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Prova de penetração nos oócitos do Hamster

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Prova de penetração nos oócitos do Hamster

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Um dos motivos para terem sido usados oócitos de Hamster nesta experiência é o facto de estes serem especializados a nível da zona pelúcida e não da membrana plasmática.
Pensava-se que esta prova seria uma prova ideal na avaliação do poder fecundante dos espermatozóides humanos devido á sua variabilidade intra-individual mas, acabou por se tornar num "pobre indicador".
Como em qualquer outra prova houve diversos resultados. Em um deles, a correlação entre a prova e taxa de fecundação dos oócitos humanos "in vitro" era boa, mas no outro foi nula. Foi devido aos resultados nulos que descartaram a possibilidade de eliminar doentes de um programa de fertilização "in vitro" através desta prova.

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Trabalho realizado por: Bárbara Nunes nº4 , Bruna Pereira nº6 , Catarina Brazão nº8
Disciplina: Biologia
Turma: 12ºA
Professora: Jocélia Albino

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Neste experimento foram estudados 426 indivíduos do sexo masculino inférteis. Os gráficos de frequência de distribuição a seguir mostram os resultados da motilidade, número, morfologia e prova de hipo-osmoaridade.

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1.http://eduardodale.com.br/espermograma
2.https://colegiovascodagama.pt/ciencias3c/doze/unidade1.html
3.https://brasilescola.uol.com.br/biologia/espermatozoide.htm
4.https://dicionario.priberam.org/motilidad
5.https://www.tuasaude.com/resultado-do-espermograma/
6.https://criobrasil.com.br/medicina-masculina/6-passos-para-entender-a-analise-de-um-espermograma-completo/
7. https://ipgo.com.br/fertilidade-homem/
8.https://www.conceptionbr.com/anticorpos-anti-espermatozoides

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Frequencia de distribuição da prova de Hipo-osmoralidade

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Frequencia de distribuição da prova de Hipo-osmoralidade

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Neste último gráfico conseguimos concluir que este é bimodal com médias compreendidas entre de 45% a 55% que são valores anormais e de 65% a 75% que são valores considerados normais.

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Frequência de distribuição da morfologia

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Frequência de distribuição da morfologia

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Este gráfico ao contrário dos anteriores não apresenta uma inclinação para a esquerda nem uma elevada quantidade de números próximos de zero.

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Partindo da análise deste gráfico, conseguimos reparar que tal como o anterior existe uma inclinação para a esquerda e frequências próximas a zero mas este apresenta uma percentagem de oligozoospermia elevada pois o grupo estudado é infértil.

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Frequência de distribuição da motilidade

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Frequência de distribuição da motilidade

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Neste gráfico é possível observar uma inclinação para a esquerda com algumas frequências próximas ou iguais a zero.

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Os espermatozides podem ser divididos em quatro categorias de motilidade:
I. Espematozóides móveis e progressivos: deslocam-se para frente, em movimento linear.
II. Espematozóides móveis e não progressivos: movimentam-se, mas sem deslocamento ou espematozóides imóveis.

Classificamos um indivíduo como portador de astenozoospermia quando obtemos percentagens de espermatozóides móveis totais (progressivos e não progressivos) inferiores a 40% do total de espermatozóides.
A quantidade de espermatozóides móveis traduz uma série de informações por meio do espermograma: quando temos espermatozóides móveis, existe a certeza de que estão vivos e que foram capazes de passar por todo o processo de espermatogênese. Em outro extremo, quando temos uma situação em que há apenas espermatozóides parados, podemos estar diante de espermatozóides mortos, inviáveis (necrozoospermia), ou de espermatozóides com defeitos na sua estrutura interna, incapazes de qualquer tipo de movimentação, mas ainda vivos. É importante diferenciar essas duas condições uma vez que terão formas diferentes de conduta. Quando temos espermatozóides totalmente imóveis no esperma, a causa mais comum é a necrozoospermia.

CAUSAS
-Períodos longos de abstinência ejaculatória;
-Infecções com presença de leucócitos (células de defesa) no fluido seminal;
-Obstruções parciais (por tecido cicatricial após cirurgia de reversão de vasectomia, por exemplo).

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É um teste que avalia a integridade funcional da membrana plasmática dos espermatozóides e o transporte de água através da mesma.

