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Primeiramente, acerca da recolha da impressão digital, os resultados obtidos não foram os mais nítidos devido à presença de suor na nossa impressão.

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- Relativamente à recolha das impressões digitais, a passagem dos dedos no nariz e/ou testa deve-se ao facto de estas serem partes gordurosas, facilitando assim , a recolha das impressões. De seguida, o usou-se o pó negro, pois a superfície era clara (se essa fosse escura, recorria-se a um pó branco, como o giz ou o gesso).

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1- Passar os dedos na zona do nariz e/ou testa;
2- Colocar os dedos numa superfície clara;
3- Com a ajuda de um pincel, espalhar um pó negro (carvão em pó), gentilmente, cobrindo a superfície;
4- Retirar os excessos de pó;
5- Aplicar fita-cola nas impressões de modo a que estas fiquem sem bolhas de ar;
6- Retirar a fita-cola e observar os resultados

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Após este último procedimento, acabámos por descobrir que o culpado era o suspeito 3. Isto uma vez que os seus fragmentos de DNA correspondiam com os da amostra da cena do crime.

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- Quanto à recolha do DNA do sangue, foi cortada uma porção de zaragatoa para que esta coubesse no microtubo. Por outro lado, a adição da água destilada deveu-se à necessidade de aumentar volume da amostra, visto que a quantidade de sangue na zaragatoa era muita pequena. Após isto, de modo a separar os conteúdos do microtubo, foi preciso colocá-lo na centrifugadora, pelo que, para balançar o peso, colocou-se outro microtubo  no lado oposto ao do original. Depois, descartou-se o liquido sobrenadante, uma vez que para extrair o DNA, usamos os leucócitos, que devido a sua elevada densidade, afundaram. Para concluir, usou-se o banho térmico para incubar esta solução e guardá-la a 4 ºC para impedir mudanças na amostra.

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Através desta atividade, pretendemos:
- Compreender a estrutura da molécula do DNA
- Entender o seu papel na regulação das características de um organismo
- Contactar com técnicas laboratoriais que permitem o reconhecimento de um indivíduo através do seu DNA
- Perceber o que realmente acontece numa cena do crime.

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Extração de DNA a partir de sangue (Método de Chelex)

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Extração de DNA a partir de sangue (Método de Chelex)

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1- Utilizar uma zaragatoa para recolher uma amostra de sangue;

2- Cortar a ponta da zaragatoa para um microtubo;
3- Adicionar 1000 μL de água destilada e, de seguida, colocar no agitador durante 20 minutos;
4- Centrifugar a 14 000 rpm por 15 minutos;
5- Recolher, com uma pipeta, o sobrenadante e descartá-lo;
6- Adicionar ao "pellet" (depósito) de 100 μL de Solução de Chelex (5%);
7- Colocar banho térmico a 56 ºC, durante 30 minutos;
8- Após esse tempo colocar em banho a 100 ºC por 10 minutos;
9- Centrifugar a 14 000 rpm por 15 minutos;
10- Recolher o sobrenadante, através do uso de uma pipeta;
11- Armazenar a 4 ºC para preservar o ADN.

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1- Cada grupo possuí um microtubo colorido e um frasco de vidro com DNA de um suspeito;
2- Adicionar 10 μL de amostra de ADN em cada microtubo;
3- Colocar 10 μL da mistura de enzimas(EcoRI/PstI);
4- Pôr os microtubos na estufa a 37ºC, durante 45 minutos;
5- Retirar os microtubos da estufa e proceder à etapa seguinte;

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Eletroforese e observação dos resultados

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Eletroforese e observação dos resultados

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1- No gel de agarose(1%), que se encontra na tina de eletroforese, carregar as amostras com o DNA da cena do crime, do supeito 1, do 2, do 3, do 4 e do 5;
2-fechar a tina de eletroforese e ligar a fonte de alimentação;
3- Programar a fonte para 100V durante 30 minutos;
4- Desligar a fonte de alimentação e proceder à revelação do gel de agarose com solução de Fast Blast DNA Stain(100x);
5- Observar/interpretar os resultados.

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- Na preparação das amostras, são usadas duas enzimas distintas para minimizar a chance de erro. Estas têm a capacidade de reconhecer uma sequência específica de nucleótidos do DNA, fragmentando-a. As enzimas encontram-se, como se sabe, no nosso corpo. Daí, elas foram colocadas na estufa a 37ºC para simular a temperatura corporal humana.

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- Antes da eletroforese, preparou-se uma solução de 1% de agarose e, enquanto que esta solidificava, colocou-se um "pente", de modo a formar-se poços. Estes encontravam-se próximos do polo negativo, contendo os fragmentos de DNA tingidos (corados pelo brometo). Estes, quando recebem energia, migram do polo negativo para o positivo, uma vez que existe repulsão entre os fragmentos de DNA e o polo negativo da máquina. Para além da repulsão, existe uma força de atração entre os fragmentos de DNA e o polo positivo (visto que o DNA apresenta carga negativa, devido ao grupo fosfato). Tendo isto em conta, quanto maior for o fragmento, mais dificuldade apresenta a atravessar o gel, percorrendo, por isso, uma menor distância.

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- Esta atividade permitiu estabelecer a ponte entre a teoria e a prática, pelo que, os objetivos iniciais foram alcançados.