; Mara Régia Dias Prado; Ana Paula Oliveira Vilela

Faculdade de Farmácia, Laboratório de Controle de Qualidade Físico-Químico, UNIFENAS

RESUMO

Neste trabalho, demonstrou-se a aplicação do método da espectrofotometria de derivadas no doseamento simultâneo de alguns fármacos em produtos farmacêuticos comerciais. Os métodos desenvolvidos apresentaram-se precisos, sensíveis, seletivos, reprodutivos e de baixo custo.

Unitermos: Espectrofotometria de derivadas. Doseamento simultâneo. Benzocaína - cloreto de cetilpiridínio. Lidocaína - prilocaína. Mebendazol - tiabendazol.

ABSTRACT

The application of the derivative spectrophotometric method in the simultaneous determinations of some drugs in commercial pharmaceutical products is demonstrated in this work. The developed methods proved to be selective, reproductive and of low cost.

Uniterms: Derivative spectrophotometric methods. Simultaneous determinations. Benzocaine - cetylpiridinium chloride. Lidocaine - prilocaine. Mebendazole - thiabendazole.

INTRODUÇÃO

A utilização do método da espectrofotometria de derivadas no doseamento simultâneo de dois princípios ativos em diversas formas farmacêuticas tem permitido a obtenção de expressivos resultados em nosso laboratório. Devido às suas propriedades e características, este método apresenta-se como ferramenta muito útil nas análises de fármacos associados em comprimidos, pastilhas, cremes, entre outros, sem a necessidade de separações prévias. A cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE) é uma técnica muito explorada, principalmente pelos laboratórios de controle de qualidade das indústrias farmacêuticas, tendo em vista que nos compêndios oficiais, tais como a USP - United States Pharmacopoeia, 2000, a maioria dos fármacos utiliza este método para a separação e posterior doseamento. Entretanto, o método em questão é uma alternativa menos dispendiosa e também eficiente, se comparada ao método da CLAE.

Como prova desse fato, muitos trabalhos recentes (Yesilada et al., 1991; Bonazzi et al., 1996; Erk, Onur, 1997; Hassouna, 1997; Karali et al., 1998; Dinc, Onur, 1998; Paschoal, Ferreira, 2000; Prado et al., 2001,) foram publicados, empregando o método da espectrofotometria de derivadas, que se mostrou ser preciso, sensível, seletivo, reprodutivo e de baixo custo.

ALGUNS ASPECTOS TEÓRICOS DA ESPECTROFOTOMETRIA DE DERIVADAS

Um dos problemas da espectrofotometria nas regiões do ultravioleta - visível (UV-vis) de misturas de componentes está relacionado com a sobreposição das bandas ( overlapping) de transição eletrônica ou de transferência de carga em um mesmo solvente. A Figura 1 ilustra a sobreposição de dois fármacos associados na forma farmacêutica de pastilha e estudada em solução hidroalcoólica por Paschoal e Ferreira (2000).

A diferenciação do espectro de ordem zero não aumenta as informações do espectro original, mas ocorre supressão das bandas largas, realce das bandas estreitas, a resolução de um "ombro" para uma banda, etc., obedecendo, ainda, a Lei de Beer-Lambert.

Em um espectro de primeira ordem (derivada primeira) ocorre a anulação no ponto referente ao comprimento de onda máximo (λ max) do espectro de ordem zero. É positivo onde a absorção aumenta e negativo onde ela diminui. Assim, uma curva diferencial de ordem n se anula n vezes, apresentando n + 1 bandas.

Na sobreposição de espectros de derivadas dos componentes de uma mistura, obtidos desse modo, pode-se individualizar melhor os constituintes e até eliminar a interferência de um componente sobre o outro, excipientes, entre outros. A Figura 2 mostra os espectros de primeira ordem dos compostos obtidos a partir da Figura 1.

Observa-se nas curvas da Figura 2 que, em certos λ, ocorre a anulação do espectro de um componente enquanto há absorção do outro. Deste modo, sobrepondo-se várias derivadas de concentrações crescentes de cada componente e, obtendo-se os valores das amplitudes nos pontos de anulação (zero crossing), é possível construir-se curvas de calibração, além de se eliminar eletronicamente os erros sistemáticos provenientes de interferências ( overlapping). Comercialmente, espectrofotômetros que realizam varredura de espectro, apresentam no software de interface, que é um programa que controla o funcionamento do aparelho, a possibilidade de se derivar até a quarta ou mais derivadas, além de outros diferentes recursos necessários à obtenção dessas curvas, tais como Δλ.