Baseia-se na observação de que os espermatozóides cujas membranas estão intactas absorvem água, quando expostos a uma solução hipotónica (em relação ao meio intracelular), sendo capazes de manter um gradiente osmótico. Devido a isso poderão apresentar um inchaço da cauda. Por outro lado, aqueles cuja membrana não estiver intacta não mantêm esse gradiente osmótico pois não apresentam capacidade osmo-reguladora e, consequentemente não iram exibir o inchaço da cauda.

Esta característica é importante no processo de capacitação, reacção acrossómica e na fusão dos gâmetas.

A membrana plasmática é indicadora da integridade funcional da membrana do espermatozóide,  e com a observação de resultados, observou-se uma alta correlação com a capacidade de fertilização “ in vitro”.

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A cauda do espermatozóide é composta por uma estrutura de nove diplomicrotúbulos em volta de um par central, por toda extensão dos microtúbulos estão presentes complexos proteícos. Para a cauda ser considerada normal ela deve ter um calibre uniforme e ser mais fina que a peça intermediária. A ausência destes complexos protéicos pode levar ao encurtamento, alterações na grossura e enrolamento da cauda.

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Conectada à cabeça do espermatozóide está a peça intermediária. Durante a espermiogênese, as mitocôndrias desta célula migram para essa região. Estas mitocôndrias vão fornecer energia para o movimento do espermatozóide, assim uma alteração nesta região pode gerar problemas de motilidade. Para a peça intermediária ser considerada normal ela deve ser delgada, uniforme e proporcional à cabeça.

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A cabeça do espermatozóide contém o seu núcleo com a cromatina muito condensada e o acrossoma que contém enzimas que serão necessárias para o processo de fecundação. Logo, anomalias nesta estrutura podem levar a impossibilidade de fertilização. Para ser considerada normal, a cabeça do espermatozóide deve ser lisa, com um contorno regular, de forma oval e a região acrossomica deve ocupar 40 a 70% de sua area.

Exemplo de anomalias:

-Alterações do acrossoma podem levar à globozoospermia, uma condição que altera o formato da cabeça do espermatozóide deixando-a mais arredondada. Existem dois tipos de globozoospermia: no tipo I, os espermatozóides não possuem o acrossoma, o que impede a penetração no ovócito II e no tipo II, os espermatozóides apresentam apenas partes do acrossoma.

-Uma anomalia  que pode ocorrer na espermiogênese é a formação de espermatozóides sem cabeça. Essa é uma condição considerada rara em humanos e pode estar associada a erros na migração nuclear e no posicionamento da cauda.

-A presença de um vacúolo na cabeça dos espermatozóides ocorre naturalmente durante o processo de condensação do núcleo e, portanto, não deve ser considerada uma anormalidade.

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Motilidade significa movimento ou força motriz, esta pode ser expressa em percentagem e divide-se nas seguintes categorias: motilidade nula; “in situ”; progressão lenta; progressão rápida e progressão muito rápida. Através de um estudo utilizando um microscópio com uma ampliação 400x num local com temperatura entre 18 e os 24°C (caso contrário as lâminas devem ser aquecidas à temperatura de 37ºC), deverão ser avaliados cerca de 10 dos diferentes campos microscópicos e determinar a tal percentagem.
A motilidade normal de um espermatozóide é igual ou superior a 32% com motilidade progressiva.

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Os espermatozóides têm prazo de vida para proporcionar a gravidez na fecundação. Após ser fabricado, ele pode ficar por tempo indeterminado na reserva da bolsa escrotal, mas tem prazo de validade após a ejaculação. Se o homem for saudável, o espermatozoide pode durar até 72 horas dentro do corpo da mulher. O espermatozóide, para viver mais tempo, depende de alguns fatores. Se o homem for fumante ou dependente de drogas, a vida útil do espermatozoide reduz muito. Para aumentar a durabilidade dos espermatozóides, é indicado que o homem se abstenha de uso de tudo que faça mal ao seu corpo, tente manter uma alimentação saudável e evite bebidas alcoólicas.

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Para ser fértil, o homem precisa apresentar uma quantidade normal de esperma. Caso esse número seja inferior, ele pode ser diagnosticado com oligospermia — ou seja, baixa contagem de espermatozóides. A oligoespermia pode ser causada por vários motivos como a inflamação dos testículos, local de produção dos espermatozóides. Algumas causas são a alimentação, uso de roupas apertadas, tabagismo e alcoolismo. A oligoespermia pode ser dividida nas seguintes variantes: Leve – quando a contagem está entre os 10 e os 15 milhões de espermatozoides/mL; Moderada – quando se verificam entre 5 a 10 milhões de espermatozoides/mL; Grave – quando a contagem se situa entre os 0 e os 5 milhões de espermatozoides/mL.

