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Estos medios se caracterizan por albergar sustancias químicas que son posteriormente rebajadas con agua destilada, se realizan con fil de obtener resultados reproducibles, de igual a estos se les añade un extracto orgánico para generar su crecimiento. (Hernández, 2014)

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Este tipo de medios los podemos encontrar como su nombre lo afirma en forma líquida , también es denominado caldo nutritivo , se caracterizan por tener peptona, extracto de carne y por ultimo agua.
(Santiago, 2015)

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Su elaboración se realiza a partir de los medios líquidos y para darle dureza y estabilidad se debe  agregar un agente gelificante, de igual modo estos se medios se caracterizan por contener gelatina, que es una proteína proveniente de los huesos y agar que esta constituido por azucares provenientes de algas marinas.
(Santiago, 2015)

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Este tipo de medio tiene como base sustancias líquidas, para darle ese efecto solidificante es necesario agregar un elemento sólido solo que se debe usar en menor proporción a la implementada para medios sólidos.
(Santiago, 2015)

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Para que este medio soporte altas temperaturas, deben estar muy bien equipado y enriquecido de vitaminas ademas se caracterizan por contener factores que contribuyen con su crecimiento.
(Orvay, 1993)

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Este tipo de medio se elabora a través de componentes y sustancias naturales ya sean de origen vegetal o animal, por ejemplo: la gelatina que es una proteína animal originaria de los huesos.(Hernández, 2014)

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Lizeth Rascón Castrejón, Luis Diego Reyes Marcial , Hugo Rangel Osorio, Michelle Ramos Franco , Hylary Quistián García. (29 de Septiembre de 2014). Blogspot. Obtenido de Microbiología: http://microbiologia3bequipo5.blogspot.com.co/2014/09/tipos-y-funciones-de-los-medios-de.html

Orvay, F. C. (1993). Temperatura. En F. C. Orvay, Acuicultura marina: fundamentos biológicos y tecnología de la producción (pág. 316). Barcelona: universitat de Barcelona publicacions.

Santiago, B. (15 de Febrero de 2015). Slide Share. Obtenido de Clasificación de los medios de cultivo : https://es.slideshare.net/beatriznedsantiago/clasificacion-de-los-medios-de-cultivo

Prescott, L. M., Harley, J. P., & Klein, D. A. (2004). CAPÍTULO 5. Nutrición microbiana. En Prescott, L. M., Harley, J. P., & Klein, D. A. Microbiología.México, D.F., MX: McGraw-Hill Interamericana. Recuperado dehttp://bibliotecavirtual.unad.edu.co:2077/lib/unadsp/reader.action?ppg=11&docID=10515235&tm=1479773876011.

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Este medio se caracteriza por contribuir con el afloramiento de forma nutricional de un grupo selecto de bacterias por ejemplo: es el caldo selenito que es implementado para el afloramiento de las salmonelas.
(Hernández, 2014)

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Es implementado para sacar a la luz propiedades bioquímicas que que contribuyan con la distinción de especies.(Hernández, 2014)

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Cumplen con  muchos factores para que se de la vida en microorganismos de alta exigencia, el anterior proceso se da gracias a la adicción de productos biológicos  (Hernández, 2014)

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1. Bacterias para el crecimiento vegetal del cultivo del arroz.

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1. Bacterias para el crecimiento vegetal del cultivo del arroz.

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Utilización en Cuba, las bacterias son Azospirillum, Herbaspirillum, Pseudomonas, Burkholderia, Azotobacter y Bacillus.

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Rives, N., & Acebo, Y., & Hernández, A. (2007). BACTERIAS PROMOTORAS DEL CRECIMIENTO VEGETAL EN EL CULTIVO DEL ARROZ (Oryza sativa L.). PERSPECTIVAS DE SU USO EN CUBA. Cultivos Tropicales, 28 (2), 29-38.
Hernández-Rodríguez, Annia, Ruíz-Beltrán, Yeter, Acebo-Guerrero, Yanelis, Miguélez-Sierra, Yulien, & Heydrich-Pérez, Mayra. (2014). Antagonistas microbianos para el manejo de la pudrición negra del fruto en Theobroma cacao L: Estado actual y perspectivas de uso en Cuba. Revista de Protección Vegetal, 29(1), 11-19. Recuperado en 24 de noviembre de 2017, de http://scielo.sld.cu/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1010-27522014000100002&lng=es&tlng=es.
Harry C. Evans. (1993). Uso actual y potencial de los hongos entomopatógenos para el control
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Alberto R. Triviño. (2011). Conceptos y práctica de microbiología general. Universidad Nacional de Colombia. Recuperado de http://www.bdigital.unal.edu.co/4999/1/albertorojastrivino.2011.pdf

