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Il s'agit d'un médicament sous forme d'ampoule, qui contient un mélange de deux acides aminés : acide aspartique, et arginine.
Ces deux principes actifs, vont permettre de lutter contre la fatigue passagère.

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Nous souhaitons étudier la composition de ce médicament ?
Pour cela, nous devons séparé les deux acides aminés = Chromatographie échangeuse d'ions.
Pour ensuite pouvoir réaliser un dosage sur 'acide aminé purifié.

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LES ACIDES AMINES DES MOLECULES A LA STRUCTURE PROCHE

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LES ACIDES AMINES DES MOLECULES A LA STRUCTURE PROCHE

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Difficile de séparer les acides aminés selon leur structure, nous allons les séparer selon leur charge, en utilisant des solutions tampons de pH différents !

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La séparation d’un mélange d’acides aminés, est réalisée par chromatographie échangeuse d’ions, à l’aide d’une résine Amberlite IRC-50, qui possède des possède des groupements carboxyliques (COO-), c’est une résine échangeuse de cations. 

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La séparation d’un mélange d’acides aminés, est réalisée par chromatographie échangeuse d’ions, à l’aide d’une résine Amberlite IRC-50, qui possède des possède des groupements carboxyliques (COO-), c’est une résine échangeuse de cations. 

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Voici la colonne au moment du dépôt de l'échantillon.

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Le filtrat est collecté dans les fractions des tubes 1 à 4, et l'éluat dans les fractions suivantes 5 à 9.

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La séparation est réalisée à l'aide d'une couche de silice. Les acides aminés les plus polaires vont s'adsorbés sur la plaque, alors que les moins polaires seront entraines par le solvant eluant.

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La séparation est réalisée à l'aide d'une couche de silice. Les acides aminés les plus polaires vont s'adsorbés sur la plaque, alors que les moins polaires seront entraines par le solvant eluant.

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On identifiera chaque spot en calculant le Rapport Frontal pour chaque spot par comparaison avec des témoins.

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Calcul du Rapport Frontal pour chaque tâche =
RF = Distance de migration de la Tache/ distance de migration du solvant
pas d'unité et 2 chiffres après la virgule .
Ex :
Rf acide asp = 1.7/5.1 = 0.33

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Purification réussie à partir d'une ampoule de Sargenor

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Purification réussie à partir d'une ampoule de Sargenor

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Les fractions 1 à 4 contiennent l'acide aspartique purifiée
Les fractions 5 à 9 contiennent l'arginine

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Cette séquence nous a permis de découvrir des exemples de méthodes chromatographiques mettant en jeu des supports, des principes de séparation différents..

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Cette séquence nous a permis de découvrir des exemples de méthodes chromatographiques mettant en jeu des supports, des principes de séparation différents..

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A choisir en fonction des objectifs visés ! 

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A choisir en fonction des objectifs visés ! 

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Il s'agit d'un dosage volumétrique direct permettant la neutralisation d'une fonction acide carboxylique de l'acide aspartique par une base forte, ici l'hydroxyde de sodium.
Le point équivalent est déterminé à l'aide d'un suivi pH métrique.
Le tracé de la courbe de titration permet de déterminer graphiquement le Volume équivalent : V (NaoH; eq) nécessaire pour les calculs

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L'utilisation du logiciel Regressi permet de tracer rapidement la courbe de titration

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Détermination de la concentration en quantité de matière de l'acide aspartique 

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Détermination de la concentration en quantité de matière de l'acide aspartique 

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V (NaOH. eq) = 12.61 mL

C (AA; fractions) =( C(NaOH; eta) x V (NaOH; eq)) /  V (AA; fraction)

C(AA;fractions) = 0.2x 0.01261/0.020 = 0.1261 mol.L-1

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Détermination de la concentration en masse de l'acide aspartique dans les fractions 

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Détermination de la concentration en masse de l'acide aspartique dans les fractions 

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Cm (AA; fractions) = C (AA; fraction) x MM AA =
Cm = 0.1261x133.1 = 16.78 g/L fraction

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Les fractions collectées contiennent 16.78 g/L d'acide aspartique.

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Les fractions collectées contiennent 16.78 g/L d'acide aspartique.

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Des calculs supplémentaires sont nécessaires pour aboutir à la teneur en acide aspartique par ampoule 

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Des calculs supplémentaires sont nécessaires pour aboutir à la teneur en acide aspartique par ampoule 

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Nous avons mis  en oeuvre la démarche d'analyse complète d'un médicament permettant de comprendre la différence entre Analyse quantitative et quantitative

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Nous avons mis  en oeuvre la démarche d'analyse complète d'un médicament permettant de comprendre la différence entre Analyse quantitative et quantitative

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L'analyse qualitative a permis de découvrir deux méthodes de fractionnement, de détection et d'identification...par la réalisation d'une chromato échangeuse d'ions , nouvelle méthode et d'une chromato sur couche mince...

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Le suivi pH métrique permet d'aboutir  à la concentration en masse d'acide aspartique 

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Le suivi pH métrique permet d'aboutir  à la concentration en masse d'acide aspartique 

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Nous avons pu réaliser une étude complète selon la démarche suivante : 

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Nous avons pu réaliser une étude complète selon la démarche suivante : 