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A morfologia dos espermatozóides está diretamente relacionada com a sua função. A dimensão da cabeça, por exemplo, é um fator determinante para o seu movimento progressivo.
Para uma avaliação deste tipo, é necessário a preparação de uma lâmina que contenha esperma que será posteriormente fixada com coloração. Esta avaliação permite a identificação de erros que podem ocorrer durante a espermiogênese e maturação no epidídimo, resultando na formação de espermatozóides anormais. Estas mutações podem levar à terazooespermia, ou seja, uma menor quantidade de espermatozóides normais em relação à medida padrão. Essas anomalias podem ocorrer nos diversos constituintes do espermatozóide (cauda, cabeça e peça intermediária).

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De forma a se conhecer a concentração dos espermatozóides utiliza-se hemocitómetro de Neubauer melhorado (instrumento que permite a contagem de células). O primeiro passo deverá ser a homogeneização e seguidamente, a diluição do esperma em água destilada. Dessa solução já homogeneizada é transferida uma gota para o local de contagem. As células devem sedimentar durante 2 a 5 minutos fazendo-se em seguida a contagem dos espermatozóides (ampliação de 200 ou 400x). Nesta técnica não são contabilizadas as caudas isoladas dos espermatozóides. O valor normal de concentração é igual ou superior a 15 milhões de espermatozóides por ml.

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Aglutinação: União, aderência
Num espermograma normal não deve haver aglutinação presente pois é algo que dificulta a movimentação dos espermatozóides, já que, estão todos unidos como uma espécie de cola.
A presença de aglutinação pode dificultar uma gravidez normal pois os espermatozóides têm pouca mobilidade, porém, tal só acontece em aglutinações muito elevadas. Estas são causadas geralmente por anticorpos anti-espermatozóides formados para combater alguma infecção ou traumatismo nas vias genitais. Os anticorpos ligados à cabeça e à peça intermediária são os que mais afetam a fertilidade.

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A vitalidade é a percentagem de espermatozóides vivos. Este teste é efetuado utilizando corante supravital, pois nas células mortas este consegue penetrar no espaço intracelular tornando possível a distinção entre os espermatozóides mortos e vivos. O experimento é realizado misturando 0,1 ml de  esperma e solução  isotónica de eosina Y a  1%.Após 2 minutos, deixa-se secar e faz-se a leitura ao  microscópio com uma ampliação de  400X. Para o valor da vitalidade ser normal, 58% ou mais dos espermatozóides da amostra têm que estar vivos.

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A frequência de distribuição é uma tabela que nos confere a frequência de uma ou mais variáveis dentro de uma amostra.

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O prognóstico da capacidade fecundante de um indivíduo só deve ser deduzido após a repetição do estudo do esperma passados cerca de 3 meses, período que corresponde aos 74 dias necessários à diferenciação de espermatozóides e aos 14 dias de trânsito epididimário.

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Prova de sobrevivência dos Espermatozóides

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Prova de sobrevivência dos Espermatozóides

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Após a prática de fertilização “in vitro” humana, Mandelbaum observou a conexão existente entre a motilidade pós-capacitação e a capacidade fecundante do esperma “in vitro”. Assim, em 1984, surgiu a prova de sobrevivência dos espermatozóides, onde se estabelece a relação entre a percentagem do número de espermatozóides móveis por mililitro, antes e após de 17 horas de cultura. Passados  3 anos, Mandelbaum observou que as amostras de espermas normais com sobrevivência nula, eram fecundantes em 72% dos casos. Enquanto que os espermas anormais apresentavam uma taxa de 20% apenas, o que proporcionou uma grande diferença entre estes dois grupos.

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No ano de 1972, Jacobs concluiu que um terço das anomalias cromossômicas diagnosticadas na população humana, calculadas em 7% das gravidezes diagnosticadas, eram provenientes de espermatozóides cromossomicamente anormais. Concluindo assim que 2% dos espermatozóides no ejaculado de um indivíduo, seriam geneticamente anormais.

Depois de muitos anos e muitos experimentos, obtiveram uma frequência média de anomalias cromossómicas de cerca de 10,4% - 1 a 4,7% de aneuploidias e o resto correspondia a alterações estruturais, sobretudo rupturas cromossómicas.