Desta forma, os objetivos do presente trabalho são: (a) apresentar a metodologia empregada em nosso laboratório para o doseamento simultâneo de alguns fármacos em diferentes formas farmacêuticas; (b) incentivar alunos de pós-graduação, pesquisadores, laboratórios, entre outros, a utilizarem este método como alternativa eficiente na identificação e análise de misturas de componentes.

MATERIAL E MÉTODOS

Reagentes

As matérias-primas cloreto de cetilpiridínio, benzocaína, mebendazol e tiabendazol, foram adquiridas dos distribuidores Henrifarma, Synth, Emellffar Comercial e do Brasil. Os insumos prilocaína e lidocaína, grau USP foram fornecidos pela empresa Cristália - Produtos Químicos Farmacêuticos Ltda.

Já as amostras dos produtos acabados foram aquelas solicitadas aos fabricantes de produtos comerciais acabados e conforme demonstrado abaixo:

1 - Pastilhas Cetil Drops (Luper): cada pastilha contém:

- cloreto de cetilpiridínio = 2,5 mg

- benzocaína = 2,0 mg

2 - Creme Medicaína 5 % (Cristália):

3 - Comprimidos Octelmin ( Schering-Plough): cada comprimido contém:

- mebendazol = 100 mg

- tiabendazol = 166 mg

Todos os demais reagentes e solventes empregados foram de grau analítico, com pureza superior a 98% v/v.

Toda a água utilizada nas lavagens de vidraria, preparo das soluções e diluições foi recém-destilada e desionizada.

Triplicatas das amostras identificadas por fabricante foram analisadas frente a padrões analíticos e através dos métodos de espectroscopias nas regiões do ultravioleta e infravermelho, análise térmica (TG/DTG), Karl Fischer, ponto de fusão, entre outros.

Os fármacos foram utilizados como adquiridos dos fabricantes, sem purificações prévias.

Soluções Padrão

Em todas as determinações usualmente preparam-se soluções padrão mais concentradas (estoque) dos fármacos, no solvente determinado, em que ocorreu sua máxima solubilidade. Exemplos:

Solução estoque:

- solução hidroalcóolica 1:1 a 100 mg . mL⁻¹ de cloreto de cetilpiridínio ou de benzocaína;

- solução 1:1 (ácido clorídrido e água) 100 mg . mL⁻¹ de mebendazol ou de tiabendazol;

- solução hidroalcoólica 1:1 a 100 mg . mL⁻¹ de lidocaína ou prilocaína.

A seguir, são preparadas soluções diluídas de concentrações variadas, a partir das soluções estoque correspondentes, em determinada faixa de concentrações, que seguem a Lei de Lambert-Beer, para obtenção dos espectros de ordem zero.

As soluções das amostras de produtos acabados são preparadas do mesmo modo e diluição, sendo, também, obtidos seus espectros de ordem zero.

TÉCNICA EXPERIMENTAL E EQUIPAMENTO UTILIZADO

Os espectros de ordem zero e suas respectivas derivadas são obtidos na região do ultravioleta (UV), empregando-se espectrofotômetro Shimadzu mod. UV-1601 PC, de varredura, que apresenta as seguintes características: duplo feixe entre 190 - 1100 nm, banda espectral de 2 nm, interfaceado por software, que permite correção automática de linha base e manipulação total do espectro. As análises espectrofotométricas são realizadas a 20 ºC, utilizando controlador de temperatura Shimadzu TCC-240 A.

TRATAMENTO DOS DADOS EXPERIMENTAIS

Espectroscopia eletrônica na região do ultravioleta

Os espectros de absorção de ordem zero dos fármacos e suas respectivas derivadas são obtidos em solvente adequado, através do estudo da absorção da radiação na região do ultravioleta (200 a 350 nm) e Δλ = 2,0 nm . As medidas espectrofotométricas são realizadas em cubetas padronizadas de quartzo de 1 cm e velocidade de varredura de 8,3 nm s⁻¹ ("middle"), observando-se a estabilidade das soluções.

Os máximos de absorção, λ max, são, então, identificados empregando-se os recursos do software do espectrofotômetro. Os coeficientes de absortividades molares (e) dos compostos são calculados empregando-se a Lei de Lambert-Beer e corrigindo a linha de base obtida para o solvente utilizado.

A seguir, os espectros de derivada primeira são calculados e visualizados a partir dos seus espectros de ordem zero usando-se o software do equipamento. Derivadas superiores são conseguidas com o mesmo procedimento; porém há a necessidade de efetuar-se um ajuste nas curvas através da escolha do valor Δλ adequado para a melhor relação sinal/ruído.