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El trichoderma es utilizado para controlar enfermedad ocasionada por P. megakarya en frutos de cacao, obteniendo resultados similares a los obtenidos en la utilización de fungicidas, los hongos utilizados son Trichoderma asperellum Samuels, Trichoderma martiale Samuels y Trichoderma viride Pers.

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Utilizados para el control biológico artrópodos plagas: Aschersonia spp. contra la mosca blanca de los cítricos en Estados Unidos y el
Caribe; Verticillium lecanii (Zimm.) Viégas contra escamas del café en el lejano Este; B. bassiana contra
el barrenador del maíz en los Estados Unidos; M.- anisopliae contra la salivita de la caña de azúcar en Trinidad; y Entomophaga grylli Fress contra la langosta
en Sur Africa.
(Revista Palmas. Volumen 14 No. 1.)

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-Técnica de agotamiento: Por medio de este realizamos aislamiento de colonias esto lo logramos a partir de un inóculo.
-Técnica de siembra en cadrantes: Acá el objetivo es diluir el inóculo mientras que se hacen estrías en la superficie del agar.
-Técnica de siembra pasiva: Es muy frecuente utilizarlo cuando se quiere obtener un gran número de microorganismos en la superficie del agar.
-Técnica de punción: Se utiliza para observar el crecimiento de hongos y así lograr establecer su morfología.

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Técnica de siembra en medios contenidos en tubos

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Técnica de siembra en medios contenidos en tubos

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-Siembra en tubos por estría simple: Es realizada en un tubo que tenga medio solido inclinado y se desliza el asa por la superficie expuesta del agar para que se marquen surcos o estrías.
-Siembra mixta en tubos: Realizada en medios bisel, haciendo la picadura con asa recta, luego se hace la siembra en estría en la superficie del agar.
-Siembra en tubos por picadura: Se lleva a cabo introduciendo el asa cargada con el microorganismo al medio de cultivo por el centro de superficie llegando así al fondo del tubo.
-Siembra en tubo en medio líquido: Se utiliza con el fin de transferir material de un medio líquido o sólido a otro líquido.

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Un medio de cultivo es un sustrato o una solución de nutrientes que permite el desarrollo de microorganismos.
En las condiciones de laboratorio para realizar un cultivo se debe sembrar sobre el medio de cultivo elegido las muestras en las que los microorganismos van a crecer y multiplicarse para dar colonias. Los microorganismos son los seres mas abundantes de la tierra, pueden vivir en condiciones extremas de pH, temperatura y tensión de oxigeno, colonizando una amplia diversidad de nichos ecológicos.

Entre los requerimientos mas importantes para su desarrollo están el carbono, el oxigeno, nitrógeno, dióxido de carbono e hidrogeno. Muchas bacterias sin embargo necesitan del aporte extra de factores de crecimiento específicos en forma de suero, sangre y extracto de levadura entre otros.

