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Los filtros esterilizantes de medios de laboratorio se utilizan para eliminar la contaminación por partículas, esterilizar los reactivos líquidos y clarificar disoluciones de reactivos, tampones y medios de laboratorio.
¿Qué es un filtro esteril?

Los filtros estériles eliminan los microorganismos del aire comprimido y se usan en procesos y sistemas que requieren la más alta calidad de aire. Los filtros esterilizados están hechos de materiales que permiten la esterilización con vapor a alta temperatura.

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3.2.3 Pipetas y micropipetas

Son un instrumento de laboratorio empleado para absorber y transferir pequeños volúmenes de líquidos y permitir su manejo en las distintas técnicas científicas.
Se le denomina como micropipetas a las pipetas diseñadas para sustraer cantidades de liquido mas pequeñas, pero el mecanismo es el mismo. Las pipetas y micropipetas usan una punta de pipeta desechable para aspirar líquido. Tenga en cuenta que la punta es la única parte de la pipeta que hace contacto con la solución.

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3.2 Material necesario para el desarrollo de los cultivos celulares

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3.2 Material necesario para el desarrollo de los cultivos celulares

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3.2.1 Agua destilada, bidestilada, desionizada y Agua Mili-Q.

Se ven expuestas a diferentes procesos de tratamiento que hacen que presenten otro tipo de características y propiedades, y que de esa manera puedan emplearse en diferentes productos o equipos médicos.

Agua destilada.
Se encuentra libre de microorganismos y sustancias contaminantes. Además, es incolora, insípida e inodora. Esta se obtiene de forma artificial por medio de una destiladora, que se encarga de producir la evaporación del agua natural para luego enfriar el vapor y que sea convertido en agua totalmente pura.
Es considerada por poseer una baja conductividad y bajo nivel de sólidos.
Es la más utilizada en toda la industria, como esterilizante, mezcla, materia prima y dilución.

Agua bidestilada.
Es aquella que se somete a un doble proceso de destilación, esto permite que contenga un mayor nivel de pureza.

Posee diferentes características:

Posee un alto nivel de pureza

Tiene una baja conductividad eléctrica

Está libre de calcio, magnesio, cloruros y otros componentes

Mantiene un contenido nulo de dióxido de carbono

Su constante dieléctrica es alta

No existe rastro de materia oxidable, ácido carbónico, amonio, metales o sales de amonio.

Agua desionizada.
Es agua a la que se le han eliminado los iones.
En la desionización, el agua se empuja a través de un tanque o cartucho que está revestido con perlas de resina cargadas positiva y negativamente. Las perlas atraen iones con la carga opuesta, esencialmente sacándolos del agua. El agua corre a través del sistema y los iones se quedan atrás. Este proceso se llama intercambio iónico.

En particular, la desionización solo elimina iones. Los contaminantes no cargados y los sólidos en suspensión, incluidos virus y bacterias, pueden permanecer en el agua desionizada.
El agua desionizada es ideal para aplicaciones que requieren una química precisa, ya que la eliminación de todos los iones (excepto H2O) la hace químicamente pura.

Agua Mili-Q.
Agua ultra pura, con grado de laboratorio que ha sido filtrada y purificada por ósmosis inversa, cuyo nombre se debe al tratamiento comercial patentado.

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3.1.6 Autoclave

En el laboratorio la esterilización es un proceso que contribuye a que nuestros análisis  además de estar libres de suciedad, ayuden a eliminar todas las formas de vida microbiana como, bacterias, virus, hongos, parásitos. Este método nos asegura que los productos, materiales, ropa,  superficie, entre otros sean seguros evitando la contaminación.

Se utiliza vapor de agua a 121ºC durante 15' o 20'. Esta temperatura se logra si se obtiene una presión de una atmósfera relativa (dos atmósferas absolutas), ya que el aumento de la presión provoca aumentos proporcionales en el punto de ebullición del agua. Es el mecanismo de destrucción microbiana más efectivo, y bien utilizado asegura esterilización. El equipo que se utiliza es el autoclave, del cual existen distintos tipos, como ser:

1. Vertical de manejo manual.
2. Que opera por gravedad.
3. De esterilización rápida.

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3.1.5 Baño María

Un baño de agua ajustado a 37 °C se encuentra comúnmente en los laboratorios de cultivo celular para precalentar el medio antes de usarlo, descongelar células y reactivos congelados.

¿Cómo funciona?
El baño María de laboratorio se emplea para transferir calor de manera indirecta, mediante la convicción térmica del aparato hasta la sustancia dentro de él.

