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A PCR tem muitas aplicações práticas e em pesquisa. Ela é rotineiramente usada em clonagens de DNA, diagnósticos médicos e análises forenses de DNA, e mesmo alguns ramos da ecologia.

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USO DA ELETROFORESE EM GEL PARA VISUALIZAR OS RESULTADOS DA PCR

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USO DA ELETROFORESE EM GEL PARA VISUALIZAR OS RESULTADOS DA PCR

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Os resultados de uma reação PCR são geralmente visualizados (tornam-se visíveis) através do uso da eletroforese em gel. Eletroforese em gel é uma técnica na qual fragmentos de DNA são puxados por uma corrente elétrica através de uma matriz de gel, e que separa os fragmentos de DNA de acordo com o tamanho. Um padrão, ou escada de DNA, é tipicamente incluído para que o tamanho dos fragmentos nas amostras da PCR possa ser determinado.

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Eletroforese horizontal de DNA em gel de agarose

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1.    Desnaturação (96 °\text C96°C96, °, start text, C, end text): Aquece fortemente a reação para separar, ou desnaturar, as fitas de DNA. Isso proporciona um molde de fita simples para a próxima etapa.

2.    Anelamento (555555 - 656565°\text C°C°, start text, C, end text): Resfria a reação para que os primers possam se ligar às suas sequências complementares no DNA molde de fita simples.

3.    Extensão (72 °\text C72°C72, °, start text, C, end text): Eleva a temperatura da reação para que a Taq polimerase estenda os primers, sintetizando novas fitas de DNA.

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Assim como outras DNA polimerases, a Taq polimerase consegue fabricar DNA somente quando lhe é dado um primer. Os primers de PCR são pedaços curtos de DNA de fita simples, geralmente por volta de 202020 nucleotídeos de comprimento.

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Assim como a replicação de DNA em um organismo, a PCR requer uma enzima DNA polimerase que faça novas fitas de DNA usando as existentes como moldes. A DNA polimerase tipicamente usada na PCR é chamada de Taq polimerase.

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O objetivo da PCR é fabricar quantidade suficiente da região de interesse do DNA, de modo que essa possa ser analisada e utilizada de alguma outra maneira. Por exemplo, DNA amplificado por PCR pode ser enviado para sequenciamento, visualizado por eletroforese em gel, ou clonado em plasmídeo para futuros experimentos.

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A reação em cadeia da polimerase (PCR) é uma técnica rotineira de laboratório usada para fazer muitas cópias (milhões ou bilhões) de uma região específica do DNA. Essa região do DNA pode ser qualquer objeto de interesse do pesquisador.