LOS MEDIOS DE CULTIVO EN MICROBIOLOGIA
Uno de los sistemas mas importantes para la identificación de microorganismos es observar su crecimiento en sustancias alimenticias artificiales preparadas en el laboratorio. El material alimenticio en el que crecen los microorganismos es el Medio de Cultivo y el crecimiento de los microorganismos es el Cultivo. Se han preparado mas de 10.000 medios de cultivo diferentes. Para que las bacterias crezcan adecuadamente en un medio de cultivo artificial debe reunir una serie de condiciones como son: temperatura, grado de humedad y presión de oxígeno adecuado, así como un grado correcto de acidez o alcalinidad. Un medio de cultivo debe contener los nutrientes y factores de crecimiento necesarios y debe estar exento de todo microorganismo contaminante. La mayoría de las bacterias patógenas requieren nutrientes complejos similares en composición a los líquidos orgánicos del cuerpo humano. Por eso, la base de muchos medios de cultivo es una infusión de extractos de carne y Peptona a la que se añadirán otros ingredientes. El agar es un elemento solidificante muy empleado para la preparación de medios de cultivo. Se licua completamente a la temperatura del agua hirviendo y se solidifica al enfriarse a 40 grados. Con mínimas excepciones no tiene efecto sobre el crecimiento de las bacterias y no es atacado por aquellas que crecen en el. La Gelatina es otro agente solidificante pero se emplea mucho menos ya que bastantes bacterias provocan su licuación. En los diferentes medios de cultivo se encuentran numerosos materiales de enriquecimiento como hidratos de carbono, suero, sangre completa, bilis, etc. Los hidratos de Carbono se adicionan por dos motivos fundamentales: para incrementar el valor nutritivo del medio y para detectar reacciones de fermentación de los microorganismos que ayuden a identificarlos. El suero y la sangre completa se añaden para promover el crecimiento de los microorganismos menos resistentes. También se añaden colorantes que actúan como indicadores para detectar, por ejemplo, la formación de Ácido o como inhibidores del crecimiento de unas bacterias y no de otras (el Rojo Fenol se usa como indicador ya que es rojo en pH básico y amarillo en pH acido. La Violeta de Genciana se usa como inhibidor ya que impide el crecimiento de la mayoría de las bacterias Gram-positivas).
CONDICIONES GENERALES PARA EL CULTIVO DE MICROORGANISMOS
El desarrollo adecuado de los microorganismos en un medio de cultivo se ve afectado por una serie de factores de gran importancia y que, en algunos casos, son ajenos por completo al propio medio.

1- DISPONIBILIDAD DE NUTRIENTES ADECUADOS
Un medio de cultivo adecuado para la investigación microbiológica ha de contener, como mínimo, carbono, nitrógeno, azufre, fosforo y sales inorgánicas. En muchos casos serán necesarias ciertas vitaminas y otras sustancias inductoras del crecimiento. Siempre han de estar presentes las sustancias adecuadas para ejercer de donantes o captadores de electrones para las reacciones químicas que tengan lugar. Todas estas sustancias se suministraban originalmente en forma de infusiones de carne, extractos de carne o extractos de levadura. Sin embargo, la preparación de estas sustancias para su aplicación a los medios de cultivo provocaba la perdida de los factores nutritivos lábiles. Actualmente, la forma mas extendida de aportar estas sustancias a los medios es utilizar peptona que, además, representa una fuente fácilmente asequible de nitrógeno y carbón ya que la mayoría de los microorganismos, que no suelen utilizar directamente las proteínas naturales, tienen capacidad de atacar los aminoácidos y otros compuestos mas simples de nitrógeno presentes en la peptona.

2- CONSISTENCIA ADECUADA DEL MEDIO
Partiendo de un medio liquido podemos modificar su consistencia añadiendo productos como albumina, gelatina o agar, con lo que obtendríamos medios en estado semisólido o solido. Los medios solidificados con gelatina tienen el gran inconveniente de que muchos microorganismos no se desarrollan adecuadamente a temperaturas inferiores al punto de fusión de este solidificante y de que otros tienen la capacidad de licuarla.

3- PRESENCIA (O AUSENCIA) DE OXIGENO Y OTROS GASES
Gran cantidad de bacterias pueden crecer en una atmosfera con tensión de oxigeno normal. Algunas pueden obtener el oxigeno directamente de variados sustratos. Pero los microorganismos anaerobios estrictos solo se desarrollaran adecuadamente en una atmosfera sin oxigeno ambiental. En un punto intermedio, los microorganismos microaerófilos crecen mejor en condiciones atmosféricas parcialmente anaerobias (tensión de oxigeno muy reducida), mientras los anaerobios facultativos tienen un metabolismo capaz de adaptarse a cualquiera de las citadas condiciones.

4- CONDICIONES ADECUADAS DE HUMEDAD
Un nivel mínimo de humedad, tanto en el medio como en la atmosfera, es imprescindible para un buen desarrollo de las células vegetativas microbianas en los cultivos. Hay que prever el mantenimiento de estas condiciones mínimas en las estufas de cultivo a 35-37ÂºC proporcionando una fuente adecuada de agua que mantenga la humedad necesaria para el crecimiento de los cultivos y evitar así que se deseque el medio.