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3.2.2 Recipientes de cultivo, cajas de cultivo

Las placas de cultivo celular son recipientes poco profundos desechables o reutilizables diseñados específicamente para apoyar el crecimiento y la propagación de células en cultivo. Las placas con superficies pretratadas permiten la adhesión de células dependientes del anclaje, mientras que las placas sin tratar apoyan el cultivo de células en suspensión. Están disponibles en varios tamaños en formatos de uno o varios pocillos, y pueden ser redondas o rectangulares.

Las placas de cultivo celular suelen estar fabricadas de vidrio borosilicatado o plásticos transparentes (normalmente poliestireno o policarbonato), que permiten la observación microscópica sin distorsiones. Se suelen suministrar con tapas que proporcionan un intercambio de gas uniforme y ofrecen protección contra el entorno.

La superficie del frasco es plana y libre de estrías para maximizar el área de crecimiento utilizable. El innovador diseño de cuello en ángulo ofrece un buen acceso para la pipeta y el raspador. Ambos lados del matraz tienen graduación grabada. Integridad estricta probada. Se presentan envasados en packs de 10 unidades.

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3.1.2 Incubadora CO2

Una incubadora es un dispositivo que sirve para mantener y hacer crecer cultivos microbiológicos o cultivos celulares. La incubadora mantiene la temperatura, la humedad y otras condiciones en grado óptimo, tales como el contenido de dióxido de carbono (CO2) y de oxígeno en su atmósfera interior.

Aunque los cultivos celulares pueden ser incubados en frascos sellados en una incubadora seca o en una habitación caliente, algunos recipientes, por ejemplo, las placas de Petri o las placas de pocillos múltiples, requieren de un ambiente controlado con una humedad alta y una presión parcial de CO2 elevada.

Si la incubadora no está totalmente llena de placas, incluir un recipiente abierto con agua permite aumentar la humedad dentro de la cámara.

Un incubador de este tipo dispone de:

Dispositivos de control de temperatura, con termostato de seguridad.

Dispositivo de inyección de una mezcla de aire y CO2, en la proporción deseada, entre el 4 y el 7 %, controlado mediante un dispositivo IRGA ("infra-red gas analyzer").

Dispositivo de control de la humedad ambiente. La mejor forma consiste en inyectar agua estéril y filtrada.

Dispositivo de recirculación de aire con filtros HEPA intercalados

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3.1.3 Microscopio utilizado en esta área.

El microscopio invertido sigue el mismo principio de funcionamiento que el microscopio óptico convencional pero con la peculiaridad que está montado de forma totalmente opuesta. En un microscopio convencional la muestra se ilumina desde abajo y se observa con un objetivo desde la parte superior a la platina. En los microscopios invertidos, en cambio, la luz proviene desde arriba la platina y el objetivo se encuentra debajo de ella.

¿Cuáles son las ventajas? La ventaja principal de los microscopios invertidos es que permiten observar las muestras situadas en el fondo de un recipiente. Esto es muy útil para mantener las muestras hidratadas y permite hacer observaciones que no son posibles con los microscopios convencionales.
Es cierto que hay otros tipos microscopios muy superiores al microscopio invertido en términos de aumento. Por ejemplo, el microscopio electrónico puede alcanzar aumentos 5000 veces superiores a los del microscopio invertido. Sin embargo, requiere cubrir las muestras con algún tipo de metal e insertarlas en una cámara de vacío. Dado que en estas condiciones es imposible observar muestras vivas, para esto casos es muy útil emplear microscopios invertidos.
Si bien es verdad que los microscopios convencionales permiten observar muestras vivas, para ello es necesario hacer un preparado de la muestra y colocarla entre el portaobjetos y el cubreobjetos. En estas condiciones las muestras no acostumbran a estar bien hidratadas y no pueden sobrevivir mucho tiempo.
En comparación con los otros tipos de microscopio, los microscopios invertidos permiten observar muestras vivas durante largos periodos de tiempo. Esto permite analizar procesos biológicos que tienen lugar a una escala de tiempo de horas e incluso días.

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3.1 Equipo de laboratorio para cultivos celulares.

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3.1 Equipo de laboratorio para cultivos celulares.

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3.1.1  Cabina de flujo laminar.

Es un equipo que se utiliza principalmente para trabajar en condiciones estériles. Para los distintos trabajos de laboratorio a nivel profesional es necesario proteger la muestra de la contaminación, ya sea del ambiente que lo rodea o del usuario. Al trabajar con productos o microorganismos peligrosos es necesario proteger al operador y al medio ambiente. Para lograrlo disponemos de Cabinas de flujo Laminar que permiten proteger el producto que se manipula y de Cabinas de seguridad Biológicas (también conocidas como Cabinas de Bioseguridad) que permiten proteger el producto, el usuario y el medio ambiente. Es importante destacar que la selección del equipo dependerá del tipo de muestras o material con el cual se trabaje.