Preparação das curvas calibração

A partir da técnica de anulação ( zero crossing), isto é, lendo-se as amplitudes de absorção de um componente no comprimento de onda de anulação do outro, são construídas curvas de calibração com a finalidade de se determinar a linearidade do método e permitir a análise quantitativa do produto acabado. A Figura 3 mostra exemplos de curvas de calibração obtida por Paschoal e Ferreira, (2000), para o caso os fármacos ilustrados na Figura 2.

A Tabela I apresenta os resultados obtidos para os teores de cloreto de cetilpiridinio e benzocaína determinados em pastilhas, pelo método de espectrofotometria de derivadas.

Da mesma forma, foi desenvolvida a determinação simultânea de lidocaína e prilocaína em cremes pelo método da espectrofotometria de derivadas (Prado et al., 2001).

A Figura 4 apresenta os espectros de ordem zero obtidos para os anestésicos isoladamente.

A seguir são apresentadas as curvas de derivada primeira ( Figura 5) e segunda ( Figura 6), obtidas a partir dos espectros de ordem zero, evidenciando os comprimentos de onda de anulação dos ativos, do creme e simulação de um creme ( Figura 7).

A Tabela II apresenta os resultados encontrados para os anestésicos estudados em creme a 5% (m/m), empregando-se o método da espectrofotometria de derivadas e comparando os resultados com aqueles determinados por CLAE pela indústria fabricante.

A seguir, são apresentados os resultados da determinação simultânea de mebendazol e tiabendazol em comprimidos através de espectrofotometria de derivadas.

A Figura 8 apresenta os espectros de absorção de ordem zero (impedindo o doseamento convencional) e a Figura 9 os de derivada primeira obtidos dos anti-helmínticos mebendazol e tiabendazol em solução ácida, demonstrando a sobreposição das bandas ( overlapping).

Pelas curvas obtidas em primeira derivada, observa-se a possibilidade do doseamento simultâneo dos fármacos associados em comprimidos através da técnica de zero-crossing. Assim, foram obtidas as equações de regressão linear correspondentes aos comprimentos de onda de anulação do mebendazol (287,10 nm) e do tiabendazol (242,5,00 nm), obtendo r = 0,9999 e r = 0,9993, respectivamente.

CONCLUSÕES

A metodologia proposta neste trabalho configura-se, assim, em alternativa extremamente vantajosa e viável para a solução de problemas espectrais de sobreposição de mais de um componente.

A grande vantagem da utilização da espectrofotometria de derivadas está relacionada com a possibilidade de se minimizar os problemas com interferentes, sem complicados procedimentos de separação ou extração prévios, bem como não necessitar de padrões ultrapuros exigidos na CLAE, além da grande possibilidade da validação do método no doseamento simultâneo, aliada ao baixo preço.

AGRADECIMENTOS

A FAPEMIG e ao CNPq, pelo apoio financeiro referente à aquisição do espectrofotômetro de varredura e bolsas de iniciação científica, respectivamente.

As indústrias Cristália - Produtos Químicos Farmacêuticos e a Schering-Plough, pelo fornecimento de padrões bem como de produtos comerciais de suas linhas.

Recebido para publicação em 21 de junho de 2002.

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Aplicação do método da espectrofotometria de derivadas na identificação e doseamento simultâneo de sistemas multicomponentes

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TRABALHOS ORIGINAIS Aplicação do método da espectrofotometria de derivadas na identificação e doseamento simultâneo de sistemas multicomponentes Application of derivative spectrophotometric method in identification and simultaneous analysis of multi-component system Luís Roberto Paschoal; Weverson Alves Ferreira; Mara Régia Dias Prado; Ana Paula Oliveira Vilela Faculdade de Farmácia, Laboratório de Controle de Qualidade Físico-Químico, UNIFENAS RESUMO Neste trabalho, demonstrou-se a aplicação do método da espectrofotometria de derivadas no doseamento simultâneo de alguns fármacos em produtos farmacêuticos comerciais.

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Espectrofometria- qualidade da matéria-prima
Doi: 10.21577/0100-4042.20170052
Maria Alice

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Espectroscopia: biodisponibilidade
Doi: https://doi.org/10.17058/rjp.v10i2.14965
Maria Alice

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Qualidade da matéria-prima: cromatografia líquida.
Doi: https://doi.org/10.1590/S0100-40422010000200028
Maria Alice

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qualidade de matéria-prima:  cromatografia gasosa.
Doi: https://doi.org/10.33448/rsd-v9i9.7746
Maria Alice