5- LUZ AMBIENTAL
La mayoría de los microorganismos crecen mucho mejor en la oscuridad que en presencia de luz solar. Hay excepciones evidentes como sería el caso de los microorganismos fotosinteticos.

6- PH
La concentración de iones hidrogeno es muy importante para el crecimiento de los microorganismos. La mayoría de ellos se desarrollan mejor en medios con un pH neutro, aunque los hay que requieren medios mas o menos Ácidos. No se debe olvidar que la presencia de Ácidos o bases en cantidades que no impiden el crecimiento bacteriano pueden sin embargo inhibirlo o incluso alterar sus procesos metabólicos normales.

7- TEMPERATURA
Los microorganismos mesófilos crecen de forma optima a temperaturas entre 15 y 43ÂºC. Otros como los psicrófilos crecen a 0ÂºC y los temófilos a 80ÂºC o incluso a temperaturas superiores (hipertemófilos). En líneas generales, los patógenos humanos crecen en rangos de temperatura mucho mas cortos, alrededor de 37ÂºC, y los saprofitos tienen rangos mas amplios.

8- ESTERILIDAD DEL MEDIO
Todos los medios de cultivo han de estar perfectamente estériles para evitar la aparición de formas de vida que puedan alterar, enmascarar o incluso impedir el crecimiento microbiano normal del o de los especímenes inoculados en dichos medios. El sistema clásico para esterilizar los medios de cultivo es el autoclave (que utiliza vapor de agua a presión como agente esterilizante)

LA EVOLUCION DE LOS MEDIOS DE CULTIVO
Podemos decir que la microbiología empieza su verdadero desarrollo como ciencia en el momento en que se descubre el microscopio y comienza la observación de los primeros microorganismos, pero es indudable que la puesta a punto de los medios de cultivo y la utilización del agar como solidificante, marcan dos importantes puntos de inflexión en su evolución. La primera noticia de la utilización de medios de cultivo nos llega del micólogo Brefeld, que consiguió aislar y cultivar esporas de hongos en medios solidos realizados a base de gelatina. Sin embargo este sistema no era adecuado para las bacterias (por su menor tamaño) y no fue hasta el año 1878 cuando Lister popularizo un método enfocado al cultivo puro basado en diluciones seriadas en un medio liquido. Koch realizo sus investigaciones utilizando en un primer momento rodajas de patata como soporte nutritivo solido, pero no tardo en recurrir al caldo de carne liquido, diseñado por Loeffler, al que, en 1881, añadió gelatina, logrando un medio solido transparente ideal para la observación de la morfología macroscópica de las colonias microbianas. En el año 1882 tiene lugar uno de los grandes avances de la microbiología en relación con los medios de cultivo: el medico alemán Walter Hesse introduce el agar-agar (polisacárido extraído de algas rojas) como solidificante. En 1887 un ayudante de Koch llamado Petri, comienza a utilizar placas de cristal planas, que se llaman desde entonces placas de Petri, para sustituir a las clásicas bandejas de vidrio cubiertas con campanas que se usaban hasta entonces. Beijerinck y Winogradsky, que desde de 1888 realizaron sus investigaciones sobre las bacterias quimioautótrofas (utilización de nitrógeno y azufre sobre todo) tuvieron gran importancia en el desarrollo de los medios selectivos y de enriquecimiento. Diseñaron este tipo de medios de tal forma que su especial composición química favorecía el crecimiento de ciertos tipos de microorganismos que, en función de sus procesos metabólicos, eran los únicos capaces de utilizar para su desarrollo ciertos nutrientes del medio. En 1892 Würtz impulso el uso de los medios diferenciales, incorporando indicadores de pH a la composición de ciertos medios con lo cual se podía observar la producción de ácidos en la fermentación en ciertos microorganismos.