¿Qué son las Cabinas de Flujo Laminar? También conocidas como Campanas de Flujo Laminar brindan un área delimitada por superficies fáciles de limpiar y desinfectar con un flujo de aire filtrado a través de prefiltros que retienen las partículas más grandes presentes en el aire, y por filtros HEPA (High Efficiency Particulate Air), que son filtros de alta eficiencia capaces de retener partículas ≥ 0,3 μm con una eficiencia mínima del 99,97%.

¿Cómo funcionan las Cabinas de Flujo Laminar? Cuando todo el aire que entra a la zona de trabajo es filtrado a través de los filtros HEPA, se produce un flujo unidireccional debido a que el aire se mueve a través del área de trabajo con una velocidad uniforme a lo largo de líneas paralelas logrando un barrido o eliminación de las partículas presentes en el mismo. Anteriormente este movimiento se llamaba laminar, por esa razón los equipos se denominaron C abinas de Flujo Laminar, nombre que se sigue utilizando.

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Working principle of Laminar Air Flow & Biosafety Cabinets

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3.1.4 Cámaras de Neubauer.

¿Qué es y cuál es su función? Una cámara de Neubauer o hemocitómetro es un instrumento utilizado en medicina y biología para realizar el recuento de esporas y células en un medio líquido, que puede ser; un cultivo celular, sangre, orina, líquido cefalorraquídeo, líquido sinovial, etc.

Manejo/conteo de la cámara de Neubauer: La cuadrícula de recuento está formada por 9 cuadrados grandes, cada uno de ellos con una superficie de 1 mm2.
El cuadrado grande central (que se puede ver en su totalidad con el objetivo 10X; ver figura), está dividido en 25 cuadrados medianos (con el objetivo 40X se pueden ver los cuadrados medianos completamente; ver figura), cada uno de ellos con 16 cuadrados pequeños en su interior. Los cuatro cuadrados grandes de las esquinas (no se muestran en la figura), están formados por 16 cuadrados medianos.
El recuento se puede realizar tanto en el cuadrado grande central como en los de las esquinas, dependiendo del tamaño de las células en estudio.

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·        Stoduco. Laboratorio de cultivos. Recuperado de: https://www.studocu.com/es/document/universidad-pablo-de-olavide/cultivos-celulares/tema-5-laboratorio-de-cultivos-celulares/6537690

·        Errores en los hemogramas automatizados: los interferentes y sus correcciones. Capítulo 7. Descripción de la cámara de Neubauer. Sitio web pdf: https://www.berri.es/pdf/HEMOGRAMA.%20C%C3%B3mo%20Hacer%20e%20Interpretar%20(Libro%20+%20eBook)/9789806574939

·        Manejo de la cámara de recuento celular Neubauer improved. Cámara de contaje Neubauer improved. Sitio web: http://insilico.ehu.es/camara_contaje/neubauer_improved.php
·        Labo mersa. Cabinas de Flujo Laminar: ¿Para qué sirven?. Sitio web: https://labomersa.com/2021/02/03/cabinas-de-flujo-laminar-para-que-sirven/
·        Mundo microscopio. El microscopio invertido. Sitio web: https://www.mundomicroscopio.com/microscopio-invertido/
·        A. (s. f.). INCUBADORA DE CO2. Equipos y laboratorio de Colombia. https://www.equiposylaboratorio.com/portal/articulo-ampliado/incubadora-de-co2

·        Placas de cultivo celular | Fisher Scientific. (s. f.). https://www.fishersci.es/es/es/browse/90111011/cell-culture-dishes
·        Giralda, M. (2023, 24 enero). ¿Cuál es la diferencia entre agua bidestilada y destilada? MGM. https://mgm.cl/cual-es-la-diferencia-entre-agua-bidestilada-y-destilada/

·        S. (2021, 19 diciembre). Equipo elemental requerido para un laboratorio de cultivo. SeisaMed La Solución Inteligente. https://www.seisamed.com/equipo-elemental-requerido-para-un-laboratorio-de-cultivo

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Unidad 3: Equipamiento del laboratorio de cultivo celular.

Optativa 1. Cultivo celular animal.

Integrantes:

Alcalá Romo Clarissa Lizette

Ramirez Lopez Alondra

Gutierrez Tapia Claudia Nayeli

Esqueda Padilla Gisela

2023-A