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Es fundamental para los ensayos analíticos.Permite que los reactivos formen complejos Ag-Ac bajo condiciones controladas(tiempo, temperatura,reactivo).Estás condiciones varían dependiendo del ensayo y el tipo de antígeno que se analice.

-Importancia de la temperatura en la incubación

La unión entre antigenos-anticuerpos (Ag-Ac) de facilita con mayor temperatura.

Los complejos Ag-Ac se separan más rápidamente con temperaturas altas.

Las temperaturas bajas producen resultados más precisos y reproducibles.

A temperatura ambiente,se obtienen resultados con sensibilidad elevada.

La temperatura de incubadora se selecciona según las características del ensayo(sensibilidad,precisión,etc).

-Importancia del tiempo de incubación:

Varía según el ensayo y la temperatura elegida.

En general,las incubaciones a bajas temperaturas requieren más tiempo.

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Una vez terminado un inmunoensayo nos quedaremos con dos fracciones (Fracción unida y Fracción libre)que tendremos que separar para obtener unos resultados válidos,a excepción de los homogéneos,en los que su comportamiento será igual por lo que no será necesario separarlos.

Las fracciones provienen de la parte que se ha quedado sin reaccionar de la sustancia problemas y el reactivo.Se diferencian entre si como hemos mencionado anteriormente como fracciones libre (aquellas que no están unidas a proteinas) y unidas.

Existen muchos métodos para separar las fracciones,los cuales dependerán del tipo de ensayo y tendrán que cumplir unos requisitos:

Tendrá que conseguir una completa separación de la fracción unida de la libre.

No se puede influenciar por otras sustancias presentes en la reacción.

Reproducible,sencillo,barato y rápido.

Que no interfiera en la reacción Ag-Ac.

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Se describe el método de adsorción del antígeno libre, que se utiliza para separar las fracciones libre (F) y unida (B) en ensayos como el RIA o IRMA.

Absorción del antígeno libre:Fenómeno en el que un material insoluble retiene sustancias o moléculas en su superficie.Se retiene superficialmente en un material insoluble.Su proceso sería, una vez realizada la adsorción, se centrifuga la muestra.

El antígeno libre (F) queda en el sedimento, mientras que la fracción unida (B) permanece en el sobrenadante.

Este método asegura la separación clara de ambas fracciones para su cuantificación y medición individual.

La precipitación no específica de los complejos antígeno-anticuerpo (Ag-Ac) es un fenómeno donde los complejos formados entre antígenos y anticuerpos, así como otros componentes proteicos de la muestra, se separan del medio líquido mediante la formación de un precipitado. Este proceso puede ser utilizado como una técnica para diferenciar entre antígenos libres y aquellos unidos a anticuerpos.

El método del doble anticuerpo utiliza un segundo anticuerpo (Ac2) específico contra Ac1, formando un complejo insoluble (Ag- o Ag*-Ac1-Ac2) que precipita. Tras centrifugar y decantar, la fracción libre queda en el sobrenadante y la unida en el sedimento. Es el método más común en el RIA.

El método de separación con proteína A utiliza una proteína bacteriana, como alternativa al doble anticuerpo. También se pueden separar fracciones mediante electroforesis, filtrado en gel o cromatografía, según las características del ensayo.

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Los materiales que vamos a usar para su separación son :

Probeta:Tubo transparente con una base que se encarga de medir el volumen de un líquido o un solido.

Tubo de ensayo:Parecido a la probeta pero sin base y más pequeño ,en el se vierten líquidos, soluciones o muestras a analizar y con las que se va a experimentar.

Bureta: Instrumento alargado que determina el volumen de un líquido o una solución y que cuenta con una llave de paso para regular el paso del líquido.

Pipeta:Permite medir el volumen de una sustancia que podemos verter de manera controlada por uno de sus extremos,determinado con facilidad la cantidad de sustancia que ha salido de ella.

Matraz:Es parecido a un tubo de ensayo pero de mayor tamaño y con extremo cerrado ensanchado que sirve para contener sustancias mezclarlas o destinarlas.

Centrifugadora:Equipo que sirve para separar componentes de una muestra biológica mediante fuerza centrífuga .

Tubo de decantación:Sirve para separar dos líquidos con diferentes solubilidad.

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-Técnicas de Radiofarmacia, 2021, Tema 38 Técnicas de Radioinmunoanálisis, Formaciontss,https://formaciontss.es/wp-content/uploads/2021/03/Tema-38.-El-Radioinmunoanalisis.pdf

-Consuelo Rodríguez Palomares y Gregorio Tomás Obrador Vera, s.f, Apéndice 2 : Farmacocinética Conceptos generales, Access Medicina, (definicion frsccion libre) https://accessmedicina.mhmedical.com/con

tent.aspx?bookid=1510§ionid=98017078

-Óscar Castillero Mimenza, 2018, Material de laboratorio : 25 objetos e instrumentos imprescindibles, Psicólogia y Mente, https://psicologiaymente.com/miscelanea/material-de-laboratorio

-S.a, 2023, Material de laboratorio: Herramientas esenciales para la investigación científica, Innovación en formación profesional (IFP), https://www.ifp.es/blog/material-laboratorio

-PDF MEDAC TEMA 9 TECNICAS DE RADIOFARMACIA, EL PROCEDIMIENTO ANALÍTICO Y LOS SISTEMAS DE SEPARACIÓN. CONTADORES DE POZO, IMAGEN PARA EL DIAGNÓSTICO Y MEDICINA NUCLEAR https://medac.instructure.com/courses/66709/files/11285546?module_item_id=10662726

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Los controles de calidad en el radioinmunoensayo (RIA) o el inmunorradiométrico (IRMA) son esenciales para asegurar resultados correctos y confiables, evitando falsos positivos o negativos. Estos controles buscan detectar errores que pueden surgir durante el proceso analítico, tanto humanos como técnicos.

Tipos de controles:

- Controles de calidad externos:

Abarcan el proceso de recolección, tratamiento y almacenamiento de las muestras antes del análisis.

Alteraciones en este manejo pueden llevar a resultados incorrectos, incluso si el ensayo se realiza correctamente.

-Errores comunes a evitar:

Errores humanos: Confusión de reactivos, manipulación incorrecta o mal almacenamiento de muestras.

Errores técnicos: Fallos en los equipos, los cuales se previenen con controles periódicos y verificaciones de su correcto funcionamiento.

-Controles de calidad internos:

Garantiza la validez de los resultados al compararlos con una curva patrón.

Aspectos clave:

Exactitud: Evalúa desviaciones sistemáticas respecto a la curva patrón debido a errores sistemáticos. Si ocurre, es necesario repetir el ensayo.

Sensibilidad: Comprueba la mínima cantidad detectable del antígeno o la concentración más baja que puede ser medida.