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precalentar el buffer de lisis A 65 °C

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Colocar la muestra en un mortero que haya sido precongelado previamente a -80°C, agregar nitrógeno líquido y moler hasta obtener un polvo fino.

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Homogenizar y transferir a un tubo nuevo, incubar a 90oC por 10 minutos, mezclar un par de veces durante el proceso. Adicionar 1/10 de volumen de SDS al 10%, homogenizar e incubar por 5 minutos más. Transcurrido ese tiempo se permite que la muestra se enfríe a temperatura ambiente.

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Adicionar 0.5 volúmenes de la mezcla previamente enfriada de fenol-cloroformo-alcohol isoamílico (25:24:1 v/v), homogenizar y centrifugar a 14,000 rpm por 15 minutos a 4oC.

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Transferir el sobrenadante a un tubo nuevo y agregar 0.1 volúmenes de acetato de sodio 3M (pH 5.2), 0.5 volúmenes de fenol-cloroformo (5:1 v/v), homogenizar y centrifugar a 14,000rpm por 10 minutos a temperatura ambiente.

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Transferir el sobrenadante a un tubo nuevo y adicionar 0.65 volúmenes de la mezcla de Etanol-Metanol-Ácido acético glacial (9:3:1 v/v). Agitar y centrifugar a 13,000 rpm por 5 minutos a temperatura ambiente. Para mejorar el rendimiento se recomienda antes de centrifugar incubar por una hora a -20oC.

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Tirar el sobrenadante. Lavar con 1 mililitro de la mezcla de Etanol-Agua-Metanol-Acetato de sodio 3M, pH 5.2 (30:9:5:1). Agitar y centrifugar a 13,000 rpm por 5 minutos. Descartar el sobrenadante. Si persisten algunas sales se puede dar un lavado adicional con 1 mililitro de etanol al 70%.

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Secar la pastilla y disolver en agua grado biología molecular (de 20 a 100 μL dependiendo del tamaño de la pastilla formada)