BIBLIOGRAFIA

FACULTAD DE AGROINDUSTRIA. ((n.d.) de (n.d.) de 2006). Trabajo Práctico N.º 4 Medios de Cultivo . Obtenido de Trabajo Práctico N.º 4 Medios de Cultivo : http://www.biologia.edu.ar/microgeneral/tp4.pdf

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Uso de microorganismos con el potencial como biofertilizantes en cultivos

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Uso de microorganismos con el potencial como biofertilizantes en cultivos

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Para iniciar el proceso de evaluación y posterior selección de microorganismos con potencial como biofertilizantes, es necesario hacer una fase de multiplicación que en el caso de microorganismos facultativos como bacterias fijadores de nitrógeno y bacterias fosfato solubilizadoras, su multiplicación puede hacerse en condiciones de in vitro, es decir, sobre medios de cultivos controlados en el laboratorio; mientras que la multiplicación de hongos tipo micorrizas, por tratarse de simbiontes obligados, requiere de la planta, es decir, en condiciones de in vivo, donde el hongo utiliza los fotosintatos de carbono provenientes de la planta. Este proceso de multiplicación del inoculo se realiza en plantas de producción sobre camas de multiplicación

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Esta técnica se aplica cuando se conoce de antemano que el microorganismo de interés se encuentra en mayor cantidad que los demás. Para llevarla a cabo, se preparan varias diluciones de la muestra y se incuban en el medio de cultivo adecuado para que crezca este microorganismo; así, se logra que en alguna de las diluciones solo él aparezca. Es necesario reconfirmar su presencia, utilizando el método de siembra en placa de Petri por rayado.

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Se realiza en un tubo con medio solido inclinado (en bisel o pico de flauta), y deslizando el asa sobre la superficie expuesta del agar de manera que se marque con movimiento en zigzag o surcos en la superficie. El proceso se inicia en el fondo y se va avanzando hacia arriba por el área inclinada. Luego incubar en estufa durante 28-48 horas a temperatura más adecuada a 37ªC.

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FACTORES SELECTIVOS QUE ALTERAN LAS CONDICIONES DEL MEDIO TENEMOS: 

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FACTORES SELECTIVOS QUE ALTERAN LAS CONDICIONES DEL MEDIO TENEMOS: 

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Cambio de pH: por ejemplo agregando Ácido acético para favorecer el crecimiento de Lactobacillus (pH final: 5,4 que es hostil para la mayoría de las especies que crecen entre 6,5 y 7,2). Los hongos crecen entre pH 4 y 6 y S. faecalis a pH 9,6.

Cambio de temperatura: la mayoría de las bacterias crece óptimamente entre 20º C y 40º C. Los cultivos típicos de S. Faecalis requieren 60º C de temperatura y los de Listeria son capaces de desarrollarse y crecer a 4º C.

Alteraciones osmóticas: se acrecientan las propiedades osmóticas un medio con el  agregado de cloruro de sodio. Estos medios intensifican la selección de bacterias halófilas como Staphylococcus spp. (7,5%).

Ajuste en la tensión de oxigeno: es importante en la selección de aerobios y anaerobios.

Ajuste en la tensión de anhídrido carbónico: muchos patógenos importantes pueden ser cultivados a menos que se eleve la tensión más allá de la atmosférico.

Entre los factores que inhiben el crecimiento de bacterias indeseables tenemos:

Antisépticos: sustancias antibacterianas inespecíficas que pueden actuar como inhibidores. Por ejemplo: el medio de cultivo comercial S - S (Salmonella - Shigella) que contiene verde brillante (inhibe las bacterias grampositivas) y sales biliares (que inhiben un gran número de gramnegativas menos enterobacterias). Otro ejemplo es el medio de Mc Conkey que contiene cristal violeta (inhibe las grampositivas pero no las enterobacterias)

Antibióticos: sustancias antibacterianas especificas que impiden el crecimiento de aquellos microorganismos que no nos interesa que crezcan en ese medio. Un ejemplo es el medio de Thayer - Martin con VCN (vancomicina, colistina y nistatina) que se utiliza para el aislamiento de gonococos. La penicilina en una concentración de 5,50 unidades/ ml inhibe la mayoría de las grampositivas. Otro ejemplo es el medio de Sabourand - cloranfenicol para el aislamiento de Cándida albicans.

BIBLIOGRAFIA

FACULTAD DE AGROINDUSTRIA. ((n.d.) de (n.d.) de 2006). Trabajo Práctico N.º 4 Medios de Cultivo . Obtenido de Trabajo Práctico N.º 4 Medios de Cultivo : http://www.biologia.edu.ar/microgeneral/tp4.pdf