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Culturas Vivas: Enviar as células em frascos completamente preenchidos com meio fresco e tamponado, vedados para evitar vazamento e mantidos a uma temperatura estável.

Amostras Congeladas: Utilizar caixas isoladas com gelo seco ou transportadores de nitrogênio líquido (ex: Dry Shippers) para longas distâncias, garantindo que a temperatura seja mantida até a chegada.

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Monitoramento Diário: Observar a morfologia celular e a cor do meio (mudanças de pH) diariamente para sinais de contaminação.

Redução do Uso de Antibióticos: Antibióticos devem ser usados temporariamente para evitar contaminações iniciais, mas removidos o mais cedo possível para não gerar resistência.

Controle de Micoplasma: Testar as culturas regularmente para micoplasma, uma contaminação comum que pode ser difícil de detectar sem testes específicos (ex. PCR).

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Técnicas de Perfil Genético: Utilização de STR (Short Tandem Repeat) para confirmar a identidade das células e evitar a contaminação cruzada com outras linhagens.

Caracterização Morfológica: Observação regular da morfologia das células através de microscopia, registrando mudanças que possam indicar instabilidade ou contaminação.

Monitoramento de Proliferação e Densidade: Registrar o tempo de duplicação e a densidade celular para garantir que as células estejam em condições saudáveis e consistentes com o perfil esperado da linhagem.

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WEBSITES E FONTES PARA COLEÇÕES E AQUISIÇÃO DE MEIOS

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WEBSITES E FONTES PARA COLEÇÕES E AQUISIÇÃO DE MEIOS

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Bancos de células e coleções de cultura:

1. American Type Culture Collection (ATCC) - (http://www.atcc.org)

2. CellBank Australia - (http://www.cellbankaustralia.com)

3. Coriell Cell Repository - (http://ccr.coriell.org)

4. Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen (DSMZ) - (http://www.dsmz.de)

5. European Collection of Animal Cell Cultures (ECACC) - (http://www.phe-culturecollections.org.uk)

6. Health Science Research Resources Bank (HSRRB), Japão - (http://www.jhsf.or.jp/English/index_e.html)

7. UK Stem Cell Bank (UKSCB) - (http://www.ukstemcellbank.org.uk)

Fornecedores de meios livres de soro e substitutos:

1. AthenaES - (http://www.athenaes.com)

2. Lonza (Clonetics, BioWhittaker) - (http://www.lonza.com)

3. Sigma (JRH Biosciences) - (http://www.sigmaaldrich.com)

4. Stem Cell Technologies - (http://www.stemcell.com)

5. PromoCell - (http://www.promocell.com)

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Armazenamento em Nitrogênio Líquido: A taxa de congelamento controlada de 1 °C/min é ideal para minimizar danos às células.

Uso de Criopreservativos: Adição de 10% de DMSO ao meio de cultura para proteger as células durante o congelamento e evitar a formação de cristais de gelo, que podem romper as membranas celulares.

Estoque e Registro: Criar um banco mestre e um banco de distribuição, cada um com amostras numeradas e catalogadas para controle de qualidade e uso futuro.

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Os micoplasmas são as menores bactérias autorreplicáveis, e estão entre os contaminantes microbianos mais comuns e graves em pesquisas e indústrias que utilizam culturas celulares.

Relevância: Uma vez que, a contaminação de culturas celulares com micoplasma não possui sinais visíveis, possui potencial de desencadear resultados experimentais enganosos ou incorretos.

Dificuldades: Os micoplasmas possuem resistência a muitos antibióticos comuns, tem capacidade de crescer em altos títulos nas culturas sem turvar o meio, dificultando a detecção visual, além de conseguirem atravessar filtros bacteriófagos padrão.

Principais espécies: M. arginini, M. fermentans, M. hominis, M.hyorhinis, M. orale e Acholeplasma laidlawii, gerando 95% das contaminações

Principais alvos: As culturas celulares primárias possuem baixa incidência de contaminação (1-5%), enquanto linhas celulares contínuas apresentam maiores taxas (15-35%)

Prevenção: Inclui boas práticas de assepsia, quarentena das linhagens celulares não testadas e um programa contínuo de testes, uma vez que, sua contaminação não possui sinais visíveis, podendo

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Cabines de fluxo: A maioria das culturas celulares são feitas em cabines de segurança do tipo II, uma vez que promove proteção ao operador e ao material que está senso manipulado, evitando possíveis contaminações. É sempre muito importante limpar o fluxo antes e depois de utilizá-lo com álcool e luz UV para esterilização.

Incubadoras: As incubadoras são muito usadas na cultura de células para criar um ambiente de temperatura agradável, em condições específicas para que as células se reproduzam da melhor maneira possível. A grande maioria das incubadoras modernas segue o mesmo padrão: temperatura de 36°C que contém uma atmosfera de 5% de gás carbônico. É importante limpar com certa frequência as incubadoras, retirando todas as suas células e prateleiras e passando pano com álcool.

Microscópios: usado para visualizar o progresso de desenvolvimento das células em cultura, observar surgimento de algo (como por exemplo contaminação) no recipiente em que a célula foi semeada e também a contagem de células. Limpar o microscópio e suas lentes regularmente para evitar perda de qualidade na observação das células em questão

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Beatriz Beltrame RA: 22018087

Isabella Lacerda RA:

Isadora Lang RA: 22003592

Gabriella Tonolli RA: 22007988

Laura Pinheiro RA: 22004591

Sofia Gomez RA: 22004490

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1. Não utilizar dispositivos de fluxo laminar fora da cabine de segurança microbiológica (MSC) para cultura celular. Essas cabines são projetadas para conter possíveis patógenos e proteger tanto o operador quanto o ambiente de trabalho.

2. Evitar cabines de fluxo laminar horizontal, nas quais o fluxo de ar é direcionado para o operador.

3. Utilizar apenas uma linha celular por vez dentro da cabine de segurança biológica, para evitar contaminação cruzada, além disso, após o uso, a cabine deve ser desinfetada.

4. ⁠Certificar-se de que a cabine está funcionando adequadamente e dentro dos limites prescritos, mantendo filtros e ventilação em boas condições.

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INFORMAÇÕES NECESSÁRIAS PARA CÉLULAS PROVENIENTES DE PACIENTES

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INFORMAÇÕES NECESSÁRIAS PARA CÉLULAS PROVENIENTES DE PACIENTES

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Para garantir aprovação ética, consentimento e validade das pesquisas realizadas com células provenientes de pacientes, torna-se necessário um conjunto de dados e procedimentos, como:

Origem e Desenvolvimento de Linhagens Celulares: Derivar novas linhagens celulares de tecidos humanos é um trabalho minuncioso que exige diversos recursos, sobretudo, validação para garantir autenticidade, e garantir que estas estão livres de contaminações, por meio da aplicação de diversas técnicas para confirmar a origem da linhagem celular, além disso, amostras de tecido ou sangue devem ser preservadas para comparação futura e confirmação histopatológica;

Dados Clínicos e Informações: Deve-se registrar informações do doador (idade, sexo, número hospitalares, origem e tipo de tecido, estágio da doença e histórico clínico), um consentimento informado e renúncia de direitos comerciais pelo doadora, além dos dados de identificação e proteção de dados. Recomenda-se, também, a caracterização completa das novas linhagens celulares, com registros detalhados das manipulações da cultura