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estrarre il DNA dal kiwi

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Abbiamo messo 2 cucchiaini di NaCl nel cilindro graduato da 100 ml e abbiamo portato a 80 ml con H₂O distillata. Abbiamo coperto con il Parafilm e abbiamo mescolato girando il cilindro per sciogliere completamente il sale.

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Al termine dei 5 minuti in cui abbiamo lasciato agire l'alcol abbiamo osservato che si erano formati dei filamenti semitrasparenti visibili a occhio nudo lungo tutto lo spazio del liquido. Erano filamenti di DNA che erano stati liberati dalle cellule e si erano agglomerati tanto da poter essere visibili senza l'utilizzo del microscopio

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Siamo riusciti ad estrarre il DNA dalle cellule del kiwi e lo abbiamo osservato agglomerato in lunghi filamenti.

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Il sale permette di staccare il DNA dagli istoni, proteine globulari a cui è avvolto il DNA.

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Cilindro graduato da 100 ml

3 g di NaCl

H₂O distillata

Detersivo per i piatti

Parafilm

Kiwi

Piattino di plastica

Forchetta

Beuta da 300 ml

Bagno termostatico con acqua mantenuta a 60°

Vasca con acqua e ghiaccio

Becher da 500 ml

Velo di carta scottex

Succo di ananas

Cilindro graduato da 10 ml

Provetta di vetro

Colino

Alcol etilico a 0°C

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Abbiamo aggiunto 10 ml di detersivo per i piatti e abbiamo portato a 100 ml con
H₂O distillata. Abbiamo chiuso con il Parafilm e abbiamo mescolato lentamente per non formare bolle.

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Abbiamo aggiunto il detersivo per sciogliere la membrana plasmatica della cellula costituita da un doppio strato di fosfolipidi.

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Abbiamo preso 2/3 di un kiwi e lo abbiamo schiacciato con una forchetta fino ad ottenere una poltiglia liquida e omogenea.

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Abbiamo schiacciato il kiwi per rompere i tessuti e, di conseguenza, liberare le cellule.

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Successivamente abbiamo versato la poltiglia in una beuta da 300 ml, abbiamo aggiunto 100 ml di soluzione di estrazione, abbiamo coperto con il Parafilm e abbiamo mescolato girando la beuta per tre o quattro volte.

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Immersione nell’acqua calda e in quella fredda

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Immersione nell’acqua calda e in quella fredda

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Abbiamo posto la soluzione nell’acqua calda per favorire la reazione dei nucleasi e poi nell’acqua a 0° per bloccarla facendo si che non danneggiasse l’estratto.

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A questo punto abbiamo immerso la beuta nella H₂O a 60 gradi per 15 minuti.

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L’alcool è stato aggiunto freddo per far precipitare il DNA verso la soluzione acquosa infatti essendo a bassa temperatura facendo si che non si unisca alla soluzione acquosa

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Successivamente abbiamo bloccato la reazione immergendo la beuta nella H₂O fredda per 5 minuti mescolandola ogni tanto.

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Abbiamo aggiunto il succo d’ananas alla soluzione perché contiene un enzima specifico chiamato bromelina in grado di demolire gli istoni e quindi liberare il DNA.

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Abbiamo appoggiato nel becher da 500 ml il colino sul quale è stato adagiato un velo di carta Scottex, preventivamente bagnata con H₂O distillata. Abbiamo versato la miscela raffreddata nel colino.

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Dopo aver preparato il succo di ananas spremendolo e filtrandolo, abbiamo messo in un cilindro graduato da 10 ml, un millilitro di succo di ananas e 5 ml di filtrato. abbiamo chiuso con il parafilm e abbiamo mescolato rovesciando il cilindro due o tre volte molto delicatamente.

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Successivamente abbiamo versato in una provetta di vetro e abbiamo lasciato agire per 5 minuti a temperatura ambiente.

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A questo punto abbiamo versato lentamente l'alcol etilico mantenuto a 0° in una quantità pari a quella del liquido della provetta facendolo scorrere sul vetro in modo da non mescolarlo con la fase acquosa. Infine abbiamo lasciato riposare per 5-10